【正文】 最后，我謹(jǐn)借此機(jī)會(huì)向所有關(guān)心和幫助過(guò)我，并且將會(huì)一直關(guān)愛(ài)我的老師和同學(xué)、朋友們表示深深的感激之情，謝謝你們！此致敬禮！ 。 感謝康老師在這一年中對(duì)我生活的關(guān)心和學(xué)習(xí)上的指導(dǎo)，以及對(duì)我愚鈍個(gè)性的寬容和善待 ，值此畢業(yè)之際對(duì) 康 老師表示最衷心的感 激 和崇高的 敬意！ 除此之外在整個(gè)論文寫作過(guò)程中，得到了 陳艷松 師姐 ，王燕冰師姐和張鶴峰師兄 的耐心指導(dǎo)和鼓勵(lì)，使本人能夠順利地完成畢業(yè)設(shè)計(jì)。 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 第三章 參考文獻(xiàn) 18 參考文獻(xiàn) [1]Bekett J B .Classification of male sterile cytoplasms in maize(Zea mays L)Crop Sci 1971,11：724726. [2]Cui X Q, Wise R P, Schnable P S, The rf2nucler restore gene of malesterilecytoplasm maize, Science , 1996,272:13341336 [3]Ford B G et al , Nuclear and cytoplasimic genes controlling synthesis of variant mitochondrial polypeptides in male sterile maize. Proc Natl. Acad. Sci. USA ,1980, 77:418420 [4]Leaving C S, The Texas cytoplasm of Maze: Cytoplasmic and disease susceptibility ,Science ,1990,250:942946 [5]何大澄，肖學(xué)媛，差異蛋白組學(xué)及其應(yīng)用，北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2022， 38： 558562 [6]王澤立，王魯昕，戴景瑞，運(yùn)用近等基因系（ NIL）、 AFLP， RFLP 和 SCR 對(duì)玉米 S 組育性恢復(fù)基因（ Rf3）的研究，遺傳學(xué)報(bào)， 2022， 28： 465470 [7]謝友菊等，用線粒體 DNA 鑒定玉米雄性不育細(xì)胞質(zhì)的研究，遺傳學(xué)報(bào)， 1988， 15（ 5）： 335337 [8]張方東， 鄭用璉，玉米 S 組細(xì)胞質(zhì)雄性不育線粒體 R 區(qū)序列與多型分析，遺傳學(xué)報(bào)， 2022，27： 824833 [9]Pring D R, et al. Unique DNA associated with mitochondria in the “S” type cytopasm of male sterile maize .Proc Natl Acad Sci USA,1977,74:2904 [10]徐尚忠 鄭用璉；李建生；劉紀(jì)鱗；萬(wàn)邦惠；李小琴 玉米細(xì)胞質(zhì)線粒體 DNA RFLP 分類研究作物學(xué)報(bào)， 2022Vol,27 [11]馮宗云等，玉米細(xì)胞質(zhì)雄性不育性的分子機(jī)理，玉米科學(xué)（ Maize Science）， ： 79. [12]馬春紅等，玉米細(xì)胞質(zhì)雄性不育 CMS 的研究進(jìn)展及分析，玉米科學(xué)（ Maize Science）， 2022， 14(1)： 4649 [13]魏磊，丁毅，胡耀軍等，紫稻細(xì)胞質(zhì)雄性細(xì)胞質(zhì)葉片全蛋白雙向電泳分析， 遺傳學(xué)報(bào)， 2022， 29（ 8）： 696699 [14]陳偉，劉占先 鄂立柱等， 玉米細(xì)胞質(zhì)雄性不育材料 CMSP 的胞質(zhì)分類研究，作物學(xué)報(bào)， 2022， 33（ 2）： 196200 [15]滕曉月 ,陳雪暉 ， 小麥 T 型細(xì)胞質(zhì)雄性不育系和保持系蛋白質(zhì)的比較研究 ， 作物學(xué)報(bào) ， 1996， 22（ 3）： 2642270 [16]He S , Lyznik A, Mackenzie S. Pollen fertility restoration by nuclear gene Fr in CMS bean: nucleardirected alteration of a mitochondrial population. Geics, 1995,139(2):955962 [17]Damerval C., Le Guilloux M. Characterization of novel proteins affected by the mutation and expressed during maize endosperm development. Mol Gen Ge,1998,257:354361 [18]Wise R P, GobelmanWemer K, Pei D, et al. Mitochondrial transcript processing and restoration of male fertility in Tcytoplasm .,1999,90(3):380385中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 第三章 致謝 19 致 謝 本篇論文是由導(dǎo)師 康定明 教授指導(dǎo)并協(xié)助完成的。 目 前一些 電泳技術(shù) 仍存在 無(wú)法根本解決的難題 ， 如：低豐度蛋白質(zhì)點(diǎn)的檢測(cè)、極酸和極堿性蛋白質(zhì)的提 取、 高分子質(zhì)量區(qū)蛋白的分離、膜蛋白的提取和 分 離等 ； 加之玉米線粒體蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)的不完備 ， 所獲得的一些差異表達(dá)蛋白質(zhì)不能被鑒定出有意義的結(jié)果。無(wú)論哪一種假說(shuō)至今都還沒(méi)有足夠的證據(jù)來(lái)證實(shí)。 本文認(rèn)為可以 在利用同一核背景不育系和保持系 基礎(chǔ) 上 ， 增加恢復(fù)系材料 ， 進(jìn)一步研究差異蛋白質(zhì)的表達(dá) ， 以探明導(dǎo)致雄性不育的真正原因。 類似現(xiàn)象在小麥、 水稻等作物上也有發(fā)現(xiàn) ， 藤曉月和陳雪暉 （ 1996） 對(duì) T型小麥兩系不同發(fā)育時(shí)期 （ 苗期、開(kāi)花期、種子 ） 的可溶性蛋白組分進(jìn)行比較研究 ,與保持系相比不育系在花藥和種子中均有特異蛋白存在 ， 在苗期葉片中則未發(fā)現(xiàn) ， 這表明雄性不育基因的表達(dá)具有明顯的時(shí)空性 ； 魏磊等 （ 2022） 研究表明不育系紫稻 A與其保持系紫稻 B的葉片蛋白圖譜之間在三葉期和分蘗期時(shí)差異均不明顯 。 本文 研究表明雄性不育系 CMSP與其保持系的生殖 器官等組織中 存在較多差異表達(dá)蛋白 條帶 ， 種子間僅有少量差異表達(dá)蛋白條帶 ，而 葉片間基本沒(méi)有差異表 達(dá)蛋白條帶 ， 說(shuō)明不育基因表達(dá)具有時(shí)空性和器官特異性 ， 與育性有關(guān)的蛋白主要在生殖 器官 中表達(dá)。 , 一般認(rèn) 為， 在不育系中 ， 線粒體功能失調(diào) ， 不能提供小孢子發(fā)育所需的足夠能量 ，導(dǎo)致花粉敗育。核內(nèi)恢復(fù)基因 Rf3對(duì) 此 DNA區(qū)域 序列表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平上有抑制作用。 已知 S型 不育性還有若干亞組的區(qū)分 ，陳偉的研究并沒(méi)有確定 CMSP與各亞組 之間 的關(guān) 系。 。 。 。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 第二章 玉米 CMS和保持系 生殖器官及其他組織蛋白質(zhì)比較 16 圖 27 保持系與不育系籽粒不同提取蛋白對(duì)比 mark。 預(yù)計(jì) 可能 是由于籽粒中的蛋白多為代謝蛋白，活性易受影響所致。而且，不育系的酸溶、水溶和鹽溶蛋白幾乎完全一致，對(duì)于保持系亦如此。如圖 27所示。 取 不育系 和保持系 的成熟籽粒 ，液氮研磨成粉。而在同一時(shí)間，保持系和不育系之間的胚乳蛋白質(zhì)表達(dá)條帶差異不大。分析結(jié)果表明， CMS及其相應(yīng)保持系間的胚 乳 蛋白質(zhì)表達(dá)條帶 不 存 在 明顯 差異。丙酮法提取蛋白后， SDSPAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色后觀察。 22天后胚蛋白。 14天后胚蛋白。 。 。 18天后胚 乳蛋白。 可以說(shuō)，在授粉 22天的后期，保持系的胚蛋白表達(dá)條帶在種類和數(shù)量上都超過(guò)了不育系。 橫向來(lái)看，前期保持系和不育系胚蛋白表達(dá)條帶的種類差異不大，在低分子量、中分子量區(qū)域胚蛋白表達(dá)條帶很吻合，在高分子量區(qū)域胚蛋白表達(dá)條帶也很相似。 縱向來(lái)看， 從授粉后 14天到 22天，不育系的胚蛋白表達(dá)條帶的種類沒(méi)有發(fā)生明顯變化，只是條帶所顯示的蛋白含量呈現(xiàn)逐漸下調(diào)的趨勢(shì) ，預(yù)計(jì)是隨著胚的成熟，含水量逐漸下降，故而所含蛋白的含量也逐漸降低，已達(dá)到可以長(zhǎng)期保持生活力的狀態(tài)。如圖 25中的 4和圖 26中的 10所示。 玉米 CMS 和 相應(yīng)保持系 胚 蛋白質(zhì)組比較 同取保持系和不育系的相同授粉天數(shù)的幼嫩籽粒的胚部分，液氮研磨成粉。 蛋白 。 18天后的胚乳 蛋白 。 3保持系授粉 22天后的胚 蛋白 。 圖 25 保持系與不育系對(duì)比 22天后的胚乳 蛋白 。在高分子蛋白表達(dá)條帶 區(qū)域亦是如此。分析結(jié)果表明， CMS及其相應(yīng)保持系間的花絲 蛋白質(zhì)表達(dá)條帶存在較明顯的差異。丙酮法提取蛋白后，SDSPAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色后觀察。 。 7. 保持系花粉水溶蛋白。 。 2。 圖 24 保持系和不育系花粉不同提取法蛋白對(duì)比 mark。醇溶蛋白沒(méi)有形成譜帶，可能是由于乙醇密度較低，導(dǎo)致在緩沖液條件下無(wú)法進(jìn)膠所致。 可以看出， 對(duì)于花粉蛋白，酸溶、水溶和鹽溶提取法所顯示出來(lái)的蛋白條帶較為相似，而且都比丙酮法顯示的蛋白條帶多而清晰。 采用 丙酮法 、酸溶 、醇溶、水溶、鹽溶等方法 提取 花粉 蛋白時(shí)，電泳 后 ，考馬斯亮藍(lán)染色 觀察。 可以認(rèn)為，利用 丙酮法提取全花藥蛋白 的操作價(jià)值不大。如圖 26中的 4所示 。丙酮法提取全花藥蛋白時(shí)，經(jīng)丙酮多次脫洗后，沉淀塊依舊為黃色，無(wú)法褪去。 保持系在低