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微生物實驗室病原微生物評估報告(參考版)

2025-04-10 03:30本頁面
  

【正文】 據(jù)報道:在重癥監(jiān)護病房(ICU)的革蘭陰性菌感染中,腸桿菌屬細菌的感染僅次于銅綠假單胞菌,居第二位。 陰溝腸桿菌的生物危害評估報告一、細菌的傳播與致病陰溝腸桿菌廣泛分布于環(huán)境中,土壤、水、污水、腐爛蔬菜和乳制品亦可發(fā)現(xiàn),在陰溝污水中含量可高達107/g。要備有帶滑石粉的乳膠手套。可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時,要戴手套。人員到非實驗室區(qū)域時,防護服必須留在實驗室內(nèi)。當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時,需采取面部保護措施(跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置),以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程,包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。污染的設(shè)備在送去修理、維護前,要按照相關(guān)的規(guī)定消毒;在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前,要按照相關(guān)的規(guī)定打包運輸。進行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療,保留書面記錄。離開該系統(tǒng)進行消毒的物料,在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝,其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前,均應(yīng)使用可行的消毒方法進行消毒,如高壓滅菌。打碎的器皿不能直接用手處理,必須用其它工具處理,如刷子和簸箕、夾子或鑷子。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉,或在丟棄前進行人工處理,要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。對于污染的銳器,必須時刻保持高度的警惕,包括針、注射器、玻片、加樣器等。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。相關(guān)的防護事宜包括:(1)操作要求實驗時,未經(jīng)實驗室主任同意,限制或禁止進入實驗室。3. 其他治療 熱水袋有助于緩解腹部不適,因為它們可引起腸道郁滯,延長發(fā)熱期,并使大便持續(xù)排菌。成人還可用諾氟沙星400mg口服每日2次或環(huán)丙沙星500mg口服每日2次?!≡跊Q定應(yīng)用抗生素時,應(yīng)考慮到疾病的嚴重程度,病人的年齡、衛(wèi)生狀況,進一步傳播的可能性和造成細菌耐抗生素的可能性等因素。無腹瀉的痢疾不會導(dǎo)致過多失水特別是氣候炎熱地區(qū)的嬰兒,通過出汗和呼吸的失水再加上嚴重腹瀉,可導(dǎo)致高張性脫水。重組活菌苗由多個型別 (或種型) 的免疫原組成,具有廣譜保護作用 ,已開始生產(chǎn)。此外還包括加強水源管理及食品衛(wèi)生監(jiān)督等3 口服菌苗預(yù)防 有鏈霉素依賴 (Sd) 株及口服重組活菌苗。房屋應(yīng)使用蚊帳紗和屏障。三、細菌的防治首先是防治:1 早期發(fā)現(xiàn),早期隔離和早期徹底治療病人外,查出帶菌者2 切斷傳染途徑, 操作食品前應(yīng)徹底洗手。,快速、敏感,可提高45%志賀菌標(biāo)本的檢出率,目前尚未廣泛應(yīng)用。,培育48h后發(fā)現(xiàn)帶有熒光的菌球為陽性。,這點可鑒別細菌性和阿米巴痢疾(因阿米巴可破壞白細胞)。糞便培養(yǎng)病原學(xué)檢查有利于確診,同時可做藥物敏感試驗以指導(dǎo)臨床合理選用抗菌藥物治療。 外觀多為黏液膿血便,無糞質(zhì)??捎檬米訌臐兲幦〔淖魍科瑱z查或培養(yǎng)。 急性期白細胞總數(shù)輕至中度增高,多在(10~20)109/L,中性粒細胞亦增高。糞便鏡檢有多數(shù)白細胞或膿細胞及紅細胞即可診斷。二、細菌的實驗室檢查及其它檢查主要根據(jù)暴露史、臨床特征與實驗室檢查診斷。ST具有細胞毒素,腸毒素和神經(jīng)毒素3種生物學(xué)活性:腸毒素性,;細胞毒性,它可以阻止小腸上皮細胞對糖和氨基酸的吸收;神經(jīng)毒性,在痢疾志賀菌引起的重癥感染者可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成昏迷或腦膜炎 ;ST在體外還可加重對血管內(nèi)皮細胞的損傷。志賀菌的致病因素主要有:;:各群志賀菌都能形成強烈的內(nèi)毒素,其作用機制包括:破壞腸粘膜上皮,造成粘膜下層炎癥,并有毛細血管血栓形成,以致壞死,脫落,形成潰瘍,出現(xiàn)粘液膿血便;使腸壁通透性增高,促進毒素吸收,引起一系列毒血癥的癥狀,如發(fā)熱,神志障礙,甚至中毒性休克;作用于腸壁植物神經(jīng),使腸蠕動失調(diào)并痙攣,尤以直腸括約肌受累明顯,因而發(fā)生腹痛,腹瀉,里急后重等癥狀;:A群志賀菌Ⅰ型和Ⅱ型能產(chǎn)生志賀外毒素(ST), ST能引起Vero細胞病變,故也稱Vero毒素(VT)。O抗原可耐熱,100℃60min不被破壞,它是分類的依據(jù),具有群特異性以及型特異性兩種抗原。在腸道培養(yǎng)基上可形成不發(fā)酵乳糖的無色半透明菌落,而宋內(nèi)志賀菌還常形成粗糙型的菌落,也因此可發(fā)生SR變異。志賀菌為兼性厭氧菌,對理化因素的抵抗力較弱,對酸敏感,在1%的石炭酸中15~30min可被殺死,因此運輸時必須采用含有緩沖劑的培養(yǎng)基。二、細菌的生物學(xué)特性志賀菌(Shigella)隸屬于腸桿菌科,分為A,B,C,D4個亞群——A群痢疾志賀菌、B群福氏志賀菌、C群鮑特志賀菌和D群宋內(nèi)志賀菌,而各亞群又可分各種血清決定型。本病不會變成慢性,也不會成為潰瘍性結(jié)腸炎的病因?qū)W因素。,但可有中毒性神經(jīng)炎,關(guān)節(jié)炎,心肌炎和罕見的腸穿孔。伴有循環(huán)虛脫的明顯脫水和電解質(zhì)喪失及死亡主要發(fā)生于<2歲的嬰兒和衰弱的成人;(2)慢性細菌性痢疾 主要是因急性菌痢治療不徹底,造成反復(fù)發(fā)作遷延不愈,病程超過兩個月以上者;若是有病史、無癥狀,結(jié)腸鏡檢或糞便培養(yǎng)陽性者稱為隱匿型菌痢,在流行病學(xué)上亦具有重要的意義;(3)攜帶者 是指恢復(fù)期帶菌、慢性帶菌者和健康帶菌者三種類型,尤其是健康帶菌者是主要的傳染源。嚴重的里急后重可造成直腸脫垂和大便失禁。3日內(nèi)大便中出現(xiàn)血液,≥20次/d,體重下降和失水嚴重。志賀菌感染相關(guān)的水瀉由內(nèi)毒素介導(dǎo)所致,因這種內(nèi)毒素可引起腸道分泌增多。感染很少或不誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫性,因此同一菌種的再感染是可能的。衛(wèi)生條件差的擁擠人群中最易發(fā)生流行,流行區(qū)的幼兒志賀菌病特別常見,而成人得病較輕。感染者和恢復(fù)期帶菌者的排泄物是傳染源,經(jīng)糞口途徑直接傳播,經(jīng)污染的食物或物體可間接傳播。弗氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌比鮑氏志賀菌和毒力特別強的痢疾志賀菌分布更廣。志賀氏菌屬的生物危害評估報告一、細菌的傳播與致病志賀菌屬是主要的腸道病原菌之一,也是引起人類細菌性痢疾的病原體。對于尿素試驗認為使用尿素斜面比使用尿素液體培養(yǎng)基安全。四、細菌的生物安全防護 根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定,人間傳播的假結(jié)核棒狀桿菌屬于三類,BSL2。:血平板-皮膚拭子培養(yǎng):510%CO2 3537℃ 4048h;喉拭子培養(yǎng):厭氧,3537℃ 1624h;菌落周圍有微小的B溶血環(huán);Hoyle 亞碲酸鹽培養(yǎng)基: 3537℃ 1648h:灰色/黑色,非常干燥的透明菌落。菌體單個或成雙,時常呈“v”型。假結(jié)核棒狀桿菌可以在血平板上產(chǎn)生輕微的溶血。它沒有動力,但觸酶呈陽性、尿素陽性。細菌末端膨大呈棒狀,菌體有時成單或成雙。主要引起家畜(羊、馬)的慢性淋巴淋巴管炎,偶爾也會引起人的淋巴結(jié)炎、肺炎等疾病。脫掉手套后,要洗手。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用,不能用于接觸“潔凈”的表面(鍵盤、電話等),也不應(yīng)當(dāng)戴著到實驗室外。防護服可以在實驗室內(nèi)處理,也可以在洗衣房中洗滌,但不能帶回家中。在實驗室內(nèi),必須使用專用的防護性外衣、大褂、罩衫或制服。涉及高濃度或大體積的傳染源時,若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機,若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開,則可在開放實驗室內(nèi)離心。(2)安全設(shè)備正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后,實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。濺出或偶然事件中,明顯暴露于傳染源時,要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi),密封運出實驗室。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前,應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進行消毒。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中,轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒,最好高壓殺菌。注射和吸取感染材料時,只能使用針頭固定注射器或一次性注射器(即注射器和針頭是一體的)。所有的操作過程應(yīng)盡量細心,避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。五、細菌的生物安全防護根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定,人間傳播的微生物名錄(待頒布)蠟樣芽胞桿菌屬于三類,BSL2。一般不需要使用抗生素治療。注意食品的貯藏和個人衛(wèi)生,防止塵土、昆蟲及其他不潔物污染食品。該菌污染的食品一般無腐敗變質(zhì)的異味,不易被發(fā)覺。、噬菌體分型。而且蠟樣芽胞桿菌在4℃、鹽濃度 18%的條件下仍能存活或生長。蠟樣芽胞桿菌的分離物應(yīng)符合下述條件:1)革蘭氏陽性產(chǎn)芽胞大桿菌,其芽胞不突出體外;2)在MYP瓊脂上產(chǎn)生卵磷脂酶而不發(fā)酵甘露醇;3)厭氧培養(yǎng)生長,發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸;4)還原硝酸鹽;5)VP陽性;6)分介L酪氨酸;7)%溶菌酶的培養(yǎng)基中能生長。以下步驟同2。2小時,檢查生長密集、典型的蠟樣芽胞桿菌。在胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中接種3管MPN系列,1010103的稀釋液各接種1mL于3管。蠟樣芽胞桿菌菌落通常是粉紅色,隨著培養(yǎng)時間的延長則更明顯。取樣品的各個稀釋液(包括1:10)(甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂)平板,用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。用上述1:10稀釋液,連續(xù)稀釋供蠟樣芽胞桿菌計數(shù)。無菌操作稱取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。本菌對氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感,對青霉素、磺胺類和呋喃類耐藥。能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素等,VP實驗陽性,可液化明膠,卵磷脂酶陽性,但多次傳代后,其生化特性常可改變。偶有產(chǎn)生黃綠色色素,在血瓊脂平板上呈草綠色溶血。在肉湯中生長混濁有菌膜或壁環(huán),振搖易乳化。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛,有動力無莢膜。根據(jù)營養(yǎng)型菌細胞的寬度分為兩類,蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌屬“大細胞菌種”。致腹瀉的腸毒素能使小白鼠致死。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不同的代謝物,引起腹瀉型綜合癥的是一種大分子量蛋白;而引起嘔吐型綜合癥的被認為是一種小分子量、熱穩(wěn)定的多肽。嚴重者還可導(dǎo)致敗血癥。中毒癥狀以惡心、嘔吐為主,偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀,病程不超過24小時,這種類型的癥狀類似于由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒。當(dāng)攝入的食品其蠟樣芽胞桿菌數(shù)量達106/克時??蓪?dǎo)致食物中毒。中毒的發(fā)病率較高,一般為60100%。 蠟樣芽胞桿菌食物中毒通常以夏秋季(610月)最高。 1950年Hauge在對挪威奧斯陸某醫(yī)院職工和病員進食甜食后引起的食物中毒研究中,首次明確指出蠟樣芽胞桿菌的致病作用。已從多種食品中分離出該菌,包括肉、乳制品、蔬菜、魚、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯以及各種甜點等。應(yīng)立即報告實驗室負責(zé)人,采取早發(fā)現(xiàn)、早報告、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施。從事結(jié)核桿菌檢測工作人員可間隔數(shù)年接種卡介苗一次??捎帽任廴久娣e大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域,邊緣用脫脂棉圍住,向紗布傾倒5%苯酚溶液或75%的乙醇溶液,浸泡2小時以上(其間適量添加溶液防止干燥),再經(jīng)紫外燈近距離(1米內(nèi))照射2小時以上;被污染的器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小時以上,實驗完成后再進行高壓消毒處理;4)如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染,應(yīng)立即停止實驗并關(guān)閉實驗室,對實驗區(qū)域和實驗室進行紫外燈照射消毒過夜;第二天對污染區(qū)域進行24小時封閉空氣熏蒸消毒(乙醛消毒法:5ml乙醛+2g高錳酸鉀/平方米空間),直接被污染的區(qū)域可參照第3)條進行處理。(2)意外事故的處理 結(jié)核桿菌的滅活方式有化學(xué)的和物理的方法。因此該項操作一定在BSL3級實驗室完成,且最好實驗室內(nèi)要有負壓。痰標(biāo)本培養(yǎng)時,在標(biāo)本進行前處理高速振蕩混合和離心、培養(yǎng)液或上清液的傾倒、轉(zhuǎn)移和接種等操作過程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑的可能,為防止實驗過程中產(chǎn)生的氣溶膠等導(dǎo)致實驗室感染,所有操作應(yīng)在二級生物安全柜中進行,并使用二級生物安全防護。痰、尿標(biāo)本找抗酸桿菌,應(yīng)先高壓滅菌后,再涂片染色。標(biāo)本應(yīng)留取在封閉的器皿內(nèi)送檢。在具體的操作過程中包括標(biāo)本留取、運送、處理以及廢物處置等程序都應(yīng)防止感染性氣溶膠的產(chǎn)生。當(dāng)進行大量活菌實驗時,所有操作應(yīng)在BSL3級實驗室生物安全柜中進行。嚴格限定有資質(zhì)開展研究的實驗室和研究者。處理標(biāo)本或培養(yǎng)物時產(chǎn)生氣溶膠是實驗室獲得性結(jié)核病的最重要危險因素,也可通過損傷的皮膚接觸感染。所有參與結(jié)核桿菌防治和研究的實驗室和實驗室人員都必須遵守《結(jié)核病實驗室生物安全管理條例》和《結(jié)核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》。五、細菌的實驗室安全防護 根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定,人間傳播的微生物名錄(待頒布)結(jié)核桿菌屬于二類,BSL3。對毒性癥狀嚴重者,可加用糖皮質(zhì)激素,以減輕炎癥及過敏反應(yīng),促進滲液吸收,減少纖維組織形成及胸膜粘連。對復(fù)治病例,一般可用以下幾種方案:① 2S(E)RHZ/4RH(E),督促化療,保證規(guī)律用藥。 2SRHZ/6S2H2Z2R代表利福平,H代表異煙肼,Z代表吡嗪酰胺,E代表乙胺丁醇,S代表鏈霉素,T代表丙硫異煙胺。2SRHZ/6TH或6EH 2SRHZ/4RH或4R2H28個月 2ERHZ/4RH或4R2H22RHZ/4RH化療方案6個月表1 國家防癆規(guī)劃的結(jié)核病化療方案療程整個治療方案分強化和鞏固兩個階段。 在結(jié)核病的預(yù)防方面要針對傳染源、傳播途徑、易感人群三個環(huán)節(jié),采取以管理和控制傳染源為主的綜合性防治措施,努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報告、早治療”,以利于控制和管理傳染源。還應(yīng)注意將結(jié)核病與肺癌、肺炎、支氣管擴張、慢性支氣管哮喘和其它發(fā)熱性疾病如傷寒、敗血癥、白血病、縱隔淋巴瘤及結(jié)節(jié)病等進行鑒別。在臨床診斷中,我國現(xiàn)用的分類法包括四部分,即肺結(jié)核類型、病變范圍及空洞部位、痰菌檢查、活動性及轉(zhuǎn)歸。(2)診斷和鑒別診斷  痰結(jié)核菌檢查不僅是診斷肺結(jié)核的主要依據(jù),亦是考核療效、隨訪病情的重要指標(biāo)。纖支鏡檢查對于發(fā)現(xiàn)氣管內(nèi)膜結(jié)核、了解有無腫瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脫落細胞檢查,以及取活組織作病理檢查等,均有重要診斷價值。血沉增快常見于活動性肺結(jié)核。結(jié)核菌素試驗陰性反應(yīng)除表示沒
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