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絞股藍(lán)50%總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究(參考版)

2024-11-18 13:13本頁面
  

【正文】 第四節(jié) 中試放大試驗(yàn)研究 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 紋股藍(lán)藥材采自湖北省神農(nóng) 。 本實(shí)驗(yàn)僅著重于研究通過大孔樹脂純化絞股藍(lán)總皂苷 ,在此過程中未考慮富 集其它的成分 ,例如大量氨基酸、有機(jī)酸 和糖類等有效或有營養(yǎng)價(jià)值的成分。 湖北中 醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 討論 .膠股藍(lán)中含有大量的糖類 ,為皂苷類成分的富集帶來了較大的困難 ,在樹 脂吸附后的水洗過程中 ,需要用大量的蒸餾水沖洗才能除去糖分等雜質(zhì)。 .水洗條件考察 取按上述條件吸附好的大孔樹脂柱 ,用蒸餾水沖洗 ,流速為 ?~,每 個(gè)流分收集 ,濃縮至 ,用 反應(yīng)檢識(shí) ,當(dāng)反應(yīng)呈陰性時(shí) ,停止水 洗。結(jié)果見圖。 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 .洗脫速率考察 按上述條件進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附 ,以 %乙醇為洗脫劑 ,分別以 .,/的 速度洗脫 ,分別測(cè)定乙醇洗脫物中總皂苷洗脫率 ,結(jié)果表明洗脫速率為 . /、 /時(shí)有較好的洗脫效果 ,為提高生產(chǎn)效率 ,確定洗脫流速為 /。 圖泄磊曲線圖 .乙醇洗脫濃度考察 另取樹脂四份上柱 ,按以上條件進(jìn)行吸附 ,適量水沖洗后 ,分別以適量 %.%、 %、 %乙醇以 /洗脫 ,并測(cè)定洗脫液中總皂苷含量以及所 得浸膏的純度 ,結(jié)果見表。 測(cè)定結(jié)果見圖 ?。樹脂柱上 , 以 /的流速通過。 , 直觀分析表明 ,個(gè)因 素對(duì)絞股藍(lán)總皂苷在大孔吸附樹脂上的吸附 結(jié)果分析 效率的影響程度依次為 :上樣濃度”上樣流速藥液 ,優(yōu)選 組合為 ::.方差分析表明 ,在絞股藍(lán)總皂苷的吸附過程中 ,、三因素 有顯著影響 ,且因素影響極為顯著。 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . 表 ?方差分析結(jié)果 顯著性 . . .. . . 。試驗(yàn) ,因素及水平安 排見表。將上樣流速、 上樣藥液的濃度及值每因素各設(shè)水平 ,待吸附完全后以水洗去雜質(zhì) , 再用 %乙醇以 /流速洗脫 ,測(cè)定洗脫液中總皂苷含量。所用試棄 均為分析純 ,型分光光度計(jì)上海精密儀器廠。大孔樹脂購于北京慧德穎科技有限責(zé)任公司 。 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 第三節(jié)。與之相比 沒有很大的差別 ,經(jīng)綜合評(píng)定幾種樹脂的性能并考慮經(jīng)濟(jì)原則和實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的條 件 ,選定型樹脂純化分離樣品溶液中的總皂苷。故本實(shí)驗(yàn)決定選 用大孔樹脂對(duì)絞股藍(lán)總皂苷進(jìn)行純化。 初始濃度一吸附后濃度吸附液體積 比吸附量 ??????。 但均高于其它樹脂?!? 表五種樹脂解吸附測(cè)定結(jié)果 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)的研究 靜態(tài)解吸附實(shí)驗(yàn)表明 ,。并按下式計(jì)算洗脫率 ,試 驗(yàn)結(jié)果見表。型樹脂。型樹脂對(duì)樣品中總皂苷的 飽和吸附量比較接近 ,但均高于 :。 初始濃度一吸附后濃度吸附液體積 飽和吸附量 ??????丐磊再 ???????一 結(jié)果表明 ,在靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中 ,。三角瓶中 , 精密加入樣品溶液 ,置振蕩器上持續(xù)振搖 .使其充分吸附后 ,取上層液 測(cè)定總皂苷濃度。在 .?.有良 歸方程為 :.一 . 好的線性關(guān)系。 ..供試品溶液的制備取本品約 .,精密稱定 ,置具塞錐形瓶中 ,精密 加入甲醇 ,稱定重量 ,超聲處理分鐘 ,放冷 ,再稱定重量 ,用甲醇補(bǔ) 足減失的重量 ,濾過 ,取續(xù)濾液 ,即得。并濃縮至適量一減壓干燥 ,即得。 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 .絞股藍(lán) %提取物中總皂苷的含量測(cè)定 ..測(cè)定波長(zhǎng)的選擇根據(jù)對(duì)顯色后人參皂苷 ,對(duì)照品溶液紫外一可見光 譜的測(cè)定 ,選擇測(cè)定波長(zhǎng)為。 討論本法采用滲漉法提取絞股藍(lán)總皂苷 ,雖然提取效率較低 ,但可以避免“通 法”提取中用乙醇回流提取對(duì)絞股藍(lán)有效成分的破壞 ,也可以避免用正丁醇萃取 皂苷不完全 ,成本過高等弊端。 表 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 因素 試驗(yàn)號(hào) 總皂菩含量 % % / ~ ● 一 ● ~● ~ 。印 :取紋股藍(lán)粗粉 ,加 %乙醇浸漬 的速度進(jìn)行滲漉 ,收集 %藥材量的初漉液另器保存 ,繼續(xù)滲漉 ,俟 皂苷完全漉出 ,續(xù)漉液回收乙醇后與初漉液合并 .并濃縮至適量 ,減壓 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %,皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 干燥 ,印得。 將乙醇濃度、浸漬時(shí)間及滲漉流速每因素各設(shè)水平 ,并以總皂苷含量為評(píng)價(jià)指 標(biāo)進(jìn)行 ,‘試驗(yàn)。 第一節(jié)絞股藍(lán) %總皂苷提取物提取工藝的研究 生產(chǎn)工藝的研究 .材料、試劑與儀器絞股藍(lán)藥材采自湖北省神農(nóng)架林區(qū)松柏鎮(zhèn)絞股藍(lán) 種 植基地 ,人參皂苷 .對(duì)照品中國藥品生物制品檢定所提供 ,批號(hào) ? ,乙醇工業(yè)用乙醇 , %,其它試劑均為分析純 ,型分光光 度計(jì)上海精密儀器廠 ,型電子天平湘儀天平儀器廠。二是“大孔吸附樹脂法”即將藥材水提取 ,提液濾過 , 濾液通過大孔吸附樹脂柱 ,再依次用水、不同濃度的乙醇進(jìn)行梯度洗脫 ,制得絞 股藍(lán)總皂苷。但未見其活性部位指紋圖譜的相關(guān)研究 ,活性成分的含量測(cè)定 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 也僅僅停留于用紫外分光光度法、薄層掃描法進(jìn)行測(cè)定 ,較為滯后 . 絞股藍(lán)提取物方面的研究報(bào)道則少而又少 ,故有必要對(duì)紋股藍(lán)用現(xiàn)代 的儀器分析展開質(zhì)量控制方面的深入研究 ,對(duì)紋股藍(lán)提取物進(jìn)行提 取、純化、指紋圖譜 ,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等方面的研究 ,對(duì)絞股藍(lán)的研究進(jìn)一 步的深入。近年來 ,王龍星等””提出一種評(píng)價(jià)中藥指紋圖譜相 似性的新方法一一向量夾角法以及孟慶華等提出的色譜指紋圖譜相 似度的新算法””。指紋圖譜 ?等分子 生物學(xué)方法。國家食品藥 品監(jiān)督管理局 年第季度也下發(fā)Ⅸ中藥注射劑指紋圖譜研究的 技術(shù)要求》 ,率先要求中藥注射劑推行指紋圖譜的質(zhì)控辦法。因此 ,應(yīng)該通過色 譜指紋圖譜顯示其所含的各種成分在草藥及其制劑中是穩(wěn)定的 ,其含 量比例能保持恒定。 中藥指紋圖譜是建立在中藥化學(xué)、分析化學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)上的綜 合鑒別手段 ,近年來色譜技術(shù)的日益發(fā)展 ,檢測(cè)手段和能力的不斷增 強(qiáng)為指紋圖譜的研究提供了良好的工作平臺(tái) ,國外對(duì)天然藥物的認(rèn)識(shí) 是基于全面的化學(xué)成分及藥理學(xué)研究的基礎(chǔ)之上 ,所含化學(xué)成分是對(duì) 其質(zhì)量評(píng)份的依據(jù) ,美國允許草藥保健品申報(bào)資料可以提供色譜指紋圖鑒別資料“” .在 年草藥評(píng)價(jià)指導(dǎo) 原則””中也有規(guī)定 , 如在“ ”及“ ”章節(jié)中都提到 “如果不可能鑒別有效成分 ,則鑒別一種或幾種特征成分如色譜指 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 紋圖譜以保證制劑和產(chǎn)品質(zhì)量的一致””。 ”。分析色 譜指紋圖譜強(qiáng)調(diào)的是“準(zhǔn)確的辨認(rèn) ”而不是“精密 的計(jì)算 ” 。指紋圖譜必須具 備指紋惶 ,印 :專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性 .中藥指紋圖譜借用了法醫(yī) 學(xué)的指紋鑒定的概念 ,不強(qiáng)調(diào)個(gè)體的絕對(duì)唯一性 ,而強(qiáng)調(diào)同一藥材群 體的相似性 ,即物種群體內(nèi)的唯一性。 大孔吸附樹脂純化中藥有效 成分效果常因純化物質(zhì)的理化性質(zhì) 的不同而有所不同“” .常以比上柱量 , 、比吸 湖北中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文 第頁絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 .比洗脫量 , 、吸附率、 附量 , 解吸率、精制度等為評(píng)價(jià)指標(biāo) ,考察提取液預(yù)處理 ,值、溫度 . 鹽效應(yīng) ,濃度、樹脂種類、用量、洗脫值 ,速度三方面 ,確 定純化中藥有效成分的優(yōu)化工藝條件 . 第六節(jié) 指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用 目前 ,指紋圖譜作為中藥材單味藥和復(fù)方全組成 及其提取物的質(zhì)量控制方法 ,己經(jīng)成為國際公認(rèn)的控制中藥或天然藥 物質(zhì)量的最有效手 段之一 .指紋圖譜 系指某種中藥材 或中成藥經(jīng)適當(dāng)處理后采用一定的分析手段得到的能夠標(biāo)示該中藥 特征的色譜、光譜或其他圖譜。在苷類成分的提取 液中 ,親水性強(qiáng)的植物成分如糖類、鞣質(zhì)等常與苷類同時(shí)被提出 ,用 弱極性的大孔吸附樹脂吸附后 ,很容易用水將糖等成分洗脫下來 ,然 后再用不同濃度的乙醇洗脫被大孔樹脂吸附的苷類 ,達(dá)到純化目的。大孔吸附樹脂是一種不含交 換基團(tuán)的具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑 ,主要以苯乙烯 ,【一甲基苯 乙烯 ,【一甲基丙烯酸甲酯 ,丙腈等為原料 ,加入一定量致孔劑二乙 烯苯聚合而成 ,由于所選用的單體分子結(jié)構(gòu)不同 ,大孔吸附樹脂按極 性不同可分為非極性 .中極性、極性和強(qiáng)極性。 樣品乙醇提取后 ,石油醚脫脂 ,水層濃縮至于 ,以乙醇定容。 第頁 湖北 中醫(yī)學(xué)院屆碩士畢業(yè)論文絞股藍(lán) %總皂苷提取物制備工藝、指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 ..薄層掃描法““ 樣品采用高效薄層板分離或硅膠板分離后 ,顯色。以 人參皂苷。 ..柱層析一比色法“” 樣品以甲醇回流提取 ,回收甲醇 ,殘?jiān)铀芙?,以水飽和的正 %甲醇水溶液溶解后上氧化鋁柱 丁醇萃取 ,
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