高中生物選修三基因工程的基本操作程序(完整版)
【正文】 ）、獲取目的基因的常用方法有哪些 ? 從基因文庫中獲取 利用 PCR技術(shù)擴增 人工合成 請閱讀 P9第一和二兩段 從基因文庫中獲取目的基因 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為 基因文庫 基因文庫 基因組文庫 部分基因文庫 （如 :cDNA文庫） （ 1） .基因文庫 ① 基因組文庫的構(gòu)建 （ 2） .基因文庫的構(gòu)建方法 通過對受體菌的培養(yǎng)而儲存基因 ② cDNA文庫的構(gòu)建 反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。 （ 5） 復(fù)制原點：是轉(zhuǎn)錄和復(fù)制的起點。表達載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu) ② 用到的工具酶： 既用到限制酶切割載體，又用到 DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵 ③ 啟動子、終止子 對于目的基因表達必不可少 ④ 目的基因不能單獨進入受體細胞， 必需以表達載體的方式攜帶進去。 目的基因進入受體細胞后，是否都能穩(wěn)定維持 和表達？ 不一定，需要檢測 ： 分子雜交技術(shù)： （ 1） DNA分子與 DNA分子的之間雜交 （ 2） DNA分子與 RNA分子的之間雜交 （ 3）蛋白質(zhì)分子（抗原與抗體）之間雜交 ： 抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗 轉(zhuǎn)基因生 物的 DNA 探針 15N 15N 14N 14N （ 1）檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了 目的基因 基因探針： 放射性同位素等標記的 DNA分子 方法： DNA分子雜交技術(shù) 變性 變性 如果顯示出雜交帶，就表明待測樣品含有目的基因。 （ 2）單細胞生物 無表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 有表達產(chǎn)物 無表達產(chǎn)物 基因工程的基本操作程序 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 從基因文庫中獲取目的基因 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 化學(xué)方法人工合成 復(fù)制原點 + 目的基因 + 啟動子 + 終止子 + 標記基因 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射法、 Ca2+處理法 DNA分子雜交技術(shù)、分子雜交技術(shù)、抗原 — 抗體雜交技術(shù) 分子檢測外的個體水平鑒定 。 提取 （ 3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) 方法 ： 抗原 抗體雜交 蘇云金桿菌 Bt毒素蛋白 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi) 從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體 抗體 蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶 脫分化 組織培養(yǎng) 證明： 提取蛋白質(zhì)與 Bt毒素蛋白質(zhì)一樣 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基因未表達。 ? 將目的基因?qū)胧荏w細胞的原理 借鑒細菌或
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1