級碩士高級免疫學實驗技術(shù)-概述(參考版)
2024-08-27 02:49本頁面
【正文】 。免疫沉淀（ Immunoprecipitation）免疫沉淀法用于蛋白質(zhì)混合物中特定抗原的定性與定量。用 于 蛋白 質(zhì) 相對 分子質(zhì)量 、表達及 分布的檢 測 。?斑點雜交?Northern blot?Cell/tissue 原位雜交分子雜交原理： 具有一定同源性的兩條核酸 單鏈在一定條件下可按堿基互補原 則退火形成雙鏈。量檢測。細胞因子誘導產(chǎn)物分析法： IL1刺激 T細胞產(chǎn)生 IL2等。靶細胞殺傷法：TNF對 L929細胞有殺傷作用，可用染色法檢測。 細胞增殖程度可用 3HTdR和 MTT法檢測。 細胞因 子檢測 是判斷 機體 免疫功 能的 重要指 標，對 某些疾 病的 診斷、 病程 觀察、 預(yù)后判 斷等是 十分必 要的。應(yīng)用： 檢測 免疫缺陷病、觀察腫瘤患 者免疫功能、療效和 預(yù)后。體內(nèi)法檢測淋巴細胞 功能原理： 用生物 抗原或化學抗原作皮內(nèi)試驗 。 細 胞的 細胞毒試 驗選用 K562細胞作為靶細胞，與 細胞混合培養(yǎng)后，以形態(tài)學或 同位素法檢測 細胞對 細胞 的殺傷活性。細胞介導的細胞毒試驗（ ）T對靶細胞有直接殺傷作用，能直接殺傷某些腫瘤細胞或病毒感染的細胞。 補體依賴的細胞毒試驗（ ，）：抗體與細胞表面的原結(jié)合后可激活補體化的經(jīng)典途徑，使細胞膜損傷甚至溶解，細胞被殺死后容易著色根據(jù)死細胞多少可以判斷毒活性的強弱。 此實驗 可測定 淋巴 細胞的 應(yīng)答功能 ，稱淋 巴細胞 轉(zhuǎn)化試 驗 ?抗體依賴細胞介導的細胞毒試驗補體依賴的細胞毒試驗細胞介導的細胞毒試驗NK細胞的細胞毒試驗 抗體依賴細胞介導的細胞毒試驗 (Antibodyep Clmax,D)原理 ：選用適當?shù)陌屑毎u、鴨、羊紅 細胞），加相應(yīng)的免疫血清，再加入待檢 測的效應(yīng)細胞，作用一段時間后，觀察靶 細胞破壞的程度并以此推測效應(yīng)細胞 作用。在淋巴細胞懸 液中加入不溶性 ，混勻培養(yǎng) 天，培 養(yǎng)結(jié)束 前 22小時加入 ， 采用摻入法檢測 細胞的增殖程度。 四 甲基偶氮 唑鹽法 （ ）淋巴細胞被有絲分裂原等激活發(fā)生 轉(zhuǎn)化， 在 細胞培養(yǎng)終止前數(shù) 小時加入， 活細胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶 分解 產(chǎn)生藍色甲臜（ Frmaz沉積 于細胞內(nèi)或細胞周圍，形成甲臜的量與細 胞增殖程度成正相關(guān)。刺激48~72小時細胞 增殖試 驗（（ 3摻入法） 摻入法） 原理 原理 ：： 淋巴細胞被有絲分裂原 或激活后，進入細胞周期進行有絲分裂，當細 胞進入 S期，細胞合成 DN明顯增加，在培 養(yǎng)液中加入 標記的 合成原料脫氧胸 腺嘧啶核 苷 ()，則 作為合成 的原料被攝入細胞，摻 入新合成的 中，根據(jù)同位素摻入細胞的量則可推測淋巴細胞對刺激物的應(yīng)答水平。 T細胞尼龍纖維毛柱PBMCB細胞單核細胞淋巴細胞的功能測定技術(shù)一、體外法 1. 淋巴細胞增殖試驗2. 細胞毒試驗3. 酶聯(lián)免疫斑點法二、體內(nèi)法淋巴細胞增殖試驗一、 T細胞增殖試驗 1. 、 B細胞增殖試驗 細胞增殖試驗（形態(tài)學示意圖）原理： T細 胞體 外 受特 異性 抗 原物 質(zhì)（ 如 細菌 類毒素）、非特異性有絲分裂原（如PA、Con）的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛 、 且能 進 行分 裂的 淋 巴母 細胞 ， 以此 測定 細胞 的 功能 。 域中廣泛使用的一項新技術(shù)?？乖贵w反應(yīng) 淋巴細胞的檢測技術(shù) ? 淋巴細胞的分離 ? 淋巴細胞的功能測定技術(shù) 淋巴細胞的分離一、 外周血單個核細胞的分離淋巴細胞分離液密度梯度離心法二、 淋巴細胞亞群的分離及鑒定 淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離液（聚蔗糖與泛影葡胺）比重為 92單個核細胞比重為 ．將離心管置水平式離心機內(nèi)，在 18～20 ℃ 下，以 2022 r/min離心 3
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