分子生物學(xué)試題word版(參考版)
2025-01-14 01:26本頁面
【正文】 ③ 蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失： （ 二十七）、基因治療的策略？ 答： 基因置換或稱基因矯正：特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞，通過定位重組，讓導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因，不涉及基因組的任何改變。 ④ 倒位： DNA鏈內(nèi)重組，使其中一段方向倒置。 ② 缺失：一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從 DNA大分子上消失。 （二十五）、誘變劑的作用機(jī)制？ 答： 堿基的類似物誘發(fā)突變 改變 DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu) 結(jié)合到 DNA分子上誘發(fā)移碼突變 紫外線及其他射線引起的 DNA分子的變化 （二十六）、突變類型及其遺傳效應(yīng)？ 答： 突變類型： ① 點(diǎn)突變： DNA大分子上一個(gè)堿基的變異。 胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng) 打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞 同源重組胚胎干細(xì)胞的篩選 基因敲除胚胎干細(xì)胞注射入胚泡 胚泡植入假孕小鼠的子宮中 雜交育種獲得純合的基因敲除動(dòng)物 （二十四）、 DNA芯片的原理？ 答： DNA 芯片技術(shù)就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測(cè)樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性定量分析得出待測(cè)樣品的基因序列及表達(dá)的信息。 （二十三）、基因敲除的基本程序？ 答：通過 DNA同源重組，使得胚胎干細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成功能喪失，然后通過胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過程稱為基因敲除。 基本原理：將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，人們可以通過分析轉(zhuǎn)基因和動(dòng)物表型的關(guān)系，揭示外源基因的功能；也可以通過轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種。 （二十二）、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念、原理及應(yīng)用？ 答： 概念：是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代的一類動(dòng)物。 （二十一）、真核細(xì)胞表達(dá)外源基因的條件？ 答： 首先必須具備哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的功能元件。 （二十）、大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件？ 答： 要求外源基因的編碼區(qū)不能 含有內(nèi)含子； 表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動(dòng)子的下游，并形成正確的閱讀框架； 轉(zhuǎn)錄出的 mRNA必須有與大腸桿菌 16S rRNA3，末端相匹配的 SD序列，才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì)。退火溫度與引物 Tm值有關(guān)，引物 Tm值在 5580 ℃ 范圍較為理想。 引物 。在 PCR 反應(yīng)中， 4 種dNTP必須以等摩爾濃度配制，以減少 PCR反應(yīng)的錯(cuò)配誤差并提高使用效率。 底物濃度 工作濃度 20200umol/L， dNTPs 濃度過高可加快反應(yīng)速度，也增加堿基的錯(cuò)配率和實(shí)驗(yàn)成本。 Mg 2+濃度過高又使酶催化非特異性擴(kuò)增增強(qiáng)。 鎂離子濃度 一般用量 mmol/L， Taq DNA聚合酶活性需要 Mg 2+。 ? 加入 BSA或明膠有利于保護(hù) TaqDNA聚合酶活性。 引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的 5’端最多可以游離十幾個(gè)堿基而不影響 PCR反應(yīng)的進(jìn)行。 引物 3’端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板 DNA配對(duì)。 兩個(gè)引物之間不應(yīng)存 在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免 3’端的互補(bǔ)重疊。 3’端和 5’端引物具有相似的 Tm值 ,Tm值計(jì)算公式： Tm＝ 4(G+C)+ 2(A+T) 引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。否則會(huì)使引物和模板錯(cuò)誤配對(duì)。 引物的堿基盡可能隨機(jī)，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。 （十七）、 PCR引物設(shè)計(jì)的基本 要求？ 答： 引物長度一般為 15～ 30 個(gè)核苷酸。引物的延伸：溫度至 70 ℃ 左右， Taq DNA聚合酶以４種 dNTP為原料，以目的 DNA為模板，催化以引物３ ’末端為起點(diǎn)的 5’→ 3’DNA鏈延伸反應(yīng)，形成新生 DNA鏈。 DNA模板變性：模板雙鏈 DNA?單鏈 DNA， 94℃ 。 PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。 末端標(biāo)記法：只 是將 DNA片段的一端進(jìn)行標(biāo)記。將這些引物與變性的 DNA單鏈結(jié)合后，以 4種 dNTP（其中一種是標(biāo)記物標(biāo)記的 dNTP）為底物，合成與探針 DNA互補(bǔ)的切帶有標(biāo)記物的 DNA探針。 隨機(jī)引物法：隨機(jī)引物是人工合成的長度為 6個(gè)寡核苷酸殘基的寡聚核苷酸片段的混合物。 （十五）、探針的標(biāo)記法？ 答： 缺口平移法：此法是利用適當(dāng)濃度的 DNase Ⅰ 在 DNA 雙鏈上隨機(jī)切割單鏈，造成單鏈切口。 寡核苷酸探針：根據(jù)已知的核酸順序，采用 DNA 合成儀合成一定長度的寡核苷酸片段作為探針。它是目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針。 （十四）、探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)？ 答： cDNA探針：通過逆轉(zhuǎn)錄獲得 cDNA后，將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體，通過擴(kuò)增重組質(zhì)粒而使 cDNA 得到大量的擴(kuò)增。兩個(gè)不同基因組 DNA 變性后的相對(duì)雜交速率取決于樣品濃度絕對(duì)一致時(shí)的相對(duì)復(fù)雜性（即 DNA中的堿基數(shù)）。它有以下優(yōu)點(diǎn)：在低溫下探針更穩(wěn)定；能更好地保留非共價(jià)結(jié)合的核酸。高濃度的鹽使堿基錯(cuò)配的雜交體更穩(wěn)定，所以進(jìn)行序列不完全同源的核酸分子雜交時(shí)必須維持雜交反應(yīng)液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度。 溫度：溫度過高不利于復(fù)性，而溫度過低，少數(shù)堿基配對(duì)形成的局部雙鏈不易解離，適宜的溫度是較 TM值低 25度。 （十三）、影響雜交的因素？ 答： 核酸分子的濃度和長度：核酸濃度越大，復(fù)性速度越快。 （十二）、核酸分子雜交的原理？ 答：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及在復(fù)性過程中個(gè)分子間鍵的形成和斷裂。在 DNA合成反應(yīng)混合物的 4種普通 dNTP中加入少量的一種 ddNTP，鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競爭，產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈，其長度取決于引物末端到出現(xiàn)過早鏈終止位置間的距離。2’,3’ddNTP與普通 dNTP不同，它們?cè)诿?
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