常用免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及方法(參考版)
2025-07-21 23:46本頁面
【正文】 產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的關(guān)鍵技術(shù)包括： （ 含人工染色體 ） ； ； ， 使轉(zhuǎn)基因胚胎發(fā)育； 、 篩選理想的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物品系 。僅有部分組織細(xì)胞的基因組中整合有外源基因的動(dòng)物 ， 稱為嵌合體動(dòng)物 (chimera animal)。 二 、 PCR分類 1. 經(jīng)典 PCR 2. 反轉(zhuǎn)錄 PCR 3. 免疫 PCR 第二節(jié) 生物芯片技術(shù) 生物芯片是指在面積不同的基片 （ 玻璃 、 硅片 、 尼龍膜 、 金屬 、凝膠等 ） 表面上有序地點(diǎn)陣排列了一系列識(shí)另分子 (cDNA、 DNA、肽 、 蛋白質(zhì)或寡核苷酶等 )， 固定在每一點(diǎn)陣上的分子都是可尋址的；然后在相同條件下 ， 點(diǎn)陣上的分子與其 “ 配體 ” 分子反應(yīng) ，反應(yīng)結(jié)果用核素 、 熒光 、 化學(xué)發(fā)光或酶標(biāo)法顯示 ， 通過計(jì)算機(jī)軟件分析 ， 綜合在可讀的 IC總信息 。 (二 )低溫退火 將反應(yīng)混合物降溫 ， 使引物與單鏈 DNA模板 (或從 mRNA反轉(zhuǎn)錄而來的 cDNA)上的互補(bǔ)序列得性 ， 形成模板 引物復(fù)合物谷稱退火 ， 是DNA復(fù)制的固定起點(diǎn) 。 PCR是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù) 。 上述過程是由溫度控制的 。 隨之將反應(yīng)混合特冷卻至某一溫度 ， 使引物與它的靶序列進(jìn)行配對(duì) ， 稱為退火 。 在 DNA聚合酶催化的一系列合成反應(yīng)中 ， 用兩段寡核苷酸作為反應(yīng)的引物 。 常用的分 Ficoll和 Percoll兩種 。 1. 自然沉降法 2. 聚合物加速沉降法 二 、 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞 ， 其體積 、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同 ， 紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞密度較大 ， 為 ， 而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 ， 血小板為 。 這種技術(shù)有兩大優(yōu)點(diǎn) ， 是一加快了沒淀反應(yīng)的速度 ， 二是將一些蛋白質(zhì)組分利用其電荷的不同將其分開 ， 再分別與抗體反應(yīng) ， 以其沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià) 。免疫印跡技術(shù)結(jié)合了凝膠電泳分辯力高和固相免疫測(cè)定敏感 、 簡便 、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn) 。 (五 )免疫印跡技術(shù) (immunoblot) 免疫印跡技術(shù)也稱 Western blot或蛋白印跡技術(shù) (protein blot)，是 20世紀(jì) 70年代末 80年代初發(fā)展起來的一種蛋白質(zhì)抗原檢測(cè)新技術(shù) 。 該方法是用化學(xué)的方法將酶與抗體結(jié)合起來 (類似于
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