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實驗室病原微生物危害評估報告(參考版)

2025-04-10 03:24本頁面
  

【正文】 但目前在男女二性標本的敏感不高,特異性差,加之實驗人員的判斷水平,故該實驗尚不能推薦用來診斷淋球菌感染。檢驗科質量管理體系文件  (三)抗原檢測  1.固相酶免疫試驗(EIA):可用來檢測臨床標本中的淋球菌抗原,在流行率很高的地區(qū)而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用,可以在婦女人群中用來診斷淋球菌感染。培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài),革蘭氏染色,氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等鑒定。國內采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基,均含有抗生素,可選擇地抑制許多其他細菌生長。 ?。ǘ┡囵B(yǎng)檢查:  淋球菌培養(yǎng)是診斷的重要佐證,培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性病人都是較敏感的方法,只要培養(yǎng)陽性就可確診,在基因診斷問世以前,培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病的唯一方法?! ⊙什客科l(fā)現革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病,因為其他奈瑟菌屬在咽部是正常的菌群。女性宮頸分泌物中雜菌多,敏感性和特異性較差,陽性率僅為5060%,且有假陽性,因此世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女病人?! ∪?、實驗室檢查  ?。ㄒ唬┩科瑱z查:  取患者尿道分泌物或宮頸分泌物,作革蘭氏染色,在多形核白細胞內找到革蘭氏陰性雙球菌。淋球菌內毒素及淋菌表面外膜產生的脂多糖與補體結合產生一種化學毒素,能誘導中性粒細胞聚集和吞噬引起局部急性炎癥,出現充血、水腫、化膿和疼痛。人類是淋球菌的唯一天然宿主,主要侵犯粘膜,尤其對單層柱狀上皮和移行上皮所形成的粘膜有親和力。一次性交男性傳染給女性的感染率為50%90%,女性傳染給男性的為25%50%,感染率與性交次數成正比。目前,我國以暗娼為主要傳染源。新生兒經過患淋病母親的產道時,眼部也可引起新生兒淋菌性眼炎,妊娠期婦女淋病患者可引起羊膜腔內感染,包括胎兒感染。非淋是指除了淋球菌以外的細菌感染,感染人群中以青壯年為主。淋病患者是傳染源,性接觸是淋病主要傳播方式,傳播速度快,而且感染率很高,感染后35天即可發(fā)病。二、傳染方式  通過性接觸傳染:主要是通過性交或其他性行為傳染。新生兒眼炎(淋病性結膜炎,gonococcal ophthalmia)新生兒自孕婦陰道感染,出生后2~3天出現癥狀,眼瞼水腫、發(fā)紅,有膿性分泌物,一旦延誤治療,則角膜呈蒸汽狀,可能穿透角膜,導臻失明。  附性腺炎 男性淋病患者的炎癥擴散到后尿道時,可出現急性前列腺炎、精囊炎和附睪炎,除排尿刺激癥狀加重以外,還可出現急性尿潴留及會陰部疼痛,部分患者出現高熱、寒戰(zhàn)等全身癥狀。因此臨床診斷時除尿道分泌物涂片外,更主要的應做陰道子宮頸涂片,否則容易漏診?! ∨粤懿 ∨粤懿“虻懒懿〖吧车懒懿蓚€方面,女性患者由于尿道短,故泌尿道癥狀往往不明顯,而常以白帶增多,下腹痛等生殖道癥狀為主。少數病例有微熱及疲乏癥狀。一、分類  男性淋病 急性前尿道炎的最早癥狀為尿道口紅腫、發(fā)癢及輕微刺痛,繼有稀薄粘液流出,引起排尿不適。在高溫或低溫條件下都易致死。它是嗜二氧化碳的需氧菌,革蘭染色陰性,最適宜在潮濕,溫度為35℃,%二氧化碳的環(huán)境中生長。檢驗科質量管理體系文件第九章 淋病奈瑟氏菌的生物危害評估報告 淋病的病原體即奈瑟菌,是1879年由Neisseria首次分離出的淋病雙球菌,因此淋病雙球菌又稱為奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeas)。在感染早期注射大量丙種球蛋白或免疫血清可能防止發(fā)病或減輕癥狀。在疫區(qū)內調查森腦病毒時,可將小白鼠、小雞、地鼠或猴關在籠內,置于森林中地上,引誘蜱來叮咬而傳染,動物感染后雖可能不發(fā)病,但可根據測定血中有無產生特異性抗體而加以驗證。病愈后皆產生持久的牢固免疫力。居住在森林疫區(qū)的發(fā)生腦炎,出現肌肉麻痹、萎縮、昏迷致死,少數痊愈者也常遺留肌肉麻痹。牛、馬、狗、羊等家畜在自然疫源地受蜱叮咬而傳染,并可把蜱帶到居民點,成為人的傳染源。蜱是森腦病毒傳播媒介,又是長期宿主,其中森林硬蜱的帶病毒率最高,成為主要的媒介。也能凝集鵝和雛雞的紅細胞。森腦病毒形態(tài)結構、培養(yǎng)特性及抵抗力似乙腦病毒,但嗜神經性較強,接種成年小白鼠腹腔、地鼠或豚鼠腦內,易發(fā)生腦炎致死。本病主要侵犯中樞神經系統,臨床上以發(fā)熱,神經癥狀為特征,有時出現癱瘓后遺癥。我國采用淋巴細胞雜交瘤技術,制備出高中和活性乙腦單克隆抗體,經系統動物實驗治療證明安全有效,95年經衛(wèi)生部批準進入 Ⅰ、Ⅱ 期臨床試驗,是一種特異免疫治療制劑?! 》牢脺缥檬穷A防本病的有效措施。疫苗接種對象是10歲以下兒童和來自非疫區(qū)的軍民?! ∷?、特異防治檢驗科質量管理體系文件  (一)特異預防  現用的乙腦滅活疫苗是用地鼠腎細胞培養(yǎng)增殖,甲醛滅活制成,初次免疫時,皮下注射2~3次,間隔710天,以后每年加強注射一次,免疫力維持半年左右,保護率達6690%?! ?三)病毒分離與鑒定  取病尸腦組織研磨成10%懸液,接種13日齡乳鼠腦內,待發(fā)病頻死時,取腦懸液,用單克隆抗體做中和試驗鑒定病毒?! ?抗體存在于lgG、 lgM中,出現早,維持久。檢測血清標本中的HI抗體,多采用2ME—HI法?! ?二)常規(guī)血清學試驗   對乙腦診斷而言,本法特異性較低,但敏感性高,簡便易行。   (一)特異性lgM檢測  乙腦病毒感染發(fā)病早期即產生特異性lgM ,病后2~3周達到高峰,故單份血清可做出早期診斷。常規(guī)血清學試驗,(HCF、NT)需取雙份血清,同時做對比試驗,當恢復期血清抗體滴度比急性期≥ 4倍時,有輔助診斷意義,可用于臨床回顧性診斷。因此本病多見于10歲以下的兒童,但近些年來乙腦發(fā)病年齡有增高趨勢,值得重視。中和抗體約在病后1周出現,于5年內維持高水平,甚至維持終生?! ”静〔『?~5天可出現血凝抑制抗體,2~4周達高峰,可維持一年左右?! ?二)免疫性  人受乙腦病毒感染后,大多數為隱性感染及部分頓挫感染,僅少數發(fā)生腦炎(%),這與病毒的毒力,侵入機體內數量及感染者的免疫力有關。臨床上表現為高燒、意識障礙、抽搐、顱內壓升高以及腦膜刺激癥。先在毛細血管內皮細胞及局部淋巴結等處的細胞中增殖,隨后有少量病毒進入血流成為短暫的第一次病毒血癥,此時病毒隨血循環(huán)散布到肝、脾等處的細胞中繼續(xù)增殖,一般不出現明顯癥狀或只發(fā)生輕微的前驅癥狀。特別是當年生仔豬最為重要,對乙腦病毒易感,構成豬—蚊—豬的傳播環(huán)節(jié),故在人群流行前檢查豬的病毒血癥和蚊帶毒率,可預測當年人群的流行程度,并通過豬的免疫預防,可控制本病在豬及人群中的流行。實驗表明,自然界中蚊與蝙蝠息息相關,蚊將乙腦病毒傳給蝙蝠,受染蝙蝠在10℃,不產生病毒血癥,可持續(xù)存在達3個月之外,當蝙蝠返回室溫環(huán)境3天后,出現病毒血癥,構成蚊—蝙蝠—蚊的循環(huán);③冷血脊椎動物為冬季貯存宿主(如蛇、蛙、蜥蜴等),可分離出病毒。病毒每年或通過候鳥的遷棲而傳入,或病毒在流行區(qū)存活過冬。在熱帶和亞熱帶,蚊終年存在,蚊和動物宿主之間構成病毒持久循環(huán)?! 《?、致病性與免疫性  (一)致病性  我國乙腦病毒的傳播媒介主要為三帶喙庫蚊。乙醚、1:1000去氧膽酸鈉以及常用消毒劑均可滅活病毒?! ?三)對理化因素的抵抗力  乙腦病毒對熱抵抗力弱,56℃30分鐘滅活,故應在70℃條件下保存毒株?! ∫夷X病毒囊膜糖白具有血凝特性,能凝集鵝、鴿、雛雞紅細胞,~。用單克隆抗體做交叉血凝抑制試驗證實E糖蛋白上有與黃病毒屬成員廣泛并叉的屬特異性抗原,也有僅與圣路易、墨里谷、西尼羅腦炎病毒交叉的亞組物異性抗原,以及僅乙腦病毒具有的種特異性抗原。  (二)抗原特性  乙腦病毒抗原性穩(wěn)定,在同一地區(qū)不同年代分離的毒株之間未發(fā)現明顯的抗原變異。在培養(yǎng)上清中含有傳染性病毒,胞漿內胞膜上可檢出特異性抗原?! ?二)敏感動物與細胞  乳鼠是常用的敏感動物,腦內接種乙腦病毒后3~4天發(fā)病,一周左右死亡,腦組織內含大量感染性病毒,是分離病毒、大量制備抗原的可靠方法?! ∫?、生物學性狀  (一)形態(tài)與結構  乙腦病毒為球形,直徑40nm,內有衣殼蛋白(C)與核酸構成的核心,外披以含脂質的囊膜,表面有囊膜糖蛋白(E)刺突,即病毒血凝素,囊膜內尚有內膜蛋白(M),參與病毒的裝配?! ”静《臼紫?1953年)在日本從患者腦組織中分離獲得,因此稱日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus ,JEV),所致疾病在日本稱日本乙型腦炎(JBE)。乙腦目前尚無特效治療方法。豬是乙腦病毒的主要中間宿主和傳染源,在乙腦流行季節(jié)前,應對豬進行預防注射,可有效地降低乙腦發(fā)病率。部分患者留有后遺癥。主要癥狀為高熱、頭痛、嘔吐、昏睡、痙攣等。幼豬是乙腦病毒的主要傳染源和中間宿主,蚊子是乙腦病毒的傳播媒介。呈球狀,核酸為單鏈RNA,外層具包膜,包膜表面有血凝素。檢驗科質量管理體系文件第八章 腦炎病毒的生物危害評估報告第一節(jié) 流行性乙型腦炎病毒  簡稱乙腦病毒。采用符合國家標準的口罩、防護服等個人防護用品,⑶強化離心、移液等環(huán)節(jié)的標準操作。⑴嚴格按實驗室使用和安全操作技術規(guī)程及各個實驗項目的操作技術規(guī)程操作。病毒對熱敏感,紫外線、來蘇水、%過氧乙酸及1%克遼林等都可在短時間內將病毒殺死。冠狀病毒可以發(fā)生重復感染,表明其存在有多種血清型(至少有4種已知)并有抗原的變異,其免疫較困難,目前尚無特異的預防和治療藥物。增殖病毒也要用上述材料,亦很困難。目前人類冠狀病毒還沒有合適的可作研究用的動物模型(人類疾病的動物模型(animal model of human disease)是指各種醫(yī)學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現的動物。另外,還可引起嬰兒和新生兒急性腸胃炎,主要癥狀是水樣大便、發(fā)熱、嘔吐,每天可拉10余次,嚴重者甚至出現血水樣便,極少數情況下也引起神經系統綜合征。由于這個特性,冬季和早春是該病毒疾病的流行季節(jié)。   冠狀病毒引起的人類疾病主要是呼吸系統感染(包括嚴重急性呼吸綜合征,SARS)。 冠狀病毒的流行病學  冠狀病毒感染在世界各地極為普遍。冠狀病毒各個結構蛋白成熟的mRNA合成,不存在轉錄后的修飾剪切過程,而是直接通過RNA聚合酶和一些轉錄因子,以一種“不連續(xù)轉錄”(discontinuous transcription)的機制,通過識別特定的轉錄調控序列(transcription regulating sequences, TSR),有選擇性的從負義鏈RNA上,一次性轉錄得到構成一個成熟mRNA的全部組成部分。   冠狀病毒成熟粒子中,并不存在RNA病毒復制所需的RNA聚合酶(Viral RNA polymerase),它進入宿主細胞后,直接以病毒基因組RNA為翻譯模板,表達出病毒RNA聚合酶。重組后,RNA序列發(fā)生了變化,由此核酸編碼的氨基酸序列也變了,氨基酸構成的蛋白質隨之發(fā)生變化,使其抗原性發(fā)生了變化。這一結構與真核mRNA非常相似,也是其基因組RNA自身可以發(fā)揮翻譯模板作用的重要結構基礎,而省去了RNA-DNA-RNA的轉錄過程。少數種類還有血凝素糖蛋白(HE蛋白,Haemaglutinin-esterase)。形態(tài)結構  冠狀病毒粒子呈不規(guī)則形狀,直徑約60220nm。⑷污染的臺面和器具:40%甲醛水溶液,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。⑵生物安全柜工作臺面和儀器表面:70%乙醇。⑵ 污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應進行消毒。帶入和帶出實驗室的物品⑴對所有帶入實驗室的物品都應進行檢查。⑹ 減少實驗室內利器的使用。⑷ 離開實驗室前必須脫去隔離衣并洗手。⑶進入實驗室應穿隔離衣,戴手套。皮膚的傷口和擦傷都應以防水敷料覆蓋。安全保障措施個人防護⑴ 高標準的個人保健對于減少感染的危險性很重要。 (2)梅毒螺旋體制運試驗(TPI):用來檢測血清中是否存在抑制螺旋體活動的特異性抗體。2.螺旋體抗原試驗:抗原為梅毒旋體,以檢測血清中的特異性抗體,該試驗特異性高,目前常用下述兩種方法。反應素在第一期梅毒病變出現后1~2周就可測出,第二期陽性率幾乎達100,第三期陽性率較低。國際上常用性病研究實驗室(UDRL)的玻片試驗法;該法是一種簡單的玻片沉淀試驗,試劑及對照已標準化。微生物學檢查 ?。ㄒ唬z查螺旋體  采取初期及二期梅毒硬性下疳、梅毒疹的滲出物等,用暗視野或墨汁顯影,如查見有運動活潑的密螺旋體即可診斷。極少數患者通過接吻、哺乳、接有傳染性損害病人的日常用品而傳染。 梅毒由梅毒螺旋體(蒼白螺旋體)引起,患病后病程漫長,早期侵犯生殖器和皮膚,晚期侵犯全身各器官,并生多種多樣的癥狀和體征,病變幾乎能累及全身各個臟器??梢葬槍ζ淙觞c將梅毒螺旋體消滅。在缺氧的環(huán)境下它能生存數天,在潮濕的衣服上也能存活數小時,在血庫中一般能存活24小時。梅毒螺旋體對外界的抵抗力很弱,對化學藥品也很敏感,在體外不易生存,煮沸、干燥、肥皂水和一般的消毒劑(如升汞、石碳酸、來蘇水、酒精、1∶1000的高錳酸鉀液等)很容易將它殺死,陽光照射和干燥環(huán)境都能很快使它死亡。因其透明不易著色,又稱之為蒼白螺旋體。在其前端有46根鞭毛樣細纖維束,其末端呈卷曲狀。 梅毒螺旋體(Treponema palidum)1905年由法國科學家Schaudinn 與Hoffmanu發(fā)現并報告的。3.4抗體檢測用血清標本可先以56℃30分鐘處理。3.2加強個人防護。流感病毒易發(fā)生基因重配,易形成新的亞型,但型間無交叉免疫。操作具有高致病性的甲性H5和H7兩亞型毒株必須在P3實驗室內進行操作。1.3 流感病毒抗體檢測可用免疫熒光法和ELISA。1. 2流感病毒血清學診斷血凝抑制試驗(HI法)或微量中和法。1.實驗模式1. 1 流感病毒的分離培養(yǎng)流感病毒大量存在于病人痰液、咽拭子和病禽尸解臟器中。流感是一自限性疾病,可使用抗流感病毒藥物和對癥治療來減輕癥狀。疫苗接種對預防流感有一定效果。流感極易傳播,因此發(fā)現有流感病人,應及早隔離和治療。對紫外線和化學有毒劑敏感。人群普遍易感,病后免疫時間短,而流感病毒變異性大,但型間無交叉免疫,所以人在一生中可多次患流感。病人和病禽是主要的傳染源。流感流行時造成的經濟損失名列各傳染病之首。而禽流感發(fā)病率和病死率高,季節(jié)性
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