【正文】 ②（23）項(xiàng)可用無水乙醇代替；北方地區(qū)可省略。 六、蘇木素－伊紅（HE）染色HE染色是應(yīng)用最廣泛的組織病理學(xué)常規(guī)染色技術(shù)。6．脫鈣后的組織必須用流水充分沖洗。4．脫鈣時(shí)間不可過長(zhǎng)。2．脫鈣組織與脫鈣液的體積比1:30。㈢骨髓組織脫鈣：可浸泡于苦味酸乙醇飽和液（占85%）、甲醛（占10%）和冰醋酸（占5%）的混合液中（同時(shí)進(jìn)行固定和脫鈣）。 8．石蠟包埋。 流水沖洗2~3h。 6． 流水沖洗1~2h。 4． 在AF中或4％中性甲醛中固定6～12h。 2． 骨組織脫鈣前需先行固定。 冷凍不足無法切片，冷凍過度切片易碎。2．切取的組織塊大小適宜（厚度2mm），并盡快置于冷凍組織切片機(jī)上制備切片。（3）進(jìn)行組織切片的裱貼、固定和染色（與上述方法相同）。（2）連續(xù)噴射氯乙烷于組織塊上，待組織塊凍結(jié)后，改為間歇噴射，使凍結(jié)適度，立即切片。3．甲醇致冷切片（按有關(guān)廠商的儀器說明書操作）。對(duì)于已經(jīng)固定的組織塊，可用毛筆將制作滿意的切片托入水中，再用玻璃彎針將切片移至染色皿中進(jìn)行染色。（7）待組織塊冷凍適當(dāng)后，進(jìn)行切片。（5）調(diào)整冷凍溫度調(diào)節(jié)器，至切片刀和冷凍臺(tái)呈現(xiàn)霜凍。（3）將冷凍臺(tái)和切片刀致冷器上的導(dǎo)線連接在控制臺(tái)直流電源上（注意：正負(fù)電極不可接反）。將冷刀致冷器粘在刀面上。（5）組織塊也可先在4%中性甲醛中煮沸固定1min，水洗后再行冷凍切片。（4）用毛筆將切片展開，貼附于載玻片上，稍干后，置于冷凍切片固定液中固定1min，隨即進(jìn)行HE染色。（2）間斷開放液態(tài)二氧化碳桶的開關(guān)，噴凍組織塊和切片刀，使組織塊凍結(jié)和切片刀制冷。 用于切片的標(biāo)本必須未曾固定。四、冷凍組織切片的制備㈠應(yīng)用恒冷箱切片機(jī)制備切片：是目前最適用方法。加溫脫水和浸蠟過程必須應(yīng)用隔水溫箱，不得使用干烤箱操作。（5）用于組織固定、脫水、透明的試劑和浸蠟用的石蠟應(yīng)及時(shí)過濾、更換。（3）制片后剩余組織塊應(yīng)作常規(guī)石蠟包埋切片染色，進(jìn)一步診斷。5．注意事項(xiàng)（1）為了盡量縮短制片時(shí)間，必須預(yù)先作好有關(guān)準(zhǔn)備工作，備齊取材用具、試管、固定液、丙酮、酒精燈、火柴（或其他引火器）、包埋用蠟塊、載玻片和染色試劑等，放在固定部位待用。（5）將載玻片用火焰烘干（勿距火焰太近）。（3）將蠟塊置入冰水中，使其變硬。（1）用熱鑷子將預(yù)制的蠟塊表面熔化，埋入已經(jīng)浸蠟的組織塊。3．浸蠟：將已經(jīng)丙酮脫水的組織塊由試管中取出，用吸水紙去除其表面液體，隨即置入75~80℃熔化的石蠟中，待組織塊下沉、不再出現(xiàn)氣泡時(shí)（約需30s），即可包埋。（2）再向該試管中重新加入5~8 ml丙酮并煮沸2min。三、快速石蠟包埋組織切片的制備㈠煮沸固定切片法1．固定：切取大小適宜（厚度2mm）的組織塊，盡快置入裝有5~8ml 10%中性4％甲醛的試管中煮沸1min，然后已入冷水中。③乙醇、二甲苯和熔蠟的容積，要大于組織塊總體積的5～10倍以上，并應(yīng)經(jīng)常過濾，保持清潔；應(yīng)經(jīng)常檢查試劑的濃度，及時(shí)更新。（3）使用自動(dòng)組織處理機(jī)時(shí)：①合理設(shè)定的運(yùn)行時(shí)間（充分利用夜間）。（2）要嚴(yán)防因停電、機(jī)械故障等造成的組織塊損壞。 13．切片：參見上述的“㈠手工操作”項(xiàng)。 90min11．包埋（1）手工常規(guī)包埋：參見上述的“㈠手工操作”項(xiàng)。 60min10．石蠟Ⅲ 30min9．石蠟Ⅱ 30min8．石蠟Ⅰ 30min7．二甲苯Ⅱ 60min6．二甲苯Ⅰ 60min5．無水乙醇Ⅱ 260min4．無水乙醇Ⅰ 260min3．95%乙醇Ⅱ 260min2．95%乙醇Ⅰ ㈣常規(guī)切片的自動(dòng)組織處理機(jī)操作（步驟次序和各步驟的持續(xù)時(shí)間，總計(jì)需要14小時(shí)）1．乙醇－甲醛（AF）固定液需作特殊染色、免疫組化染色等的病例，可預(yù)制蠟片備用。要使用質(zhì)量好的切片機(jī)，規(guī)范地切片，精心維護(hù)切片機(jī)。切片過程中遇到的困難首先應(yīng)注意從切片前的上述各環(huán)節(jié)中尋找原因。］（11）將置放了蠟片的載玻片呈45℃角斜置片刻；待載玻片上的水分流下后，將其置于烤箱中烘烤（60～62℃，30～60min），然后即可進(jìn)行染色。（10）必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標(biāo)簽的一端），用優(yōu)質(zhì)記號(hào)筆或刻號(hào)筆準(zhǔn)確、清楚標(biāo)記其相應(yīng)的病理號(hào)（包括亞號(hào)）。蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，留出載玻片左（或右）1/3的位置用于貼附標(biāo)簽。［注意：必須水溫適宜、潔凈（尤其是水面）；每切完一個(gè)蠟塊后，必須認(rèn)真清理水面，不得遺留其它病例的組織碎片，以免污染。］（7）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為4~6μm），進(jìn)行切片，切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成帶，完整無缺，厚度適宜（3～5μm）、均勻，無刀痕、顫痕、皺折、開裂、缺損、松解等。修塊粗切片的厚度為15～20μm。（5）細(xì)心移動(dòng)刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。（4）將蠟塊固定于持支持器上，并調(diào)整蠟塊和刀刃至適當(dāng)位置（刀刃與蠟塊表面呈5176。（3）將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以15176。使用切片刀時(shí)，必須精心磨備（在低倍顯微鏡下確認(rèn)刀刃無缺口）；使用一次性切片刀片時(shí)，應(yīng)及時(shí)更新。 包埋用熔蠟的溫度應(yīng)65℃；包埋用的鑷子不可加溫過高，以免燙傷組織。⑤包埋用熔蠟使用前應(yīng)將先靜置沉淀、過濾。④包埋用的熔蠟應(yīng)純凈，熔點(diǎn)適宜。②必須嚴(yán)防各種異物污染，勿將無關(guān)組織（包括縫線、紙屑或其他異物（尤其是硬質(zhì)異物）埋入蠟塊內(nèi)。包埋時(shí)一定要首先認(rèn)真核對(duì)組織塊的病理號(hào)（包括亞號(hào)）、塊數(shù)和取材醫(yī)師對(duì)包埋面的要求，準(zhǔn)確地包入相應(yīng)的病理號(hào)小條。 （7）使用包埋機(jī)的方法按有關(guān)廠商的說明書操作。（5）將病理號(hào)小條牢固地烙貼在蠟塊一側(cè)（編號(hào)應(yīng)清晰可見）。（4）從包埋模具中取出凝固的包埋蠟塊（簡(jiǎn)稱蠟快），用刀片去除組織塊周圍的過多石蠟（組織塊周圍保留1~2mm石蠟為宜）。（2）將與組織塊相關(guān)的病理號(hào)小條置入包埋模具內(nèi)熔蠟的一側(cè)。⑤熔蠟應(yīng)及時(shí)過濾、更換。③組織塊經(jīng)二甲苯適度透明后方可轉(zhuǎn)入浸蠟過程，應(yīng)盡可能減少將透明后組織塊表面的二甲苯帶入熔蠟中。60min［注意事項(xiàng)］①熔化石蠟必須有專人負(fù)責(zé)，必須在熔蠟箱內(nèi)或水浴中（70℃）進(jìn)行，不得用明火加溫。 60min（3）石蠟Ⅲ（56~58℃） 60min（2）石蠟Ⅱ（56~58℃） （1）石蠟Ⅰ（45~50℃） 4．浸蠟③二甲苯應(yīng)及時(shí)過濾、更換。20min［注意事項(xiàng)］①二甲苯的容積應(yīng)為組織塊總體積的5～10倍以上。20min（3）二甲苯Ⅲ 20min（2）二甲苯Ⅱ 3．透明（1）二甲苯Ⅰ⑥組織置于無水乙醇內(nèi)的時(shí)間不宜過長(zhǎng)（以免硬化）。④脫水試劑應(yīng)及時(shí)過濾、更換（500ml乙醇可用于500個(gè)組織塊脫水；加入硫酸銅的無水乙醇變藍(lán)時(shí)，提示需要更換）。②用于脫水的試劑容積應(yīng)為組織塊總體積的5～10倍以上。 ㈢常規(guī)切片的手工操作（步驟次序和各步驟的持續(xù)時(shí)間）1．水洗：用流水沖洗已經(jīng)固定的組織塊30min。二、常規(guī)石蠟包埋組織切片（常規(guī)切片）的制備㈠組織塊依序進(jìn)行：①水洗，②脫水，③透明，④浸蠟，⑤包埋和⑥切片。冷丙酮（4℃）固定液用于酶組織化學(xué)染色。8．丙酮固定液染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。90ml［說明］將以上物質(zhì)混合、溶解，使用前加入甲醛10ml。 蒸餾水 升汞 無水醋酸鈉 7．B5（醋酸鈉－升汞－甲醛）固定液組織塊在4℃下固定36~54小時(shí)。 經(jīng)Bouin液固定的組織被苦味酸染成黃色，可用水洗滌12小時(shí)后進(jìn)入乙醇脫水（兼脫色）。5ml［說明］本液臨用時(shí)配制。 冰醋酸25ml 甲醛（40%） 75ml 飽和苦味酸水溶液（%） 5．Bouin固定液組織塊需固定12~24小時(shí)。 100ml［說明］配制本液時(shí)，先將升汞溶于蒸餾水中、加溫至40～50℃溶解后，再加入重鉻酸鉀，最后加入硫酸鈉，貯存待用。 蒸餾水（加至） 硫酸鈉 重鉻酸鉀 升汞 4．Zenker固定液 900ml［說明］一般組織塊經(jīng)乙醇－甲醛固定1～2小時(shí)后，即可移入95%乙醇內(nèi)脫水。 95%乙醇 100ml 甲醛（40%） 900ml2．乙醇－甲醛（酒精－福爾馬林，AF）固定液 蒸餾水 磷酸二氫鈉 無水磷酸氫二鈉 100 ml 甲醛（40%） 1．4%中性甲醛（10%中性福爾馬林）固定液㈦常用固定液⑤固定組織塊的容器要大一些。 ③固定組織塊的固定液量，一般應(yīng)為組織塊總體積的5~10倍以上。㈥組織塊的切取和固定：①由較大標(biāo)本切取用于制作切片的組織塊（取材）時(shí)，應(yīng)與標(biāo)本的斷面平行， cm(不應(yīng))，面積一般在1~1~。8．凡進(jìn)入固定程序的標(biāo)本必須連帶其正確無誤的病理檢驗(yàn)號(hào)（病理號(hào)）。6．骨組織：先鋸成小片（若是長(zhǎng)骨應(yīng)作橫向鋸片），在4%中性甲醛中固定24小時(shí)后，再進(jìn)行脫鈣。4．腎：沿腎外緣中線朝腎門方向作一水平切面（深達(dá)于腎盞），再行固定。3．肺葉：放入固定液中的肺葉漂浮于液面，需在肺表面覆蓋薄層脫脂棉。將每片肝或脾輕輕地平放于裝有4%中性甲醛的容器中，容器底面襯以脫脂棉。㈣器官、組織固定的基本方法［另參見本章第四節(jié)（病理標(biāo)本的肉眼檢查和組織學(xué)切片取材技術(shù)）］1．食管、胃、腸、膽囊、膀胱等空腔器官：依規(guī)范方法剪開后，按其自然狀態(tài)平鋪于硬紙板上（重點(diǎn)暴露黏膜面或內(nèi)表面的病變處），并用大頭針將標(biāo)本邊緣處固定于紙板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或內(nèi)表面朝向容器的液面，并覆蓋薄層脫脂棉）。小標(biāo)本的固定時(shí)間為4~6小時(shí)，大標(biāo)本為18~24小時(shí)或更久。未能及時(shí)、充分固定的干涸或腐敗標(biāo)本不能再進(jìn)行固定和用于制做切片。置放標(biāo)本的容器大小視標(biāo)本和固定液的體積而定，應(yīng)適當(dāng)大一些。病理組織學(xué)診斷檢材的制備技術(shù)一、組織的固定㈠凡需要進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的標(biāo)本（器官或組織），于離體（活體或尸體）后，應(yīng)盡快置放（浸泡）于裝有足夠量固定液的容器中固定。病理學(xué)基本技術(shù)操作第一節(jié)第三章 (三)傳染病用尸檢室：嚴(yán)格按照關(guān)于傳染病管理法規(guī)的要求建設(shè)。 8．其他相關(guān)設(shè)備 7．階梯式看臺(tái)（示教用）］5．適宜的照明裝置6．冷水和熱水供給系統(tǒng) (四)獨(dú)立設(shè)置（不隸屬于病理科）的細(xì)胞病理學(xué)科室：需要其他必要空間的基本設(shè)備（參見本節(jié)的 “三、病理科常規(guī)和快速活檢工作的基本設(shè)備”）。 其他相關(guān)設(shè)備(二)病理標(biāo)本巨檢和取材室1．便于清洗、消毒的屋頂、室壁和地面裝修2．室內(nèi)紫外線消毒設(shè)備3．室內(nèi)高效通風(fēng)設(shè)施4．封閉式高效能通風(fēng)柜廚(用于巨檢和取材，應(yīng)便于清洗、消毒，并安裝足夠照明和紫外線消毒設(shè)備)5．合于個(gè)人和環(huán)境防污染要求的上、下水系統(tǒng)（包括獨(dú)立的污水排泄系統(tǒng)和污水處理池）6．流水沖洗裝置7．冷水和熱水供給系統(tǒng)8．自動(dòng)錄音設(shè)備（酌情安裝，用于記錄醫(yī)師巨檢標(biāo)本時(shí)的語言描述）9．標(biāo)本儲(chǔ)存柜（安裝排風(fēng)設(shè)備）10．隔離服裝（消毒后使用）11．其他相關(guān)設(shè)備。 合于個(gè)人和環(huán)境防污染要求的上、下水系統(tǒng)4． 紫外線消毒柜（用于活檢申請(qǐng)單等消毒）3． 辦公設(shè)施2． 收發(fā)室1． 三、病理科常規(guī)活檢和快速活檢工作的基本設(shè)施(一)(三)保護(hù)環(huán)境免受污染。病理科的基本設(shè)施一、病理科基本設(shè)施的指導(dǎo)原則(一)保證病理科完成基本工作任務(wù)。第七節(jié) 七、對(duì)病理診斷時(shí)間較為長(zhǎng)久病例的會(huì)診，應(yīng)考慮到做出原診斷時(shí)期的診斷病理學(xué)理論、技術(shù)水平、相應(yīng)病變／疾病的定性診斷標(biāo)準(zhǔn)和原診斷病理科當(dāng)時(shí)的客觀條件。做出原診斷的病理科應(yīng)將《病理會(huì)診咨詢意見書》的原件或其復(fù)印件貼附于有關(guān)患者的病理檢查記錄單上，一并歸檔。五、接受外院的病理會(huì)診時(shí)，由會(huì)診的病理醫(yī)師簽發(fā)《病理學(xué)會(huì)診咨詢意見書》，并在該《意見書》上寫明：“病理醫(yī)師個(gè)人會(huì)診咨詢意見，僅供原病理診斷的病理醫(yī)師參考”。 三、加強(qiáng)臨床－病理會(huì)診。病理學(xué)會(huì)診一、具有一定規(guī)模的病理科應(yīng)定期舉行科內(nèi)病理會(huì)診或讀片討論會(huì)。 第六節(jié) 必要時(shí)，可由病理科向患方提供未經(jīng)染色的切片（通稱白片）。 病理科可酌情允許患方邀請(qǐng)外院的病理醫(yī)師前來病理科閱片。2．一個(gè)病例僅有一張為查見惡性腫瘤細(xì)胞的“陽性片”或“可疑陽性片”時(shí)，該陽性片或可疑