cik細胞免疫治療ppt課件(參考版)
2025-01-08 03:20本頁面
【正文】 培養(yǎng)到 7天的 CIK 培養(yǎng)到 11天的 CIK 。 CIK細胞制備（ SOP） 1. 取血庫濃縮白細胞血 1U（或自體血 60 ml）； 2. 用人淋巴細胞分離液， 1∶ 1或 1∶ ， 2022 rpm離心 20 min，取上層血漿至另一 50 ml離心管內(nèi)，于 56 ℃ 滅活 30 min， 3000 rpm離心 10 min， 4 ℃ 保存?zhèn)溆茫? 3. 吸取白環(huán)層單核淋巴細胞，置 50 ml離心管內(nèi)，用 1號試劑，洗滌 2~3次， 2022 rpm離心 10 min； 4. 用 2號試劑調(diào)節(jié)細胞濃度至 23 106/ml； 5. 加入已包被 CIK1的 75 cm細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，每瓶 30 ml； 6. 24 h后，補加培養(yǎng)基 10 ml（內(nèi)含 CIK CIK CIK5各一支）； 7. 再培養(yǎng) 24~48 h后，視細胞狀態(tài)用 CIK培養(yǎng)基，將細胞一擴二培養(yǎng)； 8. 以后每 2~3 d傳代一次。 人體外周血單核細胞分離 （ SOP） 操作步驟： 1. 50 ml離心管中加入 15 ml淋巴細胞分離液； 2. 用吸管吸取血樣沿管壁緩慢加于淋巴細胞分離液液面上，注意此過程中不能把血液與分離液間的界面破壞，保持界面的清晰； 3. 配平后，于 2022 rpm離心 20 min； 4. 離心結束后，管內(nèi)液體分四層，從上到下分別為血漿、單核細胞、分離液和紅細胞，緩慢吸取上層血漿，置于離心管內(nèi)于 56 ℃ 滅活 30 min后，于 3000 rpm離心 10 min， 4 ℃ 保存?zhèn)溆? 5. 將滴管插到云霧層，吸取單核細胞至另一個離心管中，加入 1試劑50ml，于 1500 rpm離心 10 min； 6. 傾出上清液，再用 1試劑 50 ml重懸細胞，洗滌 2~3次； 7. 計數(shù)細胞總數(shù)和測定細胞活力，備用； 8. 最后將清洗干凈的單核細胞轉入隔天已包被好的細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 ? 儀器：超凈臺或生物安全柜，離心機、水浴鍋、微波爐、天平、移液槍、顯微鏡 ? 準備材料：剪刀、鑷子、培養(yǎng)瓶，離心管 /~架， 5ml/10ml/25ml移液管，滴管 ? 試劑： CIK培養(yǎng)基，生理鹽水，硫酸慶大霉素，各種細胞因子等 ? 消毒用品： 75%酒精，無菌紗布，酒精棉球 分離 PBMNC 病人自
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1