生化大實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳(參考版)
2025-05-18 22:11本頁面
【正文】 。 ? 蛋白質(zhì)含量測定方法有哪些？簡述其原理。 ? SDS在 SDSPAGE中的作用。 ? 請說出常用蛋白質(zhì)染色的幾種方法 。加樣槽中不能有氣泡，如有氣泡，可用注射器針頭挑除。 （ 2） 上層濃縮膠聚合快 ， 加入 10%APS后快速混勻 ，及時(shí)轉(zhuǎn)移至玻板之間 ， 并快速插入十孔梳 ， 以免樣品孔變形 。 6 .染色與脫色 電泳結(jié)束后 ， 取下凝膠模 ， 卸下硅膠框 ， 用棕色梳撬開短玻璃板 ， 從凝膠板上切下一角作為加樣標(biāo)記 ， 加入染色液染色 1 h， 再用脫色液脫色過夜 ， 直至蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰 ， 即可觀察蛋白質(zhì)純度或計(jì)算相對遷移率 。 用微量進(jìn)樣器取 25 ?l上述混合液，通過緩沖液，小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部。靜置電泳槽， 10 min左右，上膠即可聚合，再放置 1020 min，拔出梳子，加入電極緩沖液，使液面沒過短玻璃板約 cm，即可加樣。 約 3060 min凝膠完全聚合，因聚合過程析出水，可看到膠面增加一條界面線。 ： SDS不連續(xù)體系凝膠配制 ? 20ml分離膠（ %）所需試劑用量（ ml） ? 分離膠膠貯液 30％ %Bis ? 分離膠緩沖液 － HCl ? 10%SDS ? 1%TEMED ? 雙蒸水 ? 10%過硫酸銨（ APS) ? 5%濃縮膠所需試劑用量（ ml） ? 分離膠膠貯液 30％ %Bis ? 濃縮膠緩沖液 － HCl ? 10%SDS ? TEMED原液 ? 50%丙三醇 ? 10%過硫酸銨（ APS) 3. 制備凝膠板 將混合后的分離膠溶液，用細(xì)長頭的滴管加至長、短玻璃板間的窄縫內(nèi)，加膠高度依據(jù)電泳槽標(biāo)記，約 7ml。 (3)將電泳槽兩側(cè)固定螺絲以對角線的方式旋緊 。 蛋白質(zhì)染色
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1