納米粒子介導(dǎo)血管緊張素ii的1型受體相關(guān)蛋白對(duì)大鼠血管內(nèi)膜(參考版)
2025-07-24 04:31本頁(yè)面
【正文】 制備包含在醫(yī)用蛋白膠或懸浮液內(nèi)的納米粒子介導(dǎo)的ATRAP基因制劑，使其可以直接在術(shù)中涂于受損血管外膜或通過腔內(nèi)介入的方法到達(dá)受損血管，以解決目前血管外科術(shù)后內(nèi)膜增生的世界性難題。 在大鼠離體 VSMC及大鼠頸血管損傷模型上，通過納米粒子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染的方法，以 VSMC凋亡、血管炎性因子的變化及對(duì)血管內(nèi)膜增生的影響為觀測(cè)指標(biāo)，評(píng)價(jià)納米粒子攜帶 ATRAP基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的效率及進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)染率的可行性。22:2226, Chin Med Sci J. 2022。 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 預(yù)實(shí)驗(yàn)初步顯示 PLGA介導(dǎo)的 ATRAP有較好的穩(wěn)定性，釋放時(shí)間約 1014天可到達(dá)平臺(tái)期，也已初步在大鼠血管內(nèi)膜及中膜 VSMC內(nèi)觀察到納米粒子轉(zhuǎn)染后 ATRAP的 mRNA及其蛋白產(chǎn)物的表達(dá)。 觀察指標(biāo)： 納米粒子介導(dǎo)的 ATRAP基因制劑的轉(zhuǎn)染效率 ，觀察最佳給藥途徑、時(shí)間及藥物濃度。 將不同濃度的納米粒子 ATRAP懸浮液或在生物蛋 白膠中，涂抹在局部損傷的血管外，縫合皮膚切口。 技術(shù)路線： 雄性 12周齡的 SD大鼠被用于本實(shí)驗(yàn)。 MCP TNFa、 IL IL6mRNA的表達(dá)。 免疫組織化學(xué)染色觀察 ATRAP對(duì)炎性細(xì)胞因子的 抑制作用。 PCNA用于測(cè)定細(xì)胞增生情況。 觀察指標(biāo)： 納米粒子介導(dǎo)的 ATRAP的轉(zhuǎn)染效率（已有部分預(yù) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。 免疫組織化學(xué)染色用于觀察血管形態(tài)學(xué)的變化、 PCNA、 TUNEL、 MCP TNFa、 IL IL6等在 血管組織中的變化。 利用納米粒子載體系統(tǒng)，將納米粒子 ATRAP或 空納米粒子轉(zhuǎn)染在局部損傷的血管，浸潤(rùn) 15分鐘， 縫合血管及皮膚切口。 技術(shù)路線： 雄性 12周齡的 SD大鼠被用于本實(shí)驗(yàn)。 bax、 bcl bcl xLmRNA水平的表達(dá)，抗體購(gòu)置 于（ Santa Cruz Biotechnology） 三、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分 在被氣囊導(dǎo)管損傷后的大鼠頸動(dòng)脈局部轉(zhuǎn)染納米 粒子介導(dǎo)的 ATRAP，論證其在體內(nèi)對(duì) VSMC增殖的 抑制作用和凋亡的促進(jìn)作用。 凋亡細(xì)胞的檢測(cè)（ terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick endlabeling ， TUNEL)。 觀察指標(biāo)： 同位素結(jié)合分析實(shí)驗(yàn)觀察 AT1R的表達(dá)及 ATRAP的 轉(zhuǎn)染率。 電泳遷移率變動(dòng)分析 (Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)用于檢測(cè)核因子 kB（ NFkB）。 納米粒子介導(dǎo)的 ATRAP轉(zhuǎn)染后的 VSMC活性。因 8代以后的 VSMC中的 AT1R的表達(dá)明顯下降， 58代的 VSMCs將被用于 本實(shí)驗(yàn)。 二、體外實(shí)驗(yàn)部分 利用納米粒子介導(dǎo)的 ATRAP轉(zhuǎn)染的 VSMC，觀察 ATRAP的細(xì)胞毒性及其在體外對(duì) VSMC增殖的抑制 作用和對(duì)凋亡的促進(jìn)作用，并探討其可能的信號(hào)傳 導(dǎo)途徑。 ? DNA體外釋放：稱量納米粒子 DNA， TE溶解，恒溫?fù)u床振蕩， 48小時(shí)后 15000r/min離心，測(cè)定上清中 DNA含量。 ? 將 ATRAP基因質(zhì)粒加入適量二氯甲烷（ PLGA）溶液中，在冰浴條件下高速攪拌至油包水乳液；再加入 PVA水溶液繼續(xù)攪拌成水包油包水乳液，攪拌揮發(fā)有機(jī)溶劑、離心、收集沉淀、冷凍干燥備用。 ? 檢測(cè)包含在生物蛋白膠或懸浮液內(nèi)的納米粒子介導(dǎo)的 ATRAP基因質(zhì)粒對(duì)大鼠頸動(dòng)脈的轉(zhuǎn)染效率。 ? 利用制備的大鼠頸動(dòng)脈損傷模型，觀察納米粒子介
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