sds-聚丙烯酰胺凝膠-文庫(kù)吧資料
2025-05-13 18:13本頁(yè)面
【正文】 還原 SDS電泳 非還原 SDS電泳 帶有烷基化作用的還原 SDS電泳 ? （ 2）根據(jù)緩沖系統(tǒng)和凝膠孔徑的不同 連續(xù)電泳 不連續(xù)電泳 （ 3）根據(jù)電泳的形式 圓盤(pán)電泳 垂直電泳 平板電泳 水平電泳 ? 連續(xù)系統(tǒng)： ? 電泳體系中緩沖液 pH值及凝膠濃度相同，帶電顆 ? 粒在電場(chǎng)作用下，主要靠電荷和分子篩效應(yīng) . ? 不連續(xù)系統(tǒng)： ? 緩沖液離子成分 , pH,凝膠濃度及電位梯度均不連 ? 續(xù)性，帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)，分子 ? 篩效應(yīng)，還具有濃縮效應(yīng)，因而其分離條帶清晰度及 ? 分辨率均較前者佳 . ? 不連續(xù)系統(tǒng)中的三種物理效應(yīng)： ? ①電荷效應(yīng)： ②分子篩效應(yīng) : ③ 濃縮效應(yīng) (1)制備分離膠（ separating gel) (2)制備積層膠 (stacking gel） ? (3)加樣 ? 樣品的處理 在蛋白溶液中加入過(guò)量的 SDS后 ,可引起以下的反應(yīng)： ? ? 蛋白質(zhì) 本身的電荷被屏蔽 氫鍵斷裂 疏水相互作用被取消 多肽被去折疊 (二級(jí)結(jié)構(gòu)破壞 ),并形成橢球形 ? ① 還原 SDS處理 當(dāng)加入還原試劑 DTT或 β二巰基乙醇后，蛋白質(zhì)被完全去折疊，只根據(jù)分子量分離。 測(cè)量位置應(yīng)在蛋白帶的中央。 電泳緩沖液的種類： ： 比磷酸緩沖系統(tǒng)的導(dǎo)電性低，電泳速度比后者快一倍 . ： 適用分子量低于 15KD的蛋白樣品 . ： 使用最多的緩沖液 ： 測(cè)定糖蛋白的分子量 ? （三）凝膠濃度的選擇 ? 由于 SDS電泳分離并不取決于蛋白質(zhì)的電荷密度， ? 只取決于分子解聚后 SDS蛋白質(zhì)膠束的大小，因此 ? 凝膠濃度的選擇會(huì)直接影響分辨率。 ? （ 3）二硫鍵是否完全被還原： ? ? 只有在蛋白質(zhì)分子內(nèi)的二硫鍵被徹底還原的情況 ? 下，蛋白質(zhì)分子才能被解聚 ,SDS才能定量地結(jié)合到蛋 ? 白質(zhì)分子上去，并使之具有相同的構(gòu)象而給出相對(duì)遷 ? 移率和分子量對(duì)數(shù)的線性關(guān)系。 ? 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15KD— 200KD之間時(shí)，電泳 ? 遷移率與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系 . ? *不同的蛋白質(zhì)分子有不同的電泳遷移率 mR，自由遷移 ? 率 m0和 阻滯系數(shù) KR值 ? 不同蛋白質(zhì)的 SDS復(fù)合物的 m0值都很接近，分子量相 ? 差 5倍的蛋白質(zhì)之間， m0值只相
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