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醇誘導(dǎo)下番茄果實(shí)的防御反應(yīng)畢業(yè)論文(參考版)

2025-06-30 16:38本頁面
  

【正文】 30:36. 35 。,AcidsPCR[J].inexpressionifstatisticalparisonfortoolexpressionL.W,HorganMDistinct roles for jasmonate synthesis and action in the systemic wound response of tomato[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2002,99: 64166421.[9]Green, . and Ryan, ..Wound inducible proteinase inhibitors in plant leaves: a possible defense mechanism against insets[J]. Science, 1972,175: 776777.[10]PenaCortes H,SanchezSerrrano JJ,Mertens R. Abscisic acid is involved in the woundinduced expression of the proteinase inhibitor II gene in potato and tomato[J]. Proceedings ofthe National Academy of Sciences, USA, 1989,86:98519855.[11] Farmer, . and Ryan, precursors of jasmonic acid activate the synthesis of woundinducible proteinase inhibitors[J]. Plant Cell,1992,4: 129134.[12]孔垂華,[J].植物生態(tài)學(xué)報(bào), 2003, 27(4): 561566.[13]張運(yùn)濤,董靜,王桂霞. 草墓香味的形成和香味育種[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,37(7):10391044.[14]劉明馳,郝靜,[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009,5:14451450.[15]蘇新國,鄭永華,馮磊,[J].植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào),2003,29(l):5258.[16]孫清鵬,[J].植物學(xué)通報(bào),2003,20(4):481488.[17]苗雨晨,董發(fā)才,[J].生物學(xué)雜志,2001,18(2):47.[18]參考文獻(xiàn):[1]潘永貴,[J].植物生理學(xué)通訊,20,36(6):568572.[2]O39。學(xué)生將秉承諸位老師的優(yōu)良作風(fēng),在今后中唱響人生絢麗的音符。致謝感謝我的指導(dǎo)老師曹穎老師,她嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖黠L(fēng)和言傳身教的品質(zhì)深深地感染了我,她的思維方式也將會(huì)一直是我工作、學(xué)習(xí)的榜樣;她對(duì)科學(xué)的執(zhí)著和循循善誘的教導(dǎo)給予了我無盡的啟迪;再次感謝她在整個(gè)畢業(yè)設(shè)計(jì)過程和論文的編輯過程中的細(xì)心指導(dǎo)。隨著香葉醇或葉醇處理的時(shí)間延長,經(jīng)過醇誘導(dǎo)后的inhII基因的表達(dá)量越高。隨著香葉醇或葉醇處理的時(shí)間延長,經(jīng)過醇誘導(dǎo)的CDI基因的表達(dá)量越高。同時(shí)表明香葉醇誘導(dǎo)能夠引起植物的防御性反應(yīng)。本文主要通過對(duì)PPO多酚氧化酶比活性測定和實(shí)時(shí)定量PCR分析防御相關(guān)基因的表達(dá),研究了醇誘導(dǎo)后番茄果實(shí)的次生代謝及其相關(guān)信號(hào)途徑。第4章 結(jié)論近年來,植物誘導(dǎo)抗性的研究報(bào)道較多,尤其是昆蟲取食誘導(dǎo)的植物間接防御,已經(jīng)成為新的研究熱點(diǎn)。葉醇處理3d時(shí)。受損傷誘導(dǎo)的 PIN 基因主要有半胱氨酸蛋白酶抑制劑CPIN、絲氨酸蛋白酶抑制劑 SPIN 和胰島素蛋白酶抑制劑 TPIN 基因。 Ryan,1981),且這種積累是局部和系統(tǒng)性的(Cordero et al.,1994)。PIN 抑制昆蟲消化性蛋白酶,導(dǎo)致昆蟲由于饑餓而生長遲緩和死亡。結(jié)果表明隨著香葉醇誘導(dǎo)的時(shí)間越長,經(jīng)過香葉醇誘導(dǎo)的PS基因的表達(dá)量越低;隨著葉醇誘導(dǎo)的時(shí)間越長,經(jīng)過葉醇誘導(dǎo)的PS基因的表達(dá)量越高,同時(shí)香葉醇和葉醇浸泡組的PS基因表達(dá)量最高。圖6醇誘導(dǎo)對(duì)PS基因表達(dá)的影響從圖6可以看出,與葉醇處理番茄果實(shí)1d后的PS基因表達(dá)相比,香葉醇處理1d和3d時(shí)。結(jié)果表明隨著香葉醇或葉醇處理的時(shí)間延長,經(jīng)過醇誘導(dǎo)的CDI基因的表達(dá)量越高;同時(shí)對(duì)于香葉醇和葉醇處理時(shí)間相同的材料,受香葉醇影響的CDI基因的表達(dá)量較后者高。圖5 醇誘導(dǎo)對(duì)CDI基因表達(dá)的影響從圖5可以看出,與葉醇處理番茄果實(shí)1d后的CDI基因表達(dá)相比,香葉醇處理1d和3d時(shí)。結(jié)果表明LOX屬于早期基因,隨著香葉醇或葉醇處理的時(shí)間延長,經(jīng)過醇誘導(dǎo)的LOX基因表達(dá)量越低。葉醇處理3d時(shí),其相應(yīng)的LOX基因相對(duì)表達(dá)量占葉醇處理1d的2%??梢奓OX基因的表達(dá)水平與植物的防御反應(yīng)相關(guān)。在番茄葉片上,TomLOXD 基因的表達(dá)可由損傷誘導(dǎo),TomLOXD 解碼的葉綠體 LOX 是類十八烷防御信號(hào)途徑的一個(gè)組成成分,在植物的害蟲防御中起作用(Heitz et al., 1997)。如在 Arabidopsis(Belland Mullet, 1993)、大豆(Sarawitz and Siedow, 1996)、馬鈴薯(Royo et al., 1996)上的 LOX mRNA 積累可由昆蟲攻擊引起。 醇誘導(dǎo)對(duì)LOX基因表達(dá)的影響脂肪氧合酶( lipoxygenase, LOX)基因是真核細(xì)胞中普遍存在的酶,能將長鏈不飽和脂肪酸氧化成它們的過氧化合物。 醇處理對(duì)防御相關(guān)基因LOX, CDI, PS, inhII表達(dá)的影響 熒光定量PCR擴(kuò)增效率、相關(guān)系數(shù)和溶解曲線圖3基因的擴(kuò)增曲線在熒光定量PCR儀上,通過熒光定量PCR獲得了基因的擴(kuò)增曲線。盡管在410nm下測定的PPO酶活性,在數(shù)值上與在525nm下測定值存在較大的差異,但整體的趨勢是一致的,表明這兩個(gè)吸收波長均可被用來測定PPO酶活性的變化。葉醇處理1d和3d時(shí),多酚氧化酶比活性(410nm波長下),;。對(duì)PPO酶活性的誘發(fā)明顯高于噴施處理。圖1 香葉醇和葉醇誘導(dǎo)下番茄果實(shí)的PPO比活性(525nm波長)從圖1可以看出,與未處理的對(duì)照相比,噴施10mM香葉醇和葉醇均引起多酚氧化酶活性的提高,且隨處理時(shí)間的延長,酶活性也明顯增加。在本實(shí)驗(yàn)中,通過波長掃描,確定了兩個(gè)波長410和525nm下,均存在較高的吸收峰。研究已經(jīng)表明,PPO 含量和活性是組織產(chǎn)生褐化的內(nèi)在原因,它與植物的防御反應(yīng)有關(guān)。PPO 在 pH 5~7 之間具有活性,但沒有明顯的最適 pH。第3章 結(jié)果與分析 香葉醇和葉醇的誘導(dǎo)對(duì)番茄果實(shí)多酚氧化酶活性影響多酚氧化酶(PPO)是催化酚類氧化的各種酚酶的總稱,通常包括多酚氧化酶、絡(luò)氨酸酶和兒茶酚酶。 實(shí)驗(yàn)采用相對(duì)定量的方法,分析目的基因在樣品組與對(duì)照組間差異表達(dá)的倍數(shù)()。Biotech公司)進(jìn)行,每組樣品重復(fù)三次。PCR反應(yīng):用RealMasterMix(SYBRC保存樣品。C 1 h,70176。 熒光定量PCR分析1)逆轉(zhuǎn)錄:將各個(gè)RNA樣品的濃度調(diào)整為200 μg/mL,于 mL Ep管中,40 μL反應(yīng)體系:10 μL RNA 1 μL polyT18 (10 μmol/L)18 μL H2O混勻,短暫離心后70176。C,7,500 g離心5 min;6) 倒掉乙醇,常溫干燥RNA沉淀10 min,加入50 μL無RNA酶的H2O,并于55176。C,12,000 g離心10 min。C,12,000 g離心15 min。電泳裝置:用清潔劑清洗后用流水沖洗,1% NaOH浸泡過夜,DEPC處理并滅菌過的水徹底沖洗后用無水乙醇清洗干燥。其他試劑:試劑配好后,% (v/v),37176。C放置過夜并高壓滅菌。塑料器皿: mol/L NaOH中浸泡10 min,用無RNA酶的水徹底漂洗干凈后高壓滅菌備用。玻璃器皿:在160176。由于RNA酶的活性很難完全抑制,預(yù)防其污染是十分必要的。3) 比色 吸取 500μL %鄰苯二酚到 2mL 試管中,將試管放入到 37℃恒溫箱中,待反應(yīng)10min后,分別加入 ,(A值);實(shí)驗(yàn)中以煮過失活的酶液為空白對(duì)照。母液B: mol/L NaH2PO4 溶液。2) 粗酶液制備 將洗凈的研缽放入冰箱冷凍室(20℃)中預(yù)冷 4h,然后將4g樣品分別放入加有 4ml 的磷酸緩沖提取液的研缽中進(jìn)行研磨,研好的樣品分裝于 的離心管中,并在 10,000rpm/min 的條件下離心 20min,取上清液即為 PPO 的粗酶液。L移液器、SG超純水器、Sartorius萬分之一電子天平、BIORED 熒光定量PCR儀 實(shí)驗(yàn)方法 PPO多酚氧化酶的比活性測定1) 材料處理 使用10mM濃度的葉醇、香葉醇分別噴施在番茄成熟果實(shí)表面,室溫下放置13 天,同時(shí)利用果盤法,將果實(shí)切片直接暴露于醇溶液中13天。L移液器、北京普析TU1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)、Eppendorf Research 100181。 儀器和設(shè)備研缽、容量瓶、玻璃棒、培養(yǎng)皿、10ml離心管、刀片、膠頭滴管、恒溫箱、Eppendorf Research 10181。TRIZOL:Invitrogen公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒:TakaRa公司。本研究以香葉醇和葉醇誘導(dǎo)的番茄果實(shí)為材料,通過測定果實(shí)多酚氧化酶活性和防御相關(guān)基因的表達(dá),研究了醇誘導(dǎo)下番茄果實(shí)的防御反應(yīng),為了解番茄果實(shí)的次生代謝及受傷防御反應(yīng)奠定一定的理論基礎(chǔ)。至今,
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