【正文】 按下表進行操作??同時做兩份??一份放置37℃水浴??一份放置20℃室溫??1h后看結果。4??1完全抗體檢查法(1)材料??受檢者血清及5??紅細胞生理鹽水懸液對象(供血者或孕婦的丈夫)5??紅細胞生理鹽水懸液(2)操作方法??取小試管4支??分成2排??每排2管??分別標明“受血者”和。(9)配血人員精力要高度集中??嚴防出現差錯??配血標本、標準血清用完及時放入冰箱內保存??以防細菌繁殖。(7)若獻血者血液造成的假凝集??可用生理鹽水洗滌紅細胞三次。(5)冷凝集造成的假凝集??可把配血管放入37℃水浴箱3分鐘??取出立即觀察結果。(3)緊急用血??來不及查血型和配血??可復查庫存“O”型血的血型??確為“O”型可不配血直接發(fā)給臨床搶救用??留有時間查清病人血型交叉配血 后繼續(xù)輸血。(2)一般天然抗體選用鹽水介質配血??方法簡單??時間短。??6??胎盤血內含有的華通膠、輸過右旋糖酐、試驗時所用的器皿不潔??均易產生假陽性??可洗滌紅細胞后配血。??3??多凝集??少數人的紅細胞??可被部分正常人的血清凝集 .但又非屬配合禁忌 .可用吸收抑制試驗或吸收放散試驗明確血型后 .再做交叉配合 .4??紅細胞懸液過濃或形成緡錢狀?！炯訇栃浴??1??室內溫度過高、過低??樣本干燥均可影響結果??室溫低于15℃以下??又易出現冷凝集。??4??觀察時間不夠15min。??3??嚴重貧血、老人、小兒患者凝集效價較低?！炯訇幮浴??1??診斷試劑放置室溫或使用過久??凝集效價降低??以致誤將A2型定為O型??A2B型定為B型。自身免疫性溶血性貧血者??有時血清中有非特異性抗體??則對供血者均可出現凝集??須參照自身對照管??若PS+DC管反應較弱??受血者急需輸血??可以試輸。(3)注意事項??抗人球蛋白交叉配合試驗用受血者血清??不用血漿。結果判讀??先看陰性、陽性對照是否符合??再看PS+DC、PC+DS管是否凝集??無凝集的可以輸用。各試管加入抗人球蛋白試劑1滴。(2)操作方法?? ??取小試管5支??分別標明PS+DC、DS+PC、陽性、陰性及自身對照??并按下表加入反應物。3??4抗人球蛋白法交叉配合試驗(1)材料?? ??受血者與供血者血清和洗滌3次的5??紅細胞懸液。以抗Rho(D)試劑加O型Rho(D)陽性紅細胞作陽性對照。置37℃水浴中3060min后??觀察結果。(1)操作方法??取試管4支??分別標明主、次管和陰性、陽性對照。3??3蛋白水解酶法交叉配合試驗蛋白水解酶包括木瓜酶、菠蘿酶、無花果酶、胰蛋白酶等。(10)陰性試驗??加1滴IgG致敏的紅細胞??離心并觀察有無凝集??如果沒有凝集??重做試驗全過程。(8)置于37℃孵育15—30min??即刻離心??觀察有無凝集??記錄結果。(6)混勻??即刻離心??以3000r??min離心15s。(4)主管加受血者血清2滴??供血者紅細胞LISS懸液2滴。(2)用LISS將受血者、供血者紅細胞洗滌1次。若還有反應??用吸收抑制試驗、吸收放散試驗??明確抗體后輸血??若為白細胞、血小板抗體??可試輸除去白細胞、血小板的血液。④搖動玻片??觀察凝集結果??(2)注意事項??長期反復多次輸血的患者??不但交叉配合困難??且易發(fā)生輸血反應。次側加供血者血清2滴和受血者5??紅細胞1滴?！静Ｆā?無離心機的情況下可采用)取玻片1塊??主測標明PS+DC??次側標明DS+PC。c??如果是天然凝集素??其效價高凝集力強也最好不輸??以防破壞受血者的紅細胞。取出先用肉眼觀察??再以鏡檢判斷結果a??凡主測有凝集現象時不能輸用。亍次管中加入供血者血清(DS)2滴和受血者5??紅細胞懸液(PC)2滴??混勻??作交叉配合。分離受血者和供血者血清??配置5??紅細胞懸液。(3)注意事項??漱口后留取唾液??以免食物殘渣混入??為增加唾液分泌??待檢者可嚼蠟、石蠟膜或橡皮條??但不能嚼口香糖或其它含糖或蛋白質的食品??如果當日試驗用??血型物質可置4℃冰箱保存??若暫時不用??可置低溫冰箱保存??可保留其活性幾年??每次試驗最好備有分泌型和非分泌型唾液作對照。混合后??放置室溫(20℃)lh??觀察結果。混勻后??置室溫(20℃)30min。第2管各加入待檢者唾液0??1ml??自第2管起作倍量稀釋??第10管為對照管。結果判讀??對照??分泌型不凝集??非分泌型凝集待檢者??不凝集為分泌型??凝集為非分泌型Lewis試驗??對照??陽性不凝集??陰性凝集待檢者??不凝集為Lea陽性??凝集者為Lea陰性4)血型物質效價測定:取小試管10支??依次編號。各加入5??洗滌并與抗體相對應的紅細胞懸液1滴。在相應的試管中加入唾液1滴??在對照管中加入生理鹽水1滴。對Lewis試驗分別標明待檢者、Lewis陽性、Lewis陰性和生理鹽水。陽性對照應該有Le( a+b)的紅細胞??陰性對照應該有Le( ab)的紅細胞??試劑對照用生理鹽水。對Lewis分泌者??使用Lea陽性和Lea陰性人的唾液。3)唾液中血型物質的檢測??準備唾液做陽性或陰性對照。振搖試管架使之混勻??置室溫1h后??觀察結果。第1—4排的第1和第2管分別加抗A、抗B、抗H、及抗Lea血清0??1ml??從第2管開始倍量稀釋。2)試劑血清修正液的制備??取小試管分成4排??每排5管??第1排分別標明A1一A5??第2排B1B5??第3排H1H5??第4排Le a 1—Leb5。(2)操作方法??1)唾液的留取??將自然流出的唾液5—10ml??盛入干燥清潔的容器(小燒杯、三角瓶或粗口試管等)內??在水浴中煮沸10min(以滅活能使血型物質不活化的唾液酶??同時也破壞常見存在于唾液中的抗A及抗B)。因此??檢測唾液中各種血型物質??可作為判定血型的一個輔助證據。2??8血型物質檢測A、B、H抗原不僅存在于人的紅細胞上??而且廣泛分布在組織及體液中??Lewis血型抗原存在亍唾液和血漿中??這些物質稱為血型物質??它們?yōu)槎嗵穷愐话肟乖ewis抗體在鹽水中凝集紅細胞時凝集塊易碎??取出試管不宜搖動??以免出現假陰性。待檢者??1排試管凝集??為Le(a+b)型2排試管凝集??為Le( ab+)型2排試管均凝集為Le (a+b+)型2排試管均不凝集者Le( ab)型若出現弱反應??應作間接抗人球蛋白試驗。(3)結果判讀?；靹??3000r??min離心15s。(1)材料??抗Lea、抗Leb試劑血清待檢者5??紅細胞懸液已知Le( a+b)Le(ab+)的5??紅細胞懸液其它材料同ABO血型鑒定??(2)操作方法??取6支小試管排成2排??每排試管分別標明待檢者、Lea和Leb對照??于第2排試管中分別加入抗Le a 血清和抗Leb血清各l滴。Lewis抗體常見于從未接受過輸血或任何已知抗原刺激的人??因此認為是天然產生的。貯存的紅細胞反應能力減弱??使紅細胞定型造成困難??所以作P血型定型時,要求血樣本較新鮮。(3)結果判讀??對照??P1對照凝集??P2對照不凝集待檢者??凝集為P1型??反之為P2型(罕見型例外)。如需要時可作此項檢查。抗P1也很少引起體內溶血。由于抗M和抗N血清系動物免疫所得??因此陰性對照常顯示弱陽性反應??如果陰性對照的結果比弱反應強??則試驗結果無效。對照??陰、陽對照正確凝集待檢者??左側凝集為M型??右側凝集為N型??兩側均凝集為MN型。轉動平板數次??室溫下準確放置15min后??觀察結果。按標記各加待檢者、已知M陽性及陰性和N陽性及陰性5??紅細胞懸液1滴。3排分別標明待檢者、陽性對照、陰性對照??每排左側標明M??右側標明N。(1)材料??抗M和抗N試劑血清??待檢者5??紅細胞懸液??已知M和N陰、陽性對照5??紅細胞懸液。2??5 MN血型鑒定免疫抗M和抗N抗體能引起早產、死胎、新生兒溶血病及配血不合等。同時作陰、陽性對照??結果均符合??而受檢紅細胞與數種抗血清的作用結果不一致??陰、陽性均有??則受檢者為Du型。(1)酶介質凝集試驗法??用三份來自不同個體或不同批號的抗血清重新鑒定疑為Rh陰性的受檢者紅細胞。這種抗原稱為Du??常被誤定為Rh陰性。2??4 Du型鑒定某些Rh(D)抗原很弱??對某些抗Rh(D)血清顯陽性??對另一些抗Rh(D)血清則顯陰性。于抗D、陽性對照和陰性對照小格內分別加入待檢者5??紅細胞懸液、陽性紅細胞和陰性對照紅細胞懸液各1滴??用干凈玻棒將二者充分混合??連續(xù)輕輕傾斜轉動平板??一般在2min內觀察結果??或按試劑說明書規(guī)定的時間觀察結果。2)平板法??取潔凈平板1塊??用記號筆劃出反應小格??分別于左、中、右注明抗D、陰性對照和陽性對照。取出輕輕擺動??觀察有無凝集??結果判讀陽性:抗D試管凝集。需要時??一方面動員捐出血液??另一方面須提高警惕??以免接受不相合的血液而發(fā)生意外?？筊h(D)陰性者??應作間接抗人球蛋白試驗??以免遺漏Du型。傾斜試管肉眼觀察??如肉眼觀察有疑問者再作鏡檢。混勻??置37℃水浴箱中1h??觀察結果??若無凝集??應查找原因。第3排各管分別加入待檢者紅細胞懸液、陽性對照、陰性對照紅細胞懸液各1滴。將待檢者紅細胞及對照紅細胞用生理鹽水洗滌1次(有溶血的紅細胞除外)??配成5??的紅細胞懸液。37℃水浴箱??待檢者紅細胞??陰性、陽性對照紅細胞??其它材料同ABO血型鑒定??(2)操作方法??【蛋白水解酶法】(包括菠蘿酶、木瓜酶、無花果酶、胰蛋白酶等)1)以菠蘿酶介質法為例??取菠蘿酶1g加pH 5??5磷酸鹽緩沖液100ml??充分振搖??混勻??置37℃水浴30min??離心沉淀后??取上清液??即為1??的菠蘿酶液。pH5??5磷酸鹽緩沖液。常規(guī)先做D抗原檢測??必要時再做C、E、c、e檢測。2??3 Rh血型鑒定與臨床密切相關的主要有D、C、E、c、e抗原以及相應的特異性抗體。分泌型人的唾液中A、B和H物質??吸收放散試驗??亞型吸收弱??放散強??AA2亞型鑒定舉例如下??(1)材料??抗A1??抗H試劑血清待檢者5??紅細胞懸液已知5??AA2紅細胞懸液56℃水浴箱其它材料同ABO血型鑒定??(3)操作方法??取潔凈平板一塊??用記號筆劃3小格??分別注明待檢者、A1和A2對照??按標記分別加相應的5%紅細胞懸液1滴??3格中各加入抗A1血清1滴??混勻??搖動平板數次。紅細胞上H物質活性的強弱?？笰、抗B、抗A??B試劑血清??效價64??親和力在15s內出現凝集??3min時凝塊lmm3??冷凝集素效價4??應另備有一套合格的試劑血清作對照??所有待檢血型均應做正、反向定型??防止誤定血型??2??2 ABO亞型鑒定在A抗原中主要亞型為A1和A2??B亞型一般比A亞型更少。操作者必須認真細致??嚴格查對??準確報告血型結果。搖動平板數次??3—5min后先用肉眼觀察凝集現象??再以顯微鏡觀察??15min報告結果。另外3支用于反向定型??分別注明A細胞、B細胞和O細胞??正向定型試管分別加入相應試劑血清2清??再加待檢者5??紅細胞懸液2 滴,混勻??置室溫5min??反向定型試管中分別加入待檢者血清2滴??再加相應5??紅細胞懸液2滴??混勻??置室溫5min??將6支試管以3000r??min??離心15s??取出試管輕輕擺動??先用肉眼觀察紅細胞有無凝集??再用顯微鏡觀察結果??再次核對后填寫登記本及報告單或輸入計算機??試劑血清、紅細胞血型鑒定 正向定型反向定型待檢者血型抗A 抗B 抗A，BA細胞 B細胞?。霞毎　　　?　　　—+ 　　　—　　　　+－　　　+ 　　　　++ 　　　+ 　　　　++ + 　——　　　+ 　　 —+ 　　　—　　 ——　　　— 　　—OABAB【平板法】取潔凈平板(白磁板或玻板等)??用記號筆劃出反應小格??于正向定型側注明抗A、抗B、抗A??B??反向定型側注明A細胞、B細胞、O細胞?！翱笰”、“抗B”、“抗A??B”三種試劑血清和已知血型的“A”、“B”、“O”三種紅細胞。用于鑒定血型的紅細胞??在使用前應用生理鹽水洗滌1—3次??以除掉附著于細胞表面的血型物質、血漿蛋白等成份??在抗人球蛋白試驗中??被抗體致敏的紅細胞一般至少洗滌3次??壓積紅細胞用生理鹽水稀釋??配成3—5??紅細胞懸液??2 、紅細胞血型鑒定2??1 ABO血型鑒定ABO血型鑒定必須包括??用已知抗體型特異性的試劑血清檢查紅細胞的抗原(正向定型??紅細胞定型)??以及用已知血型的紅細胞檢查血清中的抗體(反向定型??血清定型)。反定型的患者血清在定型完畢后予以貼有病人姓名、床號、血型標記的標簽低溫保存一個月??以備查用。并將輸血申請單上有病人姓名、床號、聯(lián)號、抽血者的標簽粘貼于采血試管。 臨床輸血檢測技術操作規(guī)程基本操作技術1??1 血樣標本采集與處理、受血者血樣的采集與送檢??(1)患者確定輸血后??醫(yī)護人員持輸血申請單和貼好標簽的試管??當面核對患者姓名、性別、年齡、病案號、病室/門急診、床號、血型和診斷