固定化酶和細(xì)胞ppt課件(參考版)
2024-12-11 03:49本頁面
【正文】 通過酶催化反應(yīng)的速度即可測(cè)定復(fù)合物中酶的含量，進(jìn)而測(cè)出樣品中的待測(cè)抗原（或抗體）的量。 (1)將適宜的酶與抗原或抗體結(jié)合在一起。 ? 用 腐胺氧化酶 與 過氧化氫電極 構(gòu)成多胺生物傳感器，或用 單胺氧化酶膜 和 氧電極 組成的酶?jìng)鞲衅鳒y(cè)定肉在貯藏過程中的鮮度。 ? K大于 40，不新鮮，不宜食用，這與嗅覺檢驗(yàn)結(jié)果相一致。 ? 當(dāng) K＜ 20時(shí)，魚極新鮮，可供生食。鮮度可用 K值表示： K=肌苷 +次黃嘌呤 / ATP +ADP+AMP+IMP +肌苷 +次黃嘌呤 +尿酸 大多數(shù)魚死后 5～ 20h， ATP， ADP和 AMP已分解盡，超過 24h，鮮度主要取決于 IMP肌苷 次黃嘌呤 尿酸。 手掌型葡萄糖 (glucose)分析儀 SBA50型單電極生物傳感分析儀 SBA70型血糖乳酸自動(dòng)分析儀 ?食品鮮度 魚鮮度傳感器 在日本、加拿大等國(guó)廣泛用于魚類鮮度的測(cè)定。 從馬鈴薯中提純、經(jīng)吸附交聯(lián)得到的固定化多酚氧化酶與氧電極構(gòu)成酚傳感器，可檢測(cè)大多數(shù)酚類化合物 。 酶?jìng)鞲衅鞴ぷ髟硎疽鈭D 酶?jìng)鞲衅?主要由 固定化酶膜和變換器 組成： 固定化酶膜： 選擇性地 “ 識(shí)別 ” 并催化被檢測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)； 變換器： 把催化反應(yīng)中底物或產(chǎn)物的變量轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，通過儀表顯示出來。 生物識(shí)別元件 (Biological recognition element) ? 是酶、抗原 (體 )、細(xì)胞器、組織切片和微生物細(xì)胞等生物分子經(jīng)固定化后形成的一種膜結(jié)構(gòu)，對(duì)被測(cè)定的物質(zhì)有選擇性的分子識(shí)別能力。－ D－葡萄糖＋ O2 D－葡萄糖酸－ 1， 5－內(nèi)酯＋ H2O2 半透膜 酶膠層 感應(yīng)電極 Glucose Gluconic acid Glucose oxidase Oxygen Hydrogen peroxide Membrane Electrode 根據(jù)反應(yīng)中消耗的 O生成的葡萄糖酸和 H2O2的量，可以用氧電極、 pH電極和 H2O2電極來測(cè)定葡萄糖的含量。 三、在分析檢測(cè)中的應(yīng)用 ?Sensitive and specific ? Rapid ? Simple Biosensor 1967年 Updike等采用酶的固定化技術(shù)，將葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧電極結(jié)合，組裝成了世界上第一個(gè)生物傳感器 —— 葡萄糖氧化酶電極 。 固定化酶和電化學(xué)傳感器的結(jié)合。 2. 人工腎： 原理：將病人血液中的尿素經(jīng)脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。 ? 酶的不穩(wěn)定性使其在較短的時(shí)間內(nèi)失活。 不同固定化方法的比較 carriers Recovery of enzyme activity(%) Agar po1yacrvlamlde Gelatin carragheenan Glutaraldehyde 0 乙酰 DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 D — Ala 第三節(jié) 固定化酶與固定化細(xì)胞的應(yīng)用 一、在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用 1. 氨基?；福?Aminoacylase） 世界上第一種工業(yè)化生產(chǎn)的固定化酶 泵 儲(chǔ) 罐 反應(yīng)產(chǎn)物 離心機(jī) 消旋反應(yīng)器 固定化酶柱子 晶體 LAla LAla ADAla ALAla ADAla 世界上生產(chǎn)規(guī)模最大，應(yīng)用最為成功的一種固定化酶。 (二 ) 蛋白總量 (BCA法 ) 三、固定化酶（細(xì)胞）的評(píng)價(jià)指標(biāo) (三 )偶聯(lián)率及相對(duì)活力 偶聯(lián)率 =(加入蛋白活力一上清液蛋白活力 )/加入蛋白活力 100% 活力回收 =固定化酶總活力 /加入酶的總活力 100% 相對(duì)活力 =固定化酶總活力 / (加入酶的總活力 上清液中未偶聯(lián)酶活力 ) 100% (四 )半衰期 在連續(xù)測(cè)定條件下，固定化酶 (細(xì)胞 )的活力下降為最初活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)工作時(shí)間，以 t1/2表示。 （ 3）最適溫度和最適 pH常保持不變。 （ 1）有活性升高的現(xiàn)象。固定化酶底物特異性的改變，是由于載體的空間位阻作用引起的。影響固定化酶最適 pH值的因素主要有兩個(gè)，一個(gè)是載體的帶電性質(zhì)，另一個(gè)是酶催化反應(yīng)產(chǎn)物的性
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