【正文】 ll not usually accept it. If you are worried about how the time limits apply to you, take advice from one of the anisations listed under Further help. Employment tribunals are less formal than some other courts, but it is still a legal process and you will need to give evidence under an oath or affirmation. Most people find making a claim to an employment tribunal challenging. If you are thinking about making a claim to an employment tribunal, you should get help straight away from one of the anisations listed under Further help. If you are being represented by a solicitor at the tribunal, they may ask you to sign an agreement where you pay their fee out of your pensation if you win the case. This is known as a damagesbased agreement. In England and Wales, your solicitor can39。大學(xué)，雖然不盡完美，但卻讓我們學(xué)會更加珍惜，學(xué)會勇于追求自己想要 的生活 ！ g an employment tribunal claim Employment tribunals sort out disagreements between employers and employees. You may need to make a claim to an employment tribunal if: ? you don39。在這到處充溢著 11 感傷的季節(jié)，在這離別的時刻，我心中滿是不舍，但我想說 “海內(nèi)存知己，天涯若比鄰 ”，我們不曾離開！ 還有我宿舍的姐妹們，感謝你們大學(xué)四年的幫助，在我最悲傷的時候安慰我，在我最無助的時候支持 我，快樂的時候我們一起瘋狂，煩惱的時候我們一塊分擔(dān)，是你們給了我溫暖，讓我感受到 “家 ”的溫馨； 最后要我要感謝我親愛的父母，感謝你們的養(yǎng)育之恩，你們是我力量的源泉，永恒的動力！ 大學(xué)四年即將結(jié)束，回頭望去，有歡笑，有淚水，有遺憾，有感動 … 我們一起攜手走過這最為可貴的四年，最為難忘的四年。 首先我要感謝我的指導(dǎo)老師姬云濤老師，姬老師嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致、一絲不茍的作風(fēng)是我在人生路上的榜樣。 參考文獻(xiàn) [1]. BradfordMM. A rap id and sensitive method for the quantitation of microgram quantifies of protein utilizing the principle of proteindye binding. Anal Biochem, 1976, 7: 2482254. [2]. CHEN C Q, BELANGER R R, BENHAMOU N, et al. Defence enzymes induced in cucumber roots by treatment with plant growthpromoting rhizobacteria and Pythium aphanidermatum[J]. Physiol Mol Plant Pathol, 2022, 56: 1323. [3]. 崔艷麗 ， 王生余 ， 張真 . 微波技術(shù)在尿蛋白譜檢測中的應(yīng)用 [J]. 現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志 ，2022,17:3536. [4]. 謝克昌 . 甲醇及其衍生物 [M] . 北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 , 202206. [5]. 汪家政 ， 范 明 . 蛋白質(zhì)技術(shù)手冊 [M] . 北京 :科學(xué)出版社 . 2022. [6]. 李林 ， 張悅紅 . 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗教程 . 北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 ,2022. [7]. Merril C R. Gel staining techniques[J] . Methods Enzymol ,1990 ,182 :477 488. [8]. 國家技術(shù)監(jiān)督局 . 十二烷基硫酸鈉 ( GB/ T15963 1995) [ S] . 北京 :中國標(biāo)準(zhǔn)出版社 ,19960801 [9]. 葉長青 . SDS2聚丙烯酰胺凝膠電泳染色方法的改進 . 湖北工 業(yè)大學(xué)學(xué)報 .2022， 24:1618. 10 致 謝 在畢業(yè)論文即將完成之際，收獲頗多，感觸良深。 水浴法 中固定和染色的時間 可 由 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法 的 3 h縮短為 25 min， 微波加熱法 則在 10 min左右，但微波爐加熱法凝膠背景色較深，且 容易損壞膠片， 不容易把握， 適用于蛋白質(zhì)的快速分離。同時由于 SDS 對熱不穩(wěn)定 ， 在 80 ℃ 以下才相對穩(wěn)定 [8]， ， 通過水浴或微波熱處理，使 SDSPAGE凝膠的溫度達(dá)到 100 ℃ ， 從而分解了 SDS ， 解除了 SDS 對考馬斯亮藍(lán)染色的扼制 ， 使考馬斯亮藍(lán)染色得以順利進行 [9]；加熱使蛋白質(zhì)被快速固定，大大節(jié)省了固定和染色時間， 降低 了 凝膠被污染的機會 ；同時由于不使用甲醇，降低了成本 ，也有利于操作者的身體健康。 染色時間 表 4 不同染色方法所用 時間比較 時間 （ min） 方法 固定和放大 染色 脫色 總時間 傳統(tǒng)染色法 水浴加熱法 微波熱染法 50 5 9 120 20 3 至少 180 15 3 350 40 15 由表可知， 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法 所耗 時間 長 達(dá) 6 h， 甚至 需要進行過夜脫色 ； 而水浴和微波加熱法大大縮短了染脫時間， 水浴法 總消耗時間 40 min，其 5 min沸水浴脫色效果和傳統(tǒng)染色的過夜脫色相當(dāng) ； 微波 加熱法 更短達(dá) 15 min， 所用試劑 也 較少，可循環(huán)使用 。 C. 微波爐加熱法 定量牛血清 白蛋白加熱變性后電泳，分別用三種不同的染色方法：傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色 、 水浴常染結(jié)合法 、 微波爐加熱法對三塊平行的凝膠進行染色，比較三者的靈敏度。A. 傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色 。 另外，傳統(tǒng)染色法 脫色所使用的乙醇有可能會同時把考馬斯亮藍(lán)的 顏色脫掉，從而使蛋白質(zhì)條帶不清楚，而水浴和微波法 只使用冰乙酸脫色， 操作更簡便 ，更安全 。 B. 水浴常染結(jié)合法 。 2. 結(jié)果 與分析 染色效果 與 操作的 簡便性 7 圖 1 三種染色方法的結(jié)果 注： 蛋白質(zhì)上樣量均為 5 μ g/ 孔 。 （ 3） 先用雙蒸水把多余的染液洗去，再把凝膠置于 200 mL雙蒸水中，微波爐加熱 3 min，冷卻后即完成脫色， 暫時 保存于純水中。 微波爐加熱法 （ 1） 不經(jīng)固定液固定，電泳后直接把膠浸于 200 mL雙蒸水中，用微波爐強火加熱 3 min， 稍微冷卻后再重復(fù)一次。 （ 2） 棄去水 立即 把凝膠放入熱染液中 （ 含染料 、乙醇、乙酸 ）， 脫色搖床上進行染色 20 min。 6 （ 4） 脫色 棄 去染液（可收集回收利用），取出膠并在雙蒸水中漂洗數(shù)次，室溫下用 200 mL脫色液 (10 %甲 醇， 10 %乙酸，雙蒸水定容 )，于脫色搖床上震蕩脫色 34 h，其間換液 23次，直至背景清晰。 （ 2） 放大 將固定后的凝膠浸泡在 200 mL 10%的乙酸溶液中，搖床上震蕩 20 min。 電泳結(jié)束后，關(guān)閉電源， 取出 凝膠模，用鏟子小心撬開玻璃板一側(cè)，凝膠便貼在其中一塊板上，去除濃縮膠 ，并切去分離膠一角做標(biāo)記，取下分離膠于容器中，