分子生物學(xué)常見試題(參考版)
2024-08-15 13:19本頁面
【正文】 二是產(chǎn)生新的剪接位點(diǎn).③ 蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失:(二十七),基因治療的策略答:1,基因置換或稱基因矯正:特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞,通過定位重組,讓導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因,不涉及基因組的任何改變.2,基因添加或稱基因增補(bǔ):通過導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因.3,基因干預(yù):采用特定的方式抑制某個基因的表達(dá),或者通過破壞某個基因而使之不能表達(dá),以達(dá)到治療疾病的目的.4, 基因標(biāo)記:基因標(biāo)記實(shí)驗(yàn)是基因治療的前奏,并不在于直接治療疾病而是期望能夠提供有關(guān)正常細(xì)胞生物學(xué)和疾病病理方面的信息.(二十八),基因診斷常用的生物學(xué)技術(shù).(二十九),簡述重組DNA技術(shù)的過程.。培育動物新品種。也可以通過轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動物品種.3,應(yīng)用:建立用于研究外源基因表達(dá)調(diào)控體系。2,注意選擇轉(zhuǎn)染的受體細(xì)胞,不同類型的細(xì)胞具有不同的特性。2,表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動子的下游,并形成正確的閱讀框架。5,表達(dá)產(chǎn)物的大小。3,影響RNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率的因素:SD序列,mRNA。具有良好的熱穩(wěn)定性,95℃仍有活性,5,引物 ,生成引物二聚體,使目的DNA,引物Tm值在5580 ℃ 范圍較為理想.6,反應(yīng)溫度和循環(huán)次數(shù)(十九),影響大腸桿菌系統(tǒng)外源基因表達(dá)的因素答:1,啟動子的強(qiáng)弱。端最多可以游離十幾個堿基而不影響PCR反應(yīng)的進(jìn)行.8,引物的539。端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn),39。端的互補(bǔ)重疊.5,引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不超過70%,引物339。端和539。DNA鏈延伸反應(yīng),合成的引物延伸鏈經(jīng)過變性后又可作為下一輪循環(huán)反應(yīng)的模板PCR,就是如此反復(fù)循環(huán),使目的DNA得到高效快速擴(kuò)增.(十七),PCR引物設(shè)計的基本要求答:1,引物長度一般為15～,過長會提高相應(yīng)退火溫度,使延伸溫度超過TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產(chǎn)物的生成.2,引物的堿基盡可能隨機(jī),避免出現(xiàn)嘌呤,39。末端為起點(diǎn)的539。能更好地保留非共價結(jié)合的核酸.5,核酸分子的復(fù)雜性:的相對雜交速率取決于樣品濃度絕對一致時的相對復(fù)雜性(即DNA中的堿基數(shù)).6,非特異性雜交反應(yīng):在雜交前應(yīng)對非特異性雜交反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封閉,以減少其對探針的非特異性吸附作用.(十四),探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)答:1,cDNA探針:通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后,將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體,通過擴(kuò)增重組質(zhì)粒而.2,基因組探針:從基因組文庫里篩選得到一個特定的基因或基因片段的克隆后,大量擴(kuò)增,純化,切取插入片段,分離純化為探針.3,寡核苷酸探針:根據(jù)已知的核酸順序,采用DNA合成儀合成一定長度的寡核苷酸片段作為探針.4,RNA探針:采用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄的方法可以得到RNA或反義RNA作為探針.(十五),探針的標(biāo)記法答:1,缺口平移法:此法是利用適當(dāng)濃度的DNase Ⅰ在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈,造成單鏈切口.切口處產(chǎn)生一個5末端和3末端,3末端就可以作為引物,在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下,以互補(bǔ)的DNA單鏈為摸板,依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上,合成新的DNA單鏈。羥基,不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵,因此,少量的一種ddNTP,鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競爭,產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈,ddNTP,結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸,它們將分別終止于模板鏈的A,C,G或T位置.(十二),核酸分子雜交的原理答:具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下(適宜的溫度及離子強(qiáng)度等)堿基互補(bǔ)配對結(jié)合,重新形成雙鏈。ddNTP與普通dNTP不同,它們在脫氧核糖的339。脫氧核苷三磷酸.239。,539。5,可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞。3,載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志,以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子。5,特定的作用模式(六),表皮生長因子介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑答:表皮生長因子受體是一個典型的蛋白酪氨酸激酶受體,這個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是:1, 受體二聚化的形成及其磷酸化:表皮生長因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化,從而改變受體構(gòu)象,使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng),受體自身的幾個蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化.2, 募集接頭蛋白Grb2:表皮生長因子受體自身被磷酸化后,不僅其激酶活性增強(qiáng),而且其構(gòu)象發(fā)生變化,.3, 調(diào)控分子SOS的活化:SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序,當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長因子受體后,它的兩個SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS,使之活化.4, 低分子量G蛋白Ras的活化:SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP,結(jié)合GTP的反應(yīng),使Ras激活.活化的Ras作用其下游分子Raf,由此啟動了MAPK的三級激活過程.5, MAPK的級聯(lián)激活:Raf是一種MAPKKK,它作用于MEK,使之磷酸化而激活,活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1,使之磷酸化激活由此完成了三級激活.6, 轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用:活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi),使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化,從而影響基因的轉(zhuǎn)錄.(七),cAMP信號
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