高中生物選修三基因工程的基本操作程序(參考版)
2025-01-12 13:17本頁面
【正文】 （ 2）單細胞生物 無表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 有表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 基因工程的基本操作程序 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 從基因文庫中獲取目的基因 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 化學方法人工合成 復制原點 + 目的基因 + 啟動子 + 終止子 + 標記基因 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射法、 Ca2+處理法 DNA分子雜交技術(shù)、分子雜交技術(shù)、抗原 — 抗體雜交技術(shù) 分子檢測外的個體水平鑒定 。 細菌的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。 —— 個體生物學水平的鑒定 （ 1）多細胞個體 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 不能，受體細胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了 表達 。 提取 （ 3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 ： 抗原 抗體雜交 蘇云金桿菌 Bt毒素蛋白 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi) 從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體 抗體 蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 證明： 提取蛋白質(zhì)與 Bt毒素蛋白質(zhì)一樣 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。 目的基因進入受體細胞后，是否都能穩(wěn)定維持 和表達？ 不一定，需要檢測 ： 分子雜交技術(shù)： （ 1） DNA分子與 DNA分子的之間雜交 （ 2） DNA分子與 RNA分子的之間雜交 （ 3）蛋白質(zhì)分子（抗原與抗體）之間雜交 ： 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 轉(zhuǎn)基因生 物的 DNA 探針 15N 15N 14N 14N （ 1）檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了 目的基因 基因探針： 放射性同位素等標記的 DNA分子 方法： DNA分子雜交技術(shù) 變性 變性 如果顯示出雜交帶，就表明待測樣品含有目的基因。 ③ 適用：單子葉植物 花粉管通道法： 將目的基因?qū)胫参锛毎? ① 操作方法： ② 特點： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入 DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞 十分簡便經(jīng)濟 ③ 例： 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 ①細胞類型： ②操作程序 ： ___顯微注射法： （ 2） 將目的基因?qū)雱游锛毎? 發(fā)育成新性狀動物 移植到子宮或輸卵管 培養(yǎng)成早期胚胎 顯微注射 取受精卵（體內(nèi)或體外 受精） 提純含目的基因表達載體 受精卵 ③ 常用法： ②常用菌： ① 微生物作受體細胞原因： 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對少 ④過程： 大腸桿菌 Ca2+處理 獲得感受態(tài)細胞 Ca2+處理 大腸桿菌 感 受 態(tài) 細 胞 表達載體 與感受態(tài)
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