cik細胞免疫治療ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 03:20本頁面
【正文】 存?zhèn)溆? 5. 將滴管插到云霧層，吸取單核細胞至另一個離心管中，加入 1試劑50ml，于 1500 rpm離心 10 min； 6. 傾出上清液，再用 1試劑 50 ml重懸細胞，洗滌 2~3次； 7. 計數(shù)細胞總數(shù)和測定細胞活力，備用； 8. 最后將清洗干凈的單核細胞轉入隔天已包被好的細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。 注意事項： ? 整個過程要嚴格無菌操作； ? 將血加入淋巴細胞分離液時，必須保持兩種液體界面清晰； ? 用滴管吸取淋巴細胞層時，要掌握好力度，在細胞層上作各方向吸取，勿吸入其他層液體； ? 操作應輕柔，細胞懸液要充分混勻，避免損傷細胞活力及丟失細胞。 CIK細胞制備（ SOP） 1. 取血庫濃縮白細胞血 1U（或自體血 60 ml）； 2. 用人淋巴細胞分離液， 1∶ 1或 1∶ ， 2022 rpm離心 20 min，取上層血漿至另一 50 ml離心管內(nèi)，于 56 ℃ 滅活 30 min， 3000 rpm離心 10 min， 4 ℃ 保存?zhèn)溆茫? 3. 吸取白環(huán)層單核淋巴細胞，置 50 ml離心管內(nèi)，用 1號試劑，洗滌 2~3次， 2022 rpm離心 10 min； 4. 用 2號試劑調(diào)節(jié)細胞濃度至 23 106/ml； 5. 加入已包被 CIK1的 75 cm細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，每瓶 30 ml； 6. 24 h后，補加培養(yǎng)基 10 ml（內(nèi)含 CIK CIK CIK5各一支）； 7. 再培養(yǎng) 24~48 h后，視細胞狀態(tài)用 CIK培養(yǎng)基，將細胞一擴二培養(yǎng)； 8. 以后每 2~3 d傳代一次。 10 d后，取細胞懸液送外檢（檢測細菌、真菌、支原體，結果為陰性方可用）； 9. 14 d后，收集細胞，用于細胞治療； 10. 收集治療：將生長旺盛的 CIK細胞，收集，離心，留樣并進行無菌檢驗，洗滌 2~3次，計數(shù)細胞數(shù)和測定細胞活力（每次輸入細胞數(shù)要＞ 2 109，細胞活力＞ 95%）； 11. 用 一次性無菌濾器 過濾細胞； 12. 將細胞懸浮于 50~100 ml的生理鹽水中＋ IL2 10萬單位＋人白蛋白 10 ml，混合，封口，用輸血速度給病人靜脈滴注， 2 h內(nèi)輸完； 5次，病人可連續(xù)輸入細胞，也可隔天輸入（臨床醫(yī)生決定）。 培養(yǎng)到 7天的 CIK 培養(yǎng)到 11天的 CIK
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