【正文】 例： 肼對芳香硫酸酯酶的抑制 反競爭性抑制的特點： 小結 2/2/2022 可逆 抑制作用的 動力學 比較 作用特點 無抑制劑 競爭性抑制 非競爭性抑制 反競爭性抑制 與 I結合組分 動力學參數(shù) 表觀 Km 表觀 Vm 雙倒數(shù)作圖 斜率 縱軸截距 橫軸截距 Km Vm Km/Vm 1/Vm 1/Km E Km(1+[I]/Ki) ? Vm（不變） Km(1+[I]/Ki)/Vm ? 1/Vm（不變） 1/Km(1+[I]/Ki) ? E、 ES Km（不變） Vm/(1+[I]/Ki) ? Km(1+[I]/Ki)/Vm ? (1+[I]/Ki)/Vm ? 1/Km（不變） ES Km/(1+[I]/Ki) ? Vm/(1+[I]/Ki) ? Km/Vm（不變） (1+[I]/Ki)/Vm ? (1+[I]/Ki)/Km ? 。 E + P S Ki E S E E S I I （ 3）反競爭性抑制（ unpetitive inhibition） 反競爭性抑制 作用過程 抑制劑必須在酶與底物結合后才能進一步形成ESI復合物。 2/2/2022 非競爭性抑制的動力學方程 : 1v Km Vmax (1+ ) + [I]Ki 1 [S] 1 Vmax （ 1+ ） [I]Ki = ?非競爭性抑制的 特征曲線 正常 ? [I] 1v 1 [S] 1 Km 1 Vmax (1+ ) [I]Ki 2） 非競爭性抑制的 [S]與 v的關系 2/2/2022 非競爭性抑制的特點： ① 、 I與 S分子結構不同； ②、 Vmax 減小，表觀 Km不變； ③、抑制程度取決于 [I]大小。增加 [S]濃度可以解除抑制 . 小結 2/2/2022 應用 對氨基苯甲酸 二氫蝶呤 FH2 FH4 谷氨酸 二氫葉酸合成酶 二氫葉酸還原酶 磺胺藥 () 氨甲蝶呤 () 2/2/2022 1）概念 抑制劑與酶分子 活性中心 以外 的 其它部位 結合而抑制酶活性， I和 S與酶結合不存在競爭關系。 [E] v 無 I 可逆抑制劑 [E] v [I ] 2/2/2022 琥珀酸脫氫酶 + FAD + FADH2 COOH CH2 CH2 COOH COOH CH CH COOH 琥珀酸 延胡索酸 COOH CH2 COOH 丙二酸（－） （ 1） 競爭性 抑制 (petitive inhibition) 2/2/2022 S S E I I E E + P E Ki 競爭性抑制 作用過程 競爭性 抑制 2/2/2022 無 I 有 I v [S] 1）概念： 競爭性抑制劑 結構 與底物結構相似 ，與底物競爭同一種酶的 活性中心 ，從而影響 E與 S的結合。 敵百蟲、敵敵畏、對硫磷 2/2/2022 常見不可逆抑制劑： 有機磷化合物，有機汞、砷化合物，重金屬鹽，烷化試劑，氰化物、ＣＯ等 2/2/2022 抑制 (reversible inhibition) 抑制劑與酶以 非共價鍵 疏松結合引起酶活性的降低或喪失，能夠通過透析、超濾等物理方法使酶恢復活性。 抑制（ irreversible inhibition） 抑制劑與酶的結合是 不可逆 的。 2/2/2022 + I ↓ EI S + E ES E + P [E] v 1 2 3 反應體系中不加 I 不可逆抑制劑 可逆抑制劑 2/2/2022 不可逆抑制劑的作用 [E] v [I ]→ 可逆抑制劑的作用 [E] v [I ] 抑制程度是由酶與抑制劑之間的親和力大小、抑制劑的濃度以及底物的濃度決定。 六 .抑制劑 對酶促反應速度的影響 抑制作用 : 間接或直接地影響酶的活性中心 ,使酶活性降低或喪失。 2/2/2022 五 .激活劑 對酶促反應速度的影響 激活劑 : 凡能使酶由無活性變?yōu)橛谢钚曰蚴姑富钚栽黾拥奈镔|。 2/2/2022 pH對酶作用的影響機制 ： ；影響底物的解離； 2. 環(huán)境過酸、過堿使酶變性失活。 pH，酶活性降低，過酸、過堿酶變性失活。 最適溫度 2/2/2022 四 .pH對酶促反應速度的影響 pH對某些酶活性的影響 A: 胃蛋白酶 。 植物： 40～ 50℃ 動物： 35～ 40℃ 嗜熱細菌： TaqDNA聚合酶 70℃ ， 93℃ 不失活用于 PCR。 Vmax值測定 v 0 1 2 3 4 5 6 7 8 ?106 Km值 2 Vm Vm [S] 2/2/2022 雙倒數(shù)作圖法：林 貝氏 (LineweaverBurk)作圖法（ 1934） 1/V 1/Km 斜率 = Km/ Vmax 1/Vmax 1 = Km 1 + 1 V Vmax [S] Vmax 1/[S] 0 2/2/2022 二 .酶濃度 對反應速度的影響 ? 當 [S]??[E],式中 Km可以忽略不計。 丙酮酸 乳酸 乙酰 CoA 乙醛 乳酸脫氫酶（ 105） 丙酮酸脫氫酶（ 103） 丙酮酸脫羧酶（ 103） 當丙酮酸濃度較低時，代謝走哪條途徑?jīng)Q定于 km最小的酶。 [S] km + [S] 即 [S] = 9km 在進行酶活力測定時，通常用 4km的底物濃度即可。 溶液中所有酶的活性中心被底物占據(jù)，酶全部與底物結合成中間產(chǎn)物，雖增加底物濃度也 不會 生成更多 中間產(chǎn)物 。 底物濃度較高 時， 不會 生成更多 中間產(chǎn)物 。 中間產(chǎn)物 學說 解釋： 在酶濃度和其它條件不變情況下： 增加底物濃度可增加反應速度；當?shù)孜餄舛容^高時出現(xiàn) 底物飽和現(xiàn)象 。 第六節(jié) 酶促反應動力學 2/2/2022 產(chǎn) 物 0 時 間 酶促反應速度 逐漸 降低 酶促反應的時間進展曲線 反應速度： 單位時間內 底物減少 或 產(chǎn)物增加 的速度，常用 初速度 來衡量。 2/2/2022 ⑥ 游離酶 重新形成 2/2/2022 四 .雙底物 反應 A＋ B P＋ Q 2個底物 2個產(chǎn)物稱 “ BiBi” 反應。氧陰離子洞， 氧陰離子 與 Ser195， Gly193酰胺 H形成 氫鍵 使 之 穩(wěn)定。 2/2/2022 ③ His57作為 酸 催化劑 為敏感鍵Ｎ 提供 質子 ，肽鍵斷裂， 胺 釋放，生成?；钢虚g物 。 2/2/2022 His57 Asp102 Ser195 Cleft for binding extended substrates 245； His57, Asp102,Ser195 胰凝乳蛋白酶 2/2/2022 胰凝乳蛋白酶 2/2/2022 ① 敏感鍵 羰基 C定向接近 Ser195羥基 O 2/2/2022 ② His57奪走 Ser195羥基 H， Ser195羥基 O親核攻擊 敏感鍵 羰基 C形成帶 氧陰離子 的 四面體中間物 （轉換態(tài)） 。 ： H CysSH — CH2— C=CH HN N CH