【正文】 萘 ——水楊酸等 甾體轉(zhuǎn)化：氫化可的松 —— 氫化波尼松 生產(chǎn)核酸、核苷酸、輔酶等 二、在生化分析上的應(yīng)用 酶電極、微生物傳感器（如致癌物的篩選等） 。 糖和醇類(lèi)的生產(chǎn) 果葡糖漿的生產(chǎn) 山梨糖 —— 山梨醇 乙醇、異丙醇、正丁醇等 。個(gè)別產(chǎn)率較高的值得進(jìn)一步探索。 （ 3）催化合成新的青霉素和頭孢霉素 6APA（ 7ADCA） +側(cè)鏈衍生物 —— 固定化?；福?xì)胞） —— 新的青霉素或頭孢霉素。 可由頭孢霉素 C經(jīng) Ps. pudita(惡臭假單胞菌 )產(chǎn)生的?；杆馍?7ACA。反應(yīng)原理是： （ 2）固定化法生產(chǎn) 7— ACA(7氨基頭孢霉烷酸 )和7ADCA(7氨基 3脫乙酰氧基頭孢霉烷酸 ) 發(fā)酵法生產(chǎn)的主要產(chǎn)物是頭孢霉素 C，其母核是 7ACA。使用酶法生產(chǎn) 6APA產(chǎn)率很低。 50年代酶催化水解青霉素生產(chǎn) 6APA成功。發(fā)酵法生產(chǎn) 6APA產(chǎn)量低，分離困難。 半合成是將 6APA用不同側(cè)鏈羧酸?；?，進(jìn)一步合成了許多廣譜、耐酸、抗 β內(nèi)酰胺酶、毒性低、適合不同用途的新抗生素，如氨芐青霉素、對(duì)羥芐青霉素、苯甲異惡 唑青霉素、對(duì)羥氨芐青霉素 …… 等。改變其側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，則可改變其抗菌譜、水溶性、耐酸性、和抗 β內(nèi)酰胺酶的能力。反應(yīng)式如下： （ 2）氨基酸的轉(zhuǎn)化生產(chǎn) 門(mén)冬氨酸的生產(chǎn)：利用固定化門(mén)冬氨酸酶（細(xì)胞， E. coli）生產(chǎn) HOOCCH=CHCOOH+NH3— →L 門(mén)冬氨酸 反丁烯二酸 L丙氨酸、 L鳥(niǎo)氨酸、 L瓜氨酸的生產(chǎn)：利用固定化門(mén)冬氨酸 β 脫羧酶（細(xì)胞，惡臭假單胞菌）生產(chǎn)，其原理是， L門(mén)冬氨酸 —— →L 丙氨酸 +CO2 L精氨酸 —— →L 瓜氨酸 (冷凍固定化細(xì)胞 ) —— →L 鳥(niǎo)氨酸（不冷凍） （ 3）固定化細(xì)胞直接生產(chǎn)氨基酸 谷氨酸、組氨酸、精氨酸已通過(guò)這種方法生產(chǎn)。須將它進(jìn)行光學(xué)拆分以獲得 L型氨基酸。細(xì)胞無(wú)生存能力，但仍保留組氨酸氨裂合酶的活性，故引起人們注意，有等進(jìn)一步的發(fā)展。 三、其它 交聯(lián)法 有少量嘗試，如含有天冬氨酸酶的大腸桿菌曾用多種雙功能試劑交聯(lián)，發(fā)現(xiàn)只有戊二醛交聯(lián)能獲得有活力的制劑，但所得固定化細(xì)胞顆粒太細(xì)，機(jī)械強(qiáng)度差。工業(yè)應(yīng)用上較少。 二、吸附法 細(xì)胞表面帶有電荷，因此可以通過(guò)離子交換或吸附作用結(jié)合于載體。 缺點(diǎn)： 在高濃度的電解質(zhì)（ K+、 Na+等）中顆粒不穩(wěn)定。 （ 3）固化和成型： 固化液（含 Ca2+、 Zn2+、 Al3+等多價(jià)陽(yáng)離子溶液，如），將海藻酸鈉與菌體的混合液用針形管滴入固化液中。 （ 1）海藻酸鈉溶液配制： 6g溶于 96ml水（約 6%濃度）。（天冬氨酸酶活力可提高 910倍）。 ⅲ 成型： 切成 34mm顆粒，水洗。 ⅱ 聚合： 2025℃ ， 1520min（聚合反應(yīng)約在 5min后開(kāi)始。 單體溶液： 丙烯酰胺 750g， N,N’甲叉雙丙烯酰胺40g，溶于 , 冷至 8℃ 。 聚丙烯酰胺凝膠包埋法 大腸桿菌和產(chǎn)氨短桿菌已分別用于工業(yè)化生產(chǎn) L天冬氨酸 、 L蘋(píng)果酸 。 （ 4）戊二醛處理 ： %戊二醛溶液 75ml，浸泡2448h。 （ 2）明膠液配制 ： 1克明膠，加 8ml 水溶解。 一、包埋法 載體 ：瓊脂、 明膠、 聚丙烯酰胺凝膠、 卡拉膠、 血纖維蛋白、 環(huán)氧樹(shù)脂等。 制備方法與固定化酶相類(lèi)似，但以吸附法、包埋法應(yīng)用最多。 缺點(diǎn)： （ 1）多適用于胞內(nèi)酶； （ 2）對(duì)底物和產(chǎn)物有一定限制：要求底物、產(chǎn)物易透過(guò)細(xì)胞膜。 （ 3）可催化較復(fù)雜的反應(yīng)（復(fù)合酶系統(tǒng)）。 優(yōu)點(diǎn)： （ 1）免去破碎細(xì)胞提取酶的復(fù)雜過(guò)程。 70年代迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。導(dǎo)電載體材料主要包括兩類(lèi)，導(dǎo)電高聚物載體和導(dǎo)電復(fù)合載體，前者一般是具有共軛結(jié)構(gòu)和導(dǎo)電能力的有機(jī)高聚物 ,如聚苯胺 (PAn)、聚噻吩 (PTh)、聚吡咯(PPy)及其衍生物等，后者則是在導(dǎo)電材料中復(fù)合一些特殊物質(zhì)而制得的導(dǎo)電復(fù)合載體。 ? 將適當(dāng)量的聚乙二醇 (PEG)接枝到殼聚糖上而制得的溫敏性高分子水凝膠載體，隨著溫度的改變能在溶膠 凝膠之間轉(zhuǎn)變。 56 57 環(huán)境敏感性載體： 均相催化和異相分離特點(diǎn)的環(huán)境敏感性材料成為固定化酶的新型載體，通過(guò)調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的溫度或 pH 實(shí)現(xiàn)了這一目的。 ? 納米級(jí)的鐵氧化物 則是使用較為廣泛的一類(lèi)磁性載體材料。HCl)和 N羥基琥珀酰亞胺 (NHS)將低分子量的殼聚糖縮合覆蓋到膜表面，形成雙層仿生膜并用戊二醛將脂肪酶偶聯(lián)到殼聚糖上，從而有效地降低了膜骨架對(duì)酶促反應(yīng)的干擾，提高了酶對(duì)酸堿和熱的耐受性。 53 有機(jī)高分子載體改性 ? 甲基丙烯酸甲酯 (MMA)接枝聚合到尼龍膜上，或先把苯乙烯接枝聚合到尼龍膜上再將 MMA接枝聚合到聚苯乙烯包覆層上，在膜表面引入了大量的反應(yīng)性酯基，再借助己二胺和戊二醛活化并共價(jià)固定化 β 半乳糖苷酶，膜上的載酶量達(dá)到 。 ? 原子轉(zhuǎn)移自由基聚合 (ATRP)方法，在 Si(111)表面進(jìn)行甲基丙烯酸縮水甘油酯 (GMA)的接枝聚合則在硅表面形成刷狀 P(GMA)，并可調(diào)節(jié) P(GMA)側(cè)鏈的長(zhǎng)度 51 ? 上述復(fù)合載體的傳質(zhì)性能良好，側(cè)鏈富含能與酶共價(jià)連接的環(huán)氧基，故提高了固定化葡萄糖氧化酶 (GOD)的載酶量，達(dá)到 52 ? 無(wú)機(jī)多孔材料硅藻土在低壓下強(qiáng)化吸附殼聚糖，經(jīng)戊二醛活化后共價(jià)固定化青霉素?；笗r(shí)，明顯提高了酶的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。 去乳化、洗滌： Tween去乳化和洗滌，轉(zhuǎn)移至水相。 乳化：分散相為含 1% Span 85的氯仿 環(huán)已烷。 成膜材料：尼龍 6聚酰胺、聚脲等。最后懸浮于 %NaCl溶液中 (2)界面聚合法： 化學(xué)制微囊的方法。離心（ 350g， 5min），去上清。微囊沉降完全，否則離心（ 350g， 5min），去上清。 ④ 成膜 ：去大部分上清后，立即加苯甲酸正丁酯 Span 85溶液 30ml， 1200rpm攪拌 30秒。 ③ 微囊沉降： 4℃ 放置 45min。 磁力攪拌器、磁力攪棒、燒杯 方法： ① 血紅蛋白 酶液乳化： 25ml酶液加等體積有機(jī)溶液，立即2600rpm磁力攪拌 5秒鐘。 苯甲酸正丁酯 Span 85溶液 ： 1ml Span 85加于 100ml苯甲酸正丁酯（用前配制）。 舉例： 界面沉淀法制備“人工細(xì)胞” 材料： 10%血紅蛋白溶液 (Whatman No42濾紙過(guò)濾 ) 酶液： 懸浮于 10%