生化實驗技術(shù)綜合設(shè)計性大實驗(參考版)
2025-01-09 17:57本頁面
【正文】 ? PAGE比連續(xù)系 PAGE的分辨率高？ DNA提取鑒定 ? ？ ? EDTA的作用是什么 ? ? SDS的作用？ ? NaCL的作用，為什么要加到 1mol/L? ? ？ ? ,試述在提取過程中應(yīng)如何避免大分子 DNA的降解和斷裂 ? ? ?試從它們原理、準確性等方面加以比較。 實驗?zāi)繕? ? 學(xué)習(xí)和掌握從動物組織提取核酸的原理和操作技術(shù)； ? 練習(xí)從動物組織提取純化 DNA操作； ? 學(xué)習(xí)水平式瓊脂糖凝膠電泳及紫外檢測，確定 DNA的純度、含量與分子量。 ②分子量大 ，一般比細菌的大 2－ 3個數(shù)量級，比病毒的大 4－ 5個數(shù)量。 ? 由于高等動物 DNA 主要存在于細胞核與線粒體中，所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）： ①破碎細胞難 ；從處死動物分離組織器宮到破碎細胞費時長。 細胞的破碎 細菌有堅硬的細胞壁 ， 首先要破碎細胞 。 RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在 解度較大。 DNP和 RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。 天然狀態(tài)的 DNA 是以脫氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在于細胞核中 。 DNA在水中為 10g/L，呈黏性膠體溶液。 除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。要從細胞中提取 DNA 時，先把DNP抽提出來，再把 P除去，再除去細胞中的糖，RNA 及無機離子等，從中分離 DNA 。 RNA存在于細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)，參與細胞內(nèi) DNA遺傳信息的表達。天然存在的核酸有兩類，一類為脫氧核糖核酸 Deoxyribonucleic acid， DNA)，另一類為核糖核酸 (Ribonucleic acid， RNA)。 小牛胸腺 肝 臟 魚類精子 種子胚胎 谷氨酸菌體（ 7%~10%） 面包酵母 （ 4%） 啤酒酵母 （ 6%） 大腸肝菌 （ 9%~10%） 來源 動 物 植 物 微生物 DNA的基本功能 ? 生物遺傳信息復(fù)制的模板和基因轉(zhuǎn)錄的模板； ? 是生命遺傳繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是個體生命活動的基礎(chǔ)； ? 作為 DNA分子中的某一區(qū)段，有復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯等主要功能稱為基因。因此易被機械張力剪斷。 從細菌及高等動植物中提取 DNA難度大一些。 對于低等生物。微生物中，谷氨酸菌體含 7%－ 10%，面包酵母含 4%，啤酒酵母含6%，大腸肝菌含 9%－ 10%。 實驗?zāi)繕? ? 掌握免疫球蛋白（ IgG ）的原理和方法 ? 掌握利用紫外法、單向免疫擴散法等測定 IgG含量的方法 ? 掌握 SDSPAGE電泳法鑒定蛋白質(zhì)純度及測定分子量方法 ?掌握層析、透析、膜分離、電泳等生化分離鑒定技術(shù)的應(yīng)用及操作 實驗要求掌握的技術(shù) 柱層析分離技術(shù) Sephadex G25 分子篩層析 DEAECellulose 離子交換層析 蛋白質(zhì)提取技術(shù) 硫酸銨鹽析、透析、膜分離技術(shù)等 蛋白質(zhì)含量測定 消光系數(shù)法、 FOLin酚法測 定 IgG蛋白質(zhì)含量 蛋白質(zhì)分子量、純度、活性測定 SDSPAGE 電泳法檢測、 單向免疫擴散法 豬脾臟 DNA提取及含量鑒定 實驗二、 為了研究 DNA分子在生命代謝中的作用，常常需要從不同的生物材料中提取 DNA分子在生物體內(nèi)的分布及含量不同，要選擇適當?shù)牟牧咸崛?DNA。 ? IgG是人和動物血漿蛋白的重要組分之一，制備 γ 球蛋白的原料通常用動物血液，其次還有動物胎盤和初乳乳清。楊據(jù) Ig的免疫化學(xué)特性，可分為五大類： IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE，其分子不論哪一類，都由四鏈組成，即由兩條相同的長多肽鏈稱 H鏈（又稱重鏈）及兩條相同的短肽鏈稱 L鏈（又稱輕鏈）組成。各種免疫球蛋白能特異地與相應(yīng)的抗原結(jié)合形成抗原 抗體復(fù)合物（免疫復(fù)合物），從而阻斷抗原對人體的有害作用，對細菌等抗原的殺傷最后由補體去完成。不同的蛋白質(zhì)的分子量、溶解度、以及在一定條件下帶電的情況有所不同，可以更據(jù)這些性質(zhì)的差別，分離及提純各種蛋白質(zhì)。 生物分子純度的鑒定方法很多 ， 常用的 有溶解度法 ， 化學(xué)組成分析法 ， 電泳法 ， 免疫學(xué)方法 ， 離心沉降分析法 ，各種色譜法 ， 生物功能測定法 ， 以及質(zhì)譜法 等 。 還可能發(fā)現(xiàn)它不是均一的 。 如果某物質(zhì)所具有的物理 、 化學(xué)等方面性質(zhì)經(jīng)過幾種高靈敏度方法的鑒定都是均一的 ， 那么大致可以認為它是均一的 。均一性是指所獲得的制備物只具有一種完全相同的成分，均一性的評價常須經(jīng)過數(shù)種方法的驗證才能肯定 。其他活性物質(zhì)也可通過測定總活性的變化與樣品重量或體積與測出的活力列表進行對比分析，算出每步的提純倍數(shù)及回收率。這一關(guān)系，可通過每一步驟的分析鑒定求出。 但不同物質(zhì)的穩(wěn)定性不同 、分離難易不同 ， 回收率也不同 。 （三）分離純化方法的評估 每一個分離純化步驟的好壞 ， 除了從分辨能力和重現(xiàn)性兩方面考慮外 ， 還要注意方法本身的回收率 ， 特別是制備某些含量很少的物質(zhì)時 ， 回收率的高低十分重要 。
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1