基因工程-克隆載體09(參考版)
2025-02-10 10:54本頁面
【正文】 下午 8:432023n 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。20:43:1220:43:12112023n 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。下午 三月 2120:43March 三月 20238:43:12 1111,勝人者有力，自勝者強。11, 20:43:1220:43:1220:43Thursday,PMn 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 20:43:1220:43:1220:433/11/202311, 三月 21三月 21Thursday,下午 8:432023n 1空山新雨后，天氣晚來秋。20:43:1220:43:12112023n 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。下午 三月 2120:43March 三月 下午 20:43:12三月 21n 1楚塞三湘接，荊門九派通。三月 2023n 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 21三月 2120:43:1220:43:12March11, 20:43:1220:43:1220:43Thursday,PMn 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 20:43:1220:43:1220:433/11/202311, 三月 21三月 21Thursday,下午 8:432023n 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。20:43:1220:43:12112023n 1行動出成果，工作出財富。下午 三月 2120:43March 三月 下午 20:43:12三月 21n 1比不了得就不比，得不到的就不要。三月 2023n 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 三月 21三月 2120:43:1220:43:12March11, 20:43:1220:43:1220:43Thursday,PMn 1以我獨沈久，愧君相見頻。 20:43:1220:43:1220:433/11/202311, 三月 21三月 21Thursday,（ 2）根據(jù) 酶切位點 是否好用選擇載體（ 3）根據(jù) 外源基因的大小 選擇載體 (4)根據(jù)所要使用的 宿主細胞種類 選用載體。③ 插入片段大④ 宿主范圍廣⑤ 靶向性★ 國家一類新藥★ 世界上第 1個溶瘤藥物★ 基因治療，安全性高，無器官毒性。在 293 細胞中繁殖時，通過重組，可重新獲得 E1 區(qū)，出現(xiàn)復(fù)制型腺病毒 (Replication petent Adenovirus， RCAs),仍能進行病毒 DNA 的復(fù)制、晚期結(jié)構(gòu)蛋白的合成和可復(fù)制腺病毒的產(chǎn)生，激發(fā)宿主針對腺病毒的細胞和體液免疫，使載體在體內(nèi)的持續(xù)時間以及再次應(yīng)用受到極大影響第一代腺病毒載體第二代腺病毒載體n 在 E E3缺失的基礎(chǔ)上進一步去除了 E2區(qū)和 (或 ) E4區(qū) ,減弱病毒蛋白的表達n 宿主的免疫反應(yīng)仍然是獲得轉(zhuǎn)基因長期表達和重復(fù)使用腺病毒載體的主要障礙 除 E3 區(qū)外，其余的編碼區(qū)及順式作用元件均為病毒復(fù)制所必需去除腺病毒基因組的 E1和（或） E3 兩個區(qū)而獲得，其復(fù)制必須在由 5型腺病毒轉(zhuǎn)化的可組成性表達 E1蛋白的 293 細胞 中完成。編碼區(qū)又可分為早期轉(zhuǎn)錄區(qū)和晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)， E1E4為早期基因，與病毒基因組的復(fù)制及晚期基因的表達調(diào)控有關(guān)， L1L5為編碼病毒包裝蛋白的晚期基因 。ITR ITRE1 E2 E3 E4IVa2 VA L1 L2 L3 L4 L5腺病毒的基因組 DNA線性雙鏈 DNA，長約 36Kb，兩端各有一個反向末端重復(fù)區(qū)（inverted terminal repeat ITR）， ITR內(nèi)側(cè)為病毒包裝信號 ,為病毒復(fù)制必需區(qū)。細胞系： COS細胞系 （ SV40早期區(qū)段 DNA，轉(zhuǎn)化正常的猿猴受納細胞 CV1而得到的。 桿狀病毒為環(huán)狀 dsDNA,(30kb),其包涵體稱為 多角體 苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒 (AcMNPV) 秋粘蟲 家蠶核多角體病毒 (BmNPV)家蠶 棉鈴蟲核型多角體病毒 (HaNPV)棉鈴蟲baculovirus expression vector system ,BEVS)Sf9細胞特 點 昆蟲病毒載體 哺乳動物病毒載體 昆蟲病毒載體 動物病毒載體的特點 雙元細菌人工染色體 (binary BAC ,BIBAC) 和可轉(zhuǎn)化人工染色體 ( transformationpetent artificial C
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