sds-page檢測重組蛋白(參考版)
2025-07-10 12:04本頁面
【正文】 步驟試劑時間（1）固定500 ml乙醇，100乙酸，400ml dd H2O至少30min（2）浸泡75ml乙醇，17g醋酸鈉，30 min 25% 戊二醛，用dd H2O溶解后加至250ml（3）漂洗用dd H2O漂洗三次5 min /每次（4）銀染，50μl甲醛20 min用dd H2O溶解后加至250ml（5）顯色，25μl甲醛210 min視蛋白帶至深棕色用dd H2O溶解后加至250ml（6）終止 EDTANa2 2H2O10 min用dd H2O溶解后加至250m（7）漂洗用dd H2O漂洗三次5 min /每次五、思考題SDS在蛋白質(zhì)電泳中有何作用？試說明SDSPAGE中的幾個不連續(xù)性產(chǎn)生的效應(yīng)？有哪些方法可以測定重組蛋白的分子量？6 / 6。（7）漂洗：用dd H2O漂洗三次，每次5min。（5）顯色：配制顯色液（，25μl甲醛，用dd H2O溶解后加至250ml），浸泡后輕輕搖動210min，仔細觀察蛋白帶，至深棕色時立即加入終止液。（3）漂洗：用dd H2O漂洗三次，每次5min。硝酸銀染色（1）固定：配制固定液（500 ml乙醇，100乙酸，400ml dd H2O），處理至少30min。注意：戴一次性手套操作，以免手上染色；回收染色液，可反復(fù)使用多次。（2）取出分離膠，用蒸餾水漂洗數(shù)次，將膠放入脫色液，置搖床上緩慢搖動24小時，直至背景藍色褪淡，見到條帶，期間應(yīng)更換脫色液34次。染色液：90ml甲醇:水（1:1），10ml乙酸。（3）待溴酚藍前沿到達電泳槽底部時，切斷電源，戴手套取出玻璃板，小心從玻璃板上剝下凝膠以免破損，棄除濃縮膠，在分離膠右下角切去一小片，作為定位標記。點樣與電泳（1）點樣：在加樣孔中依次加入15ml樣品：0h、1h、2h、3h、4h，并在樣品的相鄰泳道點入蛋白質(zhì)Marker。（8）在垂直電泳槽中加入1Tris甘氨酸電泳緩沖液，輕輕拔出梳子，用滴管或移液器輕輕沖洗加樣孔，去除未聚合的丙烯酰胺，并用細針撥直凝膠齒。l TEMED。（5）在150ml三角瓶中配置40ml 5%濃縮膠，混勻，輕輕加在分離膠上面，插入梳子，靜置約30min，使凝膠完全聚合。注意：水作為覆蓋層可使凝膠表面變得平整，并可防止氧氣對凝膠聚合反應(yīng)的抑制作用。注意：丙烯酰胺具有一定的神經(jīng)毒性，操作時戴一次性手套；加入凝膠時動作要輕緩，以免產(chǎn)生氣泡。12%分離膠（80ml）： H2O， 30%凝膠母液， Tris（）， ml 20%SDS， ml 10%AP，32181。四、實驗步驟SDSPAGE凝膠的制備（1）正確安裝制膠板，用瓊脂糖凝膠密封底部
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1