生化實驗技術(shù)與方法(參考版)
2025-05-16 16:32本頁面
【正文】 測定各條帶的相對遷移率，將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的相對遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標準曲線，根據(jù)未知蛋白質(zhì)的電泳相對遷移率即可在標準曲線上求得分子量 。 電極緩沖液： pH Tris –Gly 染色：脫色考馬斯亮蘭 R250， 1h或過夜。 加樣量： 20μl，標準蛋白（ M）全加。 染色： 考馬氏亮藍、銀染色 該法測定蛋白質(zhì)分子量的局限性： （如血紅蛋白）或兩條以上肽鏈（如胰凝乳蛋白酶）組成的，測定時只是它們的亞基或單條肽鏈的 MW。 樣品：蛋白質(zhì)要完全變性。 若將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標準曲線，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量 。 測定各條帶的相對遷移率，根據(jù)已知蛋白質(zhì)分子量和它們的相對遷移率，以相對遷移率為橫坐標， lgMr為縱坐標作標準曲線。 ，從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的形狀差異。 ，形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物。 SDSPAGE是在 PAG系統(tǒng)中引進 SDS（ 十二烷基磺酸鈉）。 試管編號 0 1 2 3 4 5 6 7 標準蛋白質(zhì)溶液（ ml） 50ug/ml 0 / / 稀釋酶液（ ml） / / / / / / 蒸餾水（ ml） 考馬斯亮藍（ ml） PAL總活力 、 比活力 、 蛋白質(zhì)含量的計算 步驟 體積（ ml） 蛋白質(zhì)含量 （ mg） 總活力（ m） 比活力 （ m/mg protein） 粗提 硫酸銨沉淀 透析 離子交換層析 SDS－ 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDS－ PAGE） 測定蛋白質(zhì)分子量 ? 原理
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