第三節(jié)聚合酶鏈反應(yīng)polymerasechainreaction,pcr(參考版)
2024-10-28 14:38本頁面
【正文】 能在同一時(shí)間內(nèi)分析大量的基因，實(shí)現(xiàn)生物基因信息的大規(guī)模檢測。它通過在一微小的固體載體表面固定大量的分子識(shí)別探針，構(gòu)建一組微分析單元和系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)化合物，蛋白質(zhì)，核酸，細(xì)胞或其他生物組分準(zhǔn)確，快速，大量的篩選或檢測。 DNA多態(tài)可以通過 PCR擴(kuò)增后電泳來檢出，稱擴(kuò)增片段長度多態(tài)（ amplified fragment length polymorphism, AmpFLP） 23 PCRVNTR 24 生物芯片技術(shù) ? 九十年代以來，發(fā)展了一種新的分子生物學(xué)技術(shù)，引起了人們的極大關(guān)注。 20 VNTR 酶切，電泳后的檢測結(jié)果 大 小 21 PCRVNTR檢測 22 通常，重復(fù)單位 16～ 28bp長，稱為小衛(wèi)星 DNA。散在地分布于染色體上，以插入 /缺失方式形成多態(tài)。 ? RFLP按孟德爾（共顯性）方式遺傳，是非常有用的遺傳標(biāo)記。 ? 由于堿基的變異可能倒致限制酶切點(diǎn)的消失或新的酶切點(diǎn)出現(xiàn)，從而引起不同個(gè)體的 DNA在用同一限制酶切割時(shí)，產(chǎn)生 DNA片段長度的差異。 15 DNA分析中常用的多態(tài)性標(biāo)記有 3類 ： 1） RFLP： 稱限制性片段長度多態(tài)性，為第一代多態(tài)性標(biāo)記； 2） 重復(fù)序列多態(tài)性 ：短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR），為第二代多態(tài)性標(biāo)記； 3） 單堿基多態(tài)性（ SNP） ： DNA序列的單個(gè)核苷酸的差別，為第三代多態(tài)性標(biāo)記。常用做遺傳分析中的標(biāo)記。 ? 在疑有突變的 DNA片段附近設(shè)計(jì)一對(duì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物經(jīng)甲酰胺等變性，并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳（中性膠），突變所引起的 DNA構(gòu)象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異，從而作出判斷。據(jù)此，可用于 DNA中單個(gè)堿基的替代，微小的缺失或插入的檢測。應(yīng)用于基因表達(dá)與調(diào)控的研究。 多重 PCR 9 ? RTPCR是以 mRNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用合成 cDNA。 8 ? 在同一 PCR體系中加入數(shù)對(duì) PCR引物，如果這些引物的退火溫度
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