生化實(shí)驗(yàn)計(jì)劃(參考版)
2024-11-19 02:47本頁面
【正文】 。，請思考樹脂過高或過低對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有何影響，試分析原因?！舅伎碱}】，然后用蒸餾水洗至中性，再用2mol/LNaOH攪拌半小時(shí)，用蒸餾水洗至中性，最后用1mol/LHCl攪拌半小時(shí)，還用蒸餾水洗至中性?！窘Y(jié)果與分析】以吸光度值為縱坐標(biāo)，收集的管數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制出洗脫曲線。生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）層析柱使用幾次后，需將樹脂取出用1mol/LNaOH溶液洗滌，再用蒸餾水洗至中性后可反復(fù)使用。沸水浴15min后取出，冷卻至室溫，在1h內(nèi)用分光光度計(jì)在570nm下以蒸餾水為空白管進(jìn)行比色，測定各管的吸光度值。注意：在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中要多注意層析柱，避免使柱內(nèi)液體流干，否則實(shí)驗(yàn)即為失敗。(② （pH12）洗脫：關(guān)閉恒流泵和止水夾，打開止水夾進(jìn)行洗脫，同法收集1140管。注意：樣品體積不要過大，樣品的含量不能超過層析柱內(nèi)離子交換能力，否則影響分離效果。打開止水夾放出液體，使液體下表面與樹脂表面相平，按照此法清洗2次。沿靠近樹脂表面的管壁緩慢加入，注意不要沖壞樹脂表面。調(diào)節(jié)流速時(shí)統(tǒng)一將流速調(diào)節(jié)為10滴/min,平衡時(shí)間一般為15分鐘。3平衡層析柱裝好后，再緩慢沿管壁加入 適量緩沖液至樹脂床面以上2~3cm處，接上橫流泵，用pH試紙測量流出液pH，直至流出液的pH與緩沖液的pH相等。待樹脂在柱底部逐漸沉降時(shí)，慢慢打開柱底出口處鐵夾，繼續(xù)加入樹脂懸浮液，直至樹脂高度到層析柱高度的3/4處。2 裝柱取層析柱一支，垂直固定在鐵架臺(tái)上，(實(shí)驗(yàn)前需進(jìn)行檢漏，小老師會(huì)在實(shí)驗(yàn)過程中進(jìn)行演示)用夾子夾緊柱底出口處橡膠管，在柱內(nèi)加2~3cm高的檸檬酸緩沖液?！静僮鞑襟E】對于市售干樹脂，先是經(jīng)水充分溶脹后，經(jīng)浮選得到顆粒大小合適的樹脂，然后加4倍量的2mol/LHCl溶液浸泡1小時(shí)，傾去酸液，用蒸餾水洗至中性，然后用2mol/LNaOH溶液處理，做法同上。（pH12），定容至1L ⑥顯色劑，加水定容至100mL。二、實(shí)驗(yàn)試劑①732型陽離子交換樹脂（100200目）生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）②2mol/L氫氧化鈉溶液，1mol/L氫氧化鈉溶液； ③2mol/L鹽酸溶液，； ④標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液天冬氨酸、賴氨酸均配制成2mg/； ⑤洗脫液檸檬酸氫氧化鈉鹽酸緩沖溶液（），定容至500mL，冰箱保存注：%酚溶液可防止長霉。特別要注意的是pH對顯色反應(yīng)的影響特別大，且該反應(yīng)在一個(gè)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。由于該反應(yīng)靈敏度高，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于氨基酸定性和定量的分析，國內(nèi)的大部分教材認(rèn)為其反應(yīng)機(jī)理為：生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）但是大量實(shí)驗(yàn)表明而且大部分的學(xué)者認(rèn)為茚三酮顯色反應(yīng)生成的有色物質(zhì)是混合物而不是單一組分。茚三酮反應(yīng)是指在加熱條件下，氨基酸或肽與茚三酮反應(yīng)生成紫色（與羥脯氨酸或脯氨酸反應(yīng)生成（亮黃色）化合物的反應(yīng)。在pH12條件下，因pH值高于Lys的pI值Lys可解離成陰離子從樹脂上被交換下來。氨基酸是兩性電解質(zhì)，分子上所帶的凈電荷取決于氨基酸的等電點(diǎn)和溶液的pH值。離子交換層析是一種基于氨基酸電荷行為的層析方法。選擇適當(dāng)?shù)臈l件，可使一些溶質(zhì)分子變成離子態(tài)，通過靜電作用結(jié)合到離子交換劑上，而另一些物質(zhì)則不能被交換，這兩類物質(zhì)即被分離。其中使用的最普遍的是離子交換樹脂?？蛇M(jìn)行交換的離子稱為反離子或抗衡離子，這種反離子可與溶液中帶生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）同種電荷的離子進(jìn)行交換反應(yīng)。有些高分子物質(zhì)含有一些可以解離的基團(tuán)，例如SO3H，COOH等，因此可以和溶液中的離子產(chǎn)生交換反應(yīng)，如：或這類高分子物質(zhì)統(tǒng)稱為離子交換劑，離子交換劑是一類具有離子交換功能的高分子材料。在今后的學(xué)習(xí)、工作中有更大的收獲，在不斷地探索中、在無私的學(xué)習(xí)、奉獻(xiàn)中實(shí)現(xiàn)自己的人身價(jià)值！第五篇：生化實(shí)驗(yàn)教案生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）生 物 化 學(xué) 實(shí) 驗(yàn)（下）實(shí)驗(yàn)三 離子交換柱層析法分離氨基酸生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生化實(shí)驗(yàn)（下）華中科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 2012級生物化學(xué)小老師第三組離子交換柱層析法分離氨基酸【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?。我的?dòng)手潛力還不夠強(qiáng)，當(dāng)有些實(shí)驗(yàn)需要很強(qiáng)的動(dòng)手潛力時(shí)我還不能從容應(yīng)對；我的探索方式還有待改善，當(dāng)應(yīng)對一些復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)時(shí)我還不能很快很好的完成；我的數(shù)據(jù)處理潛力還得提高，當(dāng)眼前擺著一大堆復(fù)雜數(shù)據(jù)時(shí)我處理的方式及潛力還不足，不能用最佳的處理手段使實(shí)驗(yàn)誤差減小到最小程度……總之，生化實(shí)驗(yàn)課讓我收獲頗豐，同時(shí)也讓我發(fā)現(xiàn)了自身的不足。只有在課前進(jìn)行了認(rèn)真的預(yù)習(xí)，在做實(shí)驗(yàn)時(shí)效率才會(huì)更高，才能收獲的更多、掌握的更多；它還提高了我處理數(shù)據(jù)的潛力；做實(shí)驗(yàn)就會(huì)有數(shù)據(jù)，有數(shù)據(jù)就要處理，數(shù)據(jù)處理的是否得當(dāng)將直接影響實(shí)驗(yàn)成功與否。經(jīng)過這半年，我的動(dòng)手潛力有了明顯的提高；它讓我養(yǎng)成了課前預(yù)習(xí)的好習(xí)慣。毫無疑問，它培養(yǎng)了我的動(dòng)手潛力。當(dāng)時(shí)我的同組者韓文志已經(jīng)被火烤的不行了。這個(gè)實(shí)驗(yàn)要求我們正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點(diǎn)。直到最后，分離色素后，看到我們的色帶分離的很好，很是高興。我記得在加棉花時(shí)，由于不明白就應(yīng)加多厚，提取色素時(shí)還很是膽戰(zhàn)心驚的。在這次實(shí)驗(yàn)中我們損壞了改良式凱式蒸餾儀，并且賠了錢，錢不是問題，重要的是操作的問題，我覺得我們在做實(shí)驗(yàn)時(shí)還是對儀器不是很熟悉，做實(shí)驗(yàn)時(shí)不認(rèn)真。
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1