sds-聚丙烯酰胺凝膠理論-文庫吧資料
2025-05-21 10:50本頁面
【正文】 注意以下問題： 1 ). 如果蛋白質(zhì) SDS 復合物不能達到 SDS ／ lg 蛋白質(zhì)的比率并具有相同的構(gòu)象，就不能得到準確的結(jié)果。 當溶液中 SDS單體濃度大于 1mmol/L時大多數(shù)蛋白質(zhì)與 SDS結(jié)合的重量比為 1:，如果單休濃度降到 mmol/L以下時，兩者的結(jié)合比僅為 1: ，為保證蛋白質(zhì)與 SDS的充分結(jié)合，它們的重量比應(yīng)該為 1:4或 1:3。在有些情況下，還需進一步將形成的巰基烷基化，以免在電泳過程中重新氧化而形成蛋白質(zhì)聚合體。 Gel 5% 10% 15% 29 45 66 97 200 29 45 66 97 200 29 45 66 97 200 影響蛋白質(zhì)和 SDS 結(jié)合的主要 3個因素 1） 二硫鍵是否完全被還原： 只有在蛋白質(zhì)分子內(nèi)的二硫鍵被徹底還原的情況下， SDS 才能定量地結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上去，并使之具有相同的構(gòu)象。 ? 連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中緩沖液 pH值及凝膠濃度相同 ， 帶電顆粒在電場作用下 ， 主要靠電荷和分子篩效應(yīng) 。 當條件一定時 ， b與 K均為常數(shù) ? 若將已知分子量的標準蛋白質(zhì)的遷移率對分子量對數(shù)作圖 ， 可獲得一條標準曲線 ， 未知蛋白質(zhì)在相同條件下進行電泳 ， 根據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量 。 二 . 實驗原理 當?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在 15,000－ 200,000之間時 ， 樣品的遷移率與其分子量的對數(shù)呈 線性關(guān)系 。 ? 運用 SDSPAGE測定蛋白質(zhì)分子量及染色鑒 。 SDS聚丙烯酰胺
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