蛋白質(zhì)化學1-氨基酸(參考版)
2025-01-10 07:55本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)的分子組成 —— 氨基酸 。 【 目的與要求 】 167。當流動相流進固定相時，由于各組分在兩相中的分配情況不同或電荷分布不同或離子親和力不同等，而以不同的速度前進，從而達到分離的目的。 (6) Cys的反應： Cys或含 Cys蛋白質(zhì)與亞硝基亞鐵氰酸鈉在稀氨的溶液中，產(chǎn)生一種紅色的化合物。 (5) 乙醛酸的反應： 檢測 Trp或含 Trp蛋白質(zhì)的反應。 （顏色反應）： (4) Pauly反應： 檢測 His、 Tyr及含 His、 Tyr蛋白質(zhì)的反應。 坂口試劑： α — 萘酚的堿性次溴酸鈉溶液 。 產(chǎn)物： 藍色的鉬藍 、 鎢藍 。 (2) Folin反應： 檢測 Tyr或含 Tyr的蛋白質(zhì)的反應 。 Millon試劑： 汞的硝酸鹽與亞硝酸鹽溶液 。 ? 應用： （先用層析法分離） ： 用陽離子交換樹脂，將樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結(jié)果。 ? 反應要點 NH2與 COOH共同參與， ?氨基酸 特有 ，可在 570nm測定吸光值 D. 測定范圍： ~50181。 羧基參加的反應： (1)與堿反應成鹽 (2)與醇反應成酯 (3)與酰化試劑反應成酰氯 氨基與 α 羧基共同參加的反應 與茚三酮的反應 ： 除脯氨酸與羥脯氨酸外，可與其它氨基酸生成藍紫色化合物。 (5) 與丹磺酰氯 （ DNSCl）的反應：生成熒光物質(zhì) DNS氨基酸。 (3) 與 2,4二硝基氟苯 （ 2,4DNFB）的反應（ Sanger反應）： 生成黃色的二硝基苯 氨基酸衍生物。 (2) 與甲醛的反應： 用過量的中性甲醛與氨基酸反應，可游離出氫離子，然后用 NaOH滴定，從消耗的堿量可以計算出氨基酸的含量。 中性氨基酸： pI=(pK’1 + pK’2)/2 pK’1為 α 羧基的解 離常數(shù) , pK’2為 α 氨基的解 離常數(shù) 。曲線中從左向右 第一個拐點 是氨基酸羧基解離 50%的狀態(tài)， 第二個拐點 是氨基酸的等電點，第三個拐點 是氨基酸氨基解離 50%的狀態(tài)。 ? 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被堿滴定，應該具有兩性電離的性質(zhì)，現(xiàn)以 甘氨酸 為例來說明氨基酸兩性電離的特點。 該 pH稱為該氨基酸的 等電點 。通常情況下，氨基酸以 兩性離子的形式 存在，如下圖所示： 從上圖可知：氨基酸在 酸性環(huán)境 中 ， 主要以 陽離子 的形式存在 ， 在 堿性環(huán)境 中 ， 主要以 陰離子 的形式存在 。 ： 氨基酸在可見光范圍內(nèi)無光吸收，在近紫外區(qū)含苯環(huán)氨基酸有光的吸收。 ： 氨基酸的熔點一般都比較高
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