基因工程載體xxxx(參考版)
2025-01-09 18:08本頁面
【正文】 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 53分 10秒 11:53:1023 January 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 53分 10秒 11:53: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :53:1011:53Jan2323Jan23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 , January 23, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 53分 10秒 11:53:1023 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 。 :53:1011:53:10January 23, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 :53:1011:53Jan2323Jan23 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 , January 23, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 53分 10秒 11:53:1023 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 。 :53:1011:53:10January 23, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 :53:1011:53Jan2323Jan23 1故人江海別，幾度隔山川。 , January 23, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 大腸桿菌基因表達(dá)載體的組成基因元件及常見表達(dá)系統(tǒng)。 pUC18/19質(zhì)粒載體的組成、結(jié)構(gòu)圖、優(yōu)點(diǎn)及質(zhì)?？寺≥d體用途。 標(biāo)記基因的分類及其作用。 MCS 本章重點(diǎn)掌握的內(nèi)容 掌握載體、克隆載體、表達(dá)載體、穿梭載體、質(zhì)粒、質(zhì)粒的拷貝數(shù)、質(zhì)粒的不相容性、 α 互補(bǔ)、插入失活、人工染色體載體、融合基因、融合蛋白、開放閱讀框架的概念。 分泌型表達(dá)載體 P SD 融合型表達(dá)載體 融合基因 Foreign DNA IPP 大腸桿菌 釀酒酵母穿梭載體 穿梭載體：能夠在兩類不同宿主細(xì)胞中復(fù)制、增殖和選擇的質(zhì)載體，裝有針對(duì)兩種不同受體的復(fù)制子和篩選標(biāo)記基因，便于基因克隆。 融合型表達(dá)載體 P SD Foreign DNA 融合型表達(dá)載體 融合基因 (2) 非融合型表達(dá)載體 非融合型表達(dá)載體 P SD Foreign DNA (3)、分泌型表達(dá)載體 將外源基因表達(dá)產(chǎn)物分泌到大腸桿菌細(xì)胞的周質(zhì)或直接分泌到培養(yǎng)基中，避免細(xì)胞內(nèi)的水解酶對(duì)表達(dá)蛋白的降解。 融合蛋白 (fusion protein):是指通過將兩個(gè)或多個(gè)基因的開放閱讀框按一定順序連接在一起并通過表達(dá)而形成的雜合蛋白。 (3) 篩選標(biāo)記； (4) 其它調(diào)控基因 (5) 終止子 (6) 復(fù)制原點(diǎn) (7)MCS 2. 原核表達(dá)載體的類型 (1) 融合型表達(dá)載體 —— 表達(dá)出融合蛋白； (2) 非融合型表達(dá)載體 —— 表達(dá)出完整蛋白； (3) 分泌型表達(dá)載體 —— 表達(dá)產(chǎn)物可跨膜分泌到胞間隙。 (Yeast Artificial Chromosomes YAC) YAC載體應(yīng)含有下列元件： 酵母染色體的端粒序列 酵母染色體的復(fù)制子 酵母染色體的中心粒序列 酵母系統(tǒng)的選擇標(biāo)記 大腸桿菌的復(fù)制子 大腸桿菌的選擇標(biāo)記 YAC載體的裝載量為 350 400 kb (Bacterial Artificial Chromosomes BAC) 細(xì)菌人造染色體通常是在大腸桿菌性因子 F質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建的，其裝載量范圍在 50 300 kb之間各種類型的 pBACs在大腸桿菌受體菌只能維持單一拷貝 ,BACs主要適用于： 克隆大型基因簇（ gene cluster）結(jié)構(gòu) 構(gòu)建動(dòng)植物基因文庫 第三節(jié) 大腸桿菌表達(dá)載體 表達(dá)載體 (expression vector)： 在克隆載體基礎(chǔ)上，為使插入的外源 DNA片段有效轉(zhuǎn)錄翻譯成多肽， 裝有強(qiáng)化外源基因表達(dá)的強(qiáng)啟動(dòng)子以及利于表達(dá)產(chǎn)物分泌、分離和純化的元件，這種 載體稱為表達(dá)載體。 篩選第一受體的克隆子，一般采用抗菌素抗性選擇標(biāo)記；而篩選第二受體的克隆子，常用與受體互補(bǔ)的營養(yǎng)缺陷型。 這樣的克隆載體在第一受體細(xì)胞內(nèi)可以按質(zhì)粒復(fù)制形式進(jìn)入高拷貝復(fù)制。 λEMBL Λgem1 Charon40 3 λDNA作為載體的優(yōu)點(diǎn) λDNA可在體外包裝成噬菌體顆粒，能高效轉(zhuǎn)染大腸桿菌 λDNA載體的裝載能力為 25 kb，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于質(zhì)粒的裝載量 重組 λDNA分子的篩選較為方便 重組 λDNA分子的提取較為簡便 λDNA載體適合克隆和擴(kuò)增外源 DNA片段，但不適合表達(dá)外源基因
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