生化大實驗實驗聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳-文庫吧資料
2025-05-22 22:11本頁面
【正文】 ? 常用蛋白質(zhì)染色的幾種方法： ? 1）氨基黑 10B ? 2）考馬斯亮藍 R250 ? 3）考馬斯亮藍 G250 ? 4）固綠 ? 5）熒光染料 ： ? （ l）丹磺酰氯（ 2， 5二甲氨基萘磺酰氯，簡稱 DNSCl）： ? （ 2）熒光胺： ? （ 3） 2甲氧基 2， 4二苯基 3呋喃酮（ MDPF）： ? （ 4） 1苯胺基 8萘磺酸（簡稱 ANS）： ? 6）銀染色法 ? 常用脂蛋白染色方法： ? 1）油紅 O染色 ? 2） 蘇丹黑 B 三、試劑與器材 試劑： 10%SDS、 分離膠膠貯液（ 30％ ACr%Bis)、分離膠緩沖液（ mol/L － HCl 緩沖液）、 濃縮膠緩沖液（ mol/L － HCl 緩沖液）、 10%過硫酸銨（ APS)、 1%四基乙二胺（ TEMED）及原液、 、 ％考馬斯亮蘭 R250染色液 、脫色液、水飽和正丁醇、50%丙三醇 器材：穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、脫色搖床、垂直板電泳槽、電泳槽配件（玻板、 T型條、十孔梳、棕色梳、加樣指示板）、燒杯、試管、微量移液器、微量進樣器 五 、 操作方法 夾心式垂直板電泳槽 (1)旋松固定螺絲并打開電泳槽 ， 仰放在桌面上 。在一定條件下，SDS與大多數(shù)蛋白質(zhì)的結(jié)合比為 SDS/1g蛋白質(zhì)。 因此可以利用 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量 。 圖 5 不連續(xù)系統(tǒng)濃縮效應(yīng)示意圖 ? SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） ：蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳時 ， 它的遷移率取決于它所帶凈電荷以及分子的大小和形狀等因素 。 不連續(xù)凝膠分離蛋白質(zhì)原理： （ 1） 樣品濃縮效應(yīng) (a)凝膠孔徑不連續(xù)性： (b)緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性； ? 在 前導(dǎo)離子或快離子： HC1解離出的氯根 (C1) 尾隨離子 (trailing ion)或慢離子：甘氨酸根 mcl?clmp?pmG?G(Cl代表氯根 ， P代表蛋白質(zhì) ， G代表甘氨酸根 )有效遷移率 =m?， m為遷移率 ， ?為解離度 ) ? 當(dāng)進入 ， 甘氨酸解離度增加 ， 其有效遷移率超過蛋白質(zhì)； （ c)電位梯度
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1