病理學(xué)教研室教案(參考版)
2025-04-27 22:41本頁面
【正文】 細(xì)胞凋亡與腫瘤的防治是否經(jīng)過治療后發(fā)生凋亡，腫瘤化療療效的標(biāo)志之一增加凋亡指數(shù)與增生指數(shù)的比值已成為新的治療目標(biāo)能否同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡已成為篩選抗癌藥物的新標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡目前治療腫瘤新設(shè)想—誘導(dǎo)凋亡導(dǎo)入野生型p53抑制腫瘤增生下調(diào)突變型p5bcl2的活性與表達(dá)，減弱其對細(xì)胞凋亡的抑制抑癌基因引入瘤細(xì)胞，降低致瘤性，使腫瘤逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞引入某些細(xì)胞因子，抑制腫瘤惡性表型，使細(xì)胞喪失致瘤性應(yīng)用點(diǎn)突變技術(shù)，使異常表達(dá)基因失活或修復(fù)突變基因?qū)胨幬锩舾谢?，有助于?xì)胞凋亡凋亡與其他疾病一、細(xì)胞凋亡異常增加相關(guān)疾病神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變骨髓發(fā)育不良綜合征缺血性損傷 心梗、腎小球腎炎肝病變 病毒性和酒精性肝炎 AIDS二、細(xì)胞凋亡過度減少相關(guān)疾病自身免疫性疾?。?SLE、GN腫瘤：激素依賴性腫瘤如乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和淋巴造血腫瘤各種病毒感染：腺病毒、皰疹病毒第八節(jié) 細(xì)胞凋亡的檢測方法一、形態(tài)學(xué)觀察方法l HE染色、光鏡觀察：圓、核深染、胞質(zhì)濃縮、染色質(zhì)團(tuán)塊狀、膜“出芽”l AO染色、熒光顯微鏡觀察： ⑴活細(xì)胞核呈黃綠色熒光，胞質(zhì)呈紅色熒光 ⑵凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè)，膜有“凋亡小體”l 臺(tái)盼藍(lán)染色：細(xì)胞不著色，活體或凋亡細(xì)胞；細(xì)胞著色，死亡細(xì)胞l 透射電鏡：⑴細(xì)胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮、邊集、細(xì)胞器集中⑵細(xì)胞膜起泡和出“芽”⑶凋亡小體和凋亡小體被吞噬細(xì)胞吞噬二、DNA凝膠電泳l 檢測原理：凋亡細(xì)胞DNA斷裂有規(guī)律，180~200bpDNA片段；壞死細(xì)胞DNA斷裂無規(guī)律l 結(jié)果判斷：活細(xì)胞，一條區(qū)帶；凋亡細(xì)胞，梯狀條帶；壞死細(xì)胞，血抹片狀連續(xù)性條帶l 存在問題： ⑴ 不特征 ⑵ 凋亡無DNA斷裂 ⑶ 靈敏性差，需106細(xì)胞三、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）核小體測定l 原理：DNA斷裂有核小體，核小體由組蛋白和DNA片段構(gòu)成l 方法簡單，操作容易l 敏感性高，可檢測5102細(xì)胞四、流式細(xì)胞儀定量分析l 原理：凋亡細(xì)胞膜通透性介于正常細(xì)胞和壞死細(xì)胞之間l 特點(diǎn)： ⑴檢測細(xì)胞數(shù)量大，較準(zhǔn)確 ⑵可作許多相關(guān)分析 ⑶可確定凋亡細(xì)胞所處細(xì)胞周期檢測形態(tài)學(xué)及細(xì)胞膜完整性的HoechsPI雙染色法l 正常細(xì)胞不著色，熒光很淺l 凋亡細(xì)胞主要攝取Hoechs，強(qiáng)藍(lán)色熒光l 壞死細(xì)胞主要攝取PI（碘化丙啶）紅色DNA片段原位標(biāo)記法l 原理：熒光素、地高辛或生物素標(biāo)記的DUTP和TdT與凋亡細(xì)胞裂解后3`羥基端結(jié)合l 原位缺口轉(zhuǎn)移l 原位缺口末端標(biāo)記技術(shù)檢測細(xì)胞膜成分變化的Annexin V聯(lián)合PI法l 原理：細(xì)胞凋亡早期細(xì)胞內(nèi)側(cè)磷脂酰絲氨酸遷移至細(xì)胞膜外側(cè)；磷脂結(jié)合蛋白V同其有高度結(jié)合能力l 結(jié)果判斷： ⑴正常細(xì)胞 Annexin V、PI 均 低染 ⑵凋亡細(xì)胞 Annexin V高染，PI 低染 ⑶壞死細(xì)胞 Annexin V、PI 均 高染l 應(yīng)用價(jià)值 ⑴靈敏，假陽性低 ⑵簡單省時(shí) ⑶結(jié)果可靠，是目前最為 合理的方法
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