生化實驗技術綜合設計性大實驗-資料下載頁
2025-01-06 17:57本頁面
【正文】 道爾頓。因此易被機械張力剪斷。細菌 DNA，除核 DNA 外，還有質粒 DNA 等。 小牛胸腺 肝 臟 魚類精子 種子胚胎 谷氨酸菌體（ 7%~10%） 面包酵母 （ 4%） 啤酒酵母 （ 6%） 大腸肝菌 （ 9%~10%） 來源 動 物 植 物 微生物 DNA的基本功能 ? 生物遺傳信息復制的模板和基因轉錄的模板； ? 是生命遺傳繁殖的物質基礎，也是個體生命活動的基礎； ? 作為 DNA分子中的某一區(qū)段，有復制、轉錄和翻譯等主要功能稱為基因。 核酸（ Nucleic acid）是以核苷酸為基本組成生物大分子。天然存在的核酸有兩類，一類為脫氧核糖核酸 Deoxyribonucleic acid， DNA)，另一類為核糖核酸 (Ribonucleic acid， RNA)。 DNA存在于細胞核和線粒體中，攜帶遺傳信息。 RNA存在于細胞質和細胞核內，參與細胞內 DNA遺傳信息的表達。 核酸的結構與功能 天然狀態(tài)的 DNA是以脫氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在于細胞核中。要從細胞中提取 DNA 時，先把DNP抽提出來，再把 P除去，再除去細胞中的糖，RNA 及無機離子等，從中分離 DNA 。 DNA存在形式 核酸的理化性質 ? RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結晶， DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。 除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 ? DNA、 RNA和核苷酸都是極性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水， RNA鈉鹽在水中溶解度可達 40g/L。 DNA在水中為 10g/L，呈黏性膠體溶液。酸性溶液中，DNA、 RNA易水解，中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。 天然狀態(tài)的 DNA 是以脫氧核糖核蛋白 (DNP)形式存在于細胞核中 。 要從細胞中提取 DNA 時 ，先把 DNP抽提出來 ， 再把 P除去 ， 再除去細胞中的糖 ， RNA 及無機離子等 ， 從中分離 DNA 。 DNP和 RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。 DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在 mol/L的氯化鈉溶解度最低，僅為在水中溶解度的 1%，隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至 1mol/L氯化鈉中的溶解度很大，比純水高 2倍。 RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在 解度較大。因此，在提取時，常用此法分離這兩種核蛋白。 細胞的破碎 細菌有堅硬的細胞壁 ， 首先要破碎細胞 。 方法有三種： ① 機械方法：超聲波處理法 、 研磨法 、 勻漿法； ② 化學試劑法：用 SDS處理細胞； ③ 酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶 ， 都可 使細胞壁破碎 。 ? 由于高等動物 DNA 主要存在于細胞核與線粒體中，所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）： ①破碎細胞難 ；從處死動物分離組織器宮到破碎細胞費時長。在此時期間 DNA可能會被 DNase降解，而動物組織：特別是肌肉組織很難破碎 ,即使是較易破碎的肝 ?腎等組織也往往使用組織勻漿器，易造成DNA斷裂。 ②分子量大 ，一般比細菌的大 2－ 3個數(shù)量級，比病毒的大 4－ 5個數(shù)量。對不同生物材料，要根據(jù)具體情況選擇適當?shù)姆蛛x提取方法。 實驗目標 ? 學習和掌握從動物組織提取核酸的原理和操作技術； ? 練習從動物組織提取純化 DNA操作； ? 學習水平式瓊脂糖凝膠電泳及紫外檢測，確定 DNA的純度、含量與分子量。 實驗要求掌握的技術 ? 動物組織中 DNA提取分離純化技術 ? DNA含量檢測 :如二苯胺法，紫外法 ? DNA純度檢測及分子量測定 :平板凝膠電泳法 1. 實驗結果記錄 第三部分 IgG產率 (mg/100ml血清 ) IgG粗制品蛋白質含量 IgG回收率 IgG純品含量及蛋白質含量 IgG分子量 豬脾 DNA產品得率（ mg/100g) DNA 產品純度及分子量 G25（ 50） 層析曲線 層析曲線 瓊擴圖譜 第四部分 課后討論題 IgG提取純化 ? ？ ? ？ ? 、球蛋白和清蛋白的依據(jù)是什么？ ? IgG的理論基礎是什么？為了提高IgG制品活性，在分離純化過程中應注意控制哪些條件？ ? SDS、甘油、巰基乙醇、溴酚藍成分、各自有何作用？ ? SDSPAGE測定蛋白質相對分子質量的原理。 ? PAGE比連續(xù)系 PAGE的分辨率高？ DNA提取鑒定 ? ？ ? EDTA的作用是什么 ? ? SDS的作用？ ? NaCL的作用，為什么要加到 1mol/L? ? ？ ? ,試述在提取過程中應如何避免大分子 DNA的降解和斷裂 ? ? ?試從它們原理、準確性等方面加以比較。 ? ？操作中應注意什么？
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