【正文】 你們?cè)谖以囼?yàn)過程中幫我解開疑問、解決困難，是你們使我在整個(gè)試驗(yàn)過程中充滿動(dòng)力，感到溫暖，讓我明白了他人幫助和團(tuán)隊(duì)合作的重要性。 遇到困難時(shí)，你們給予了極大的幫助，老師 對(duì)我們的耐心，認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度， 平易近人的優(yōu)秀品格給我留下了深刻的印象，也讓我為 大學(xué)生活畫上圓滿的句號(hào)。 感謝在我實(shí)驗(yàn)過程中給過我 極大 幫助的 候軍老師、 劉保國(guó)老師等。在以往的日子里，她忘我的工作熱情，執(zhí)著的求真精神，給我留下了深刻的印象，從中我深切地體會(huì)到了科學(xué)要嚴(yán)謹(jǐn)、求實(shí)的道理。 本試 驗(yàn)以 培養(yǎng)時(shí) 間為 變量 ，以菌 球直 徑、 菌球 密度、 培養(yǎng)基PH、 四種胞外酶活性為 指標(biāo)，以期篩選出最佳培養(yǎng)周期，從而為杏鮑菇的標(biāo)準(zhǔn)化、周年化、規(guī)模化、工廠化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。綜合上述因素，再加上杏鮑菇市場(chǎng)價(jià)格普遍偏高的利益誘惑，廣大菇農(nóng)對(duì)杏鮑菇規(guī)模化、工廠化生產(chǎn)工藝創(chuàng)新提出了新的要求，他們急需一種容易掌握、操作方便、培養(yǎng)周期短、適宜大規(guī)模工廠化管理、生產(chǎn)的杏鮑菇栽培方式來取代現(xiàn)有的傳統(tǒng)栽培方式。其二，勞動(dòng)力素質(zhì)問題。但一些問題也接踵而至，其一，勞動(dòng)力的問題。從市場(chǎng)前景上看，我國(guó)的食用菌消費(fèi)潛力還相當(dāng)大，我國(guó) 13 億人口， 2021 年人均蔬菜年消費(fèi)量達(dá)到 240kg，而人均食用菌年消費(fèi)量只有 3kg 左右，僅為 1／ 80，潛在消費(fèi)空間非常大。這嚴(yán)重制約了我國(guó)杏鮑菇的生產(chǎn)和出口。許多發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)形成了杏鮑菇的工廠化、周年化生產(chǎn)。 總體來說，中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)缺乏各環(huán)節(jié)的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量保證和認(rèn)證等規(guī)范化體系。如食用菌生產(chǎn)的產(chǎn)地環(huán)境、設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)，添加劑、殺蟲劑、農(nóng)藥、化肥的使用方法和標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)生產(chǎn)食用菌使用的品種絕大多數(shù)是未經(jīng)審定、認(rèn)定或登記的，導(dǎo)致穩(wěn)定性和一致性差，質(zhì)量參差不齊。國(guó)內(nèi)一些食用菌生產(chǎn)企業(yè)設(shè)備簡(jiǎn)陋，衛(wèi)生條件差，甚至有人用不法手段生產(chǎn)，這樣的產(chǎn)品嚴(yán)重?fù)p害了食用菌產(chǎn)業(yè)聲譽(yù)。他指出，我國(guó)雖然從產(chǎn)量和消費(fèi)上已成為食用菌產(chǎn)業(yè)大國(guó)，但由于受小農(nóng)生產(chǎn)方式 和習(xí)慣影響，還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不是食用菌強(qiáng)國(guó)。 從生產(chǎn)銷售總體上看，中國(guó)食用菌存在著生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)不規(guī)范、產(chǎn)量大、價(jià)格低等問題。采用杏鮑菇液體菌種進(jìn)行生產(chǎn)具有菌種流動(dòng)性好、接種后易于分散、污染幾率小、菌絲萌發(fā)快、發(fā)菌點(diǎn)多、出菇時(shí)間整齊等特點(diǎn)。對(duì)培養(yǎng)過程中各指標(biāo)的變化情況分析如下：在培養(yǎng)前 3 天內(nèi)有少量新生菌球形成，為原轉(zhuǎn)接的菌球脫落體；培養(yǎng) 4 天，新生菌球增多，菌球邊緣有大量絨毛狀菌絲形成；第 6 天新生小菌球大量增加，是由于振蕩使大量絨毛狀菌絲脫落形成，所以數(shù)目急劇增多，菌球直徑達(dá)到最??；第 8 天菌球數(shù)目減少，可能是由于一些小菌球聚合成大的菌絲體，所以直徑變大； 9 天之后由于菌球開始老化自溶。營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，即發(fā)菌養(yǎng)菌階段。 杏鮑菇菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育包括菌絲的發(fā)菌、生長(zhǎng)周期、生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)、抗逆性、菌絲表現(xiàn)等。 通過對(duì)菌球直徑的測(cè)定得出第 六天菌球直徑最小 ，最小為 ；通過對(duì)菌球密度的測(cè)定得出第六天菌球密度最大 ，最大為 128 個(gè) /ml；通過對(duì)培養(yǎng)基 pH 的測(cè)定得出前七天內(nèi)較適合菌種生長(zhǎng)；通過對(duì)四種胞外酶活性的測(cè)定得出第六天酶活性 均 較高。 綜上所述，杏鮑菇液體菌種 在第六天最適合河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 15 接種。也就是說，在利用液體菌種生 產(chǎn)杏鮑菇的過程中，液體菌種的菌球直徑越小、密度越大、活性越強(qiáng)，則菌種的品質(zhì)越好，越有利于生產(chǎn)。所以總的來講：杏鮑菇四種胞外酶活性在第六天最大，菌種活性最強(qiáng)。 對(duì)于杏鮑菇液體菌種來講，胞外酶活性越大，說明菌種的活性越強(qiáng)，接種后菌絲萌發(fā)越快 [22]。 03 4 5 6 7 8 9Trianing daysOD values 圖 7 杏鮑菇漆酶活性變化曲線 Figure 7 Pleurotus eryngii laccase activity curve 由圖 7 可知： 杏鮑菇漆酶活性呈倒 V 型。菌球溶解后多酚氧化酶被釋放出來，所以 前期活性很低，后期較高。 多酚氧化 酶 在培養(yǎng)前期分泌較少，活性較低。 03 4 5 6 7 8 9Trianing daysOD values0 0 圖 6 杏鮑菇多酚氧化酶活性變化曲線 Figure 6 Pleurotus eryngii polyphenol oxidase activity curve 由圖 6 可知： 杏鮑菇多酚氧化酶活性變化曲線呈 S 型。 多酚氧化物酶活 性 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天 起每天上午用分光光度計(jì) 在 400nm 處 測(cè)定多酚氧化酶活性，以 OD 值表示。至于第九天又出現(xiàn)上升趨勢(shì)，可能與半纖維素有關(guān)。 河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 13 上述變化可能與培養(yǎng)基內(nèi)纖維素有關(guān)。 在前四天內(nèi)羧甲基纖維素 酶活性 很低，到第五天急劇分泌，第六天達(dá)到最大， 最大為 ， 之后又迅速下降。 羧甲基纖維素酶（ CMC 酶）活性 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午用分光光度計(jì) 在 520nm 處 測(cè)定羧甲基纖維素酶活性，以 OD 值表示 ，試驗(yàn)結(jié)果見圖 5。在培養(yǎng)初期菌種淀粉酶分泌較少，之后在豐富的多糖誘導(dǎo)下大量分泌淀粉酶。第八天以 后淀粉酶活性逐漸下降。 03 4 5 6 7 8 9Trianing daysOD values0 0 圖 4 杏鮑菇淀粉酶活性變化曲線 Figure 4 Pleurotus eryngii amylase activity curve 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 12 由圖 4 可知： 杏鮑菇淀粉酶活性變化曲線呈拋物線型。所以第八天以后培養(yǎng)基已不適合菌種生長(zhǎng)了。 這可 能與 杏鮑菇 液體 菌種 消耗有 機(jī)氮 源產(chǎn) 生酸 性代謝 廢物有關(guān)。 由圖 3 可知： 培養(yǎng)基 pH 變化曲線呈緩慢下降趨勢(shì)。 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 10 0204060801001201403 4 5 6 7 8 9Trianing daysFungus ball density 圖 2 杏鮑菇液體菌種菌球密度變化曲線 Figure 2 Pleurotus eryngii liquid bacteria bacteria density curve ball 不同培養(yǎng)時(shí)間下的液體培養(yǎng)基 pH 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午用精密 pH 試紙測(cè)量液體培養(yǎng)基 pH。 隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗和代謝廢物的增多，使得菌種競(jìng)爭(zhēng)加劇，生長(zhǎng)環(huán)境變惡劣，培養(yǎng)基越來越不適合菌種的生長(zhǎng)，菌種生長(zhǎng)逐漸變?nèi)跎踔镣Ｖ埂? 菌球直徑越小，菌球密度越大，菌種干重越大，則液體菌種流動(dòng)性越強(qiáng)，越易分散，發(fā)菌點(diǎn)越多，萌發(fā)越快。 由圖 2 可知： 液體菌種菌球密度變化曲線呈拋物線型：隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)菌球密度逐漸增加，在第 35 天呈指數(shù)型增加，在第六天達(dá)到最大，每毫升最多有 128 個(gè)。河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 9 另外有些小菌球聚合成大菌球也使菌球直徑變大。培養(yǎng)前期，培養(yǎng)基內(nèi)物理化學(xué)性狀較適合菌種生長(zhǎng)菌種迅速分裂增殖直徑變小。 菌球直徑大小反應(yīng) 了 菌種分裂生長(zhǎng)能力 的強(qiáng)弱 。 試驗(yàn)結(jié)果見圖 1。 數(shù)據(jù)處理 采用 Excel 等統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。（設(shè)置三個(gè)重復(fù)）。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 漆 酶 OD 值 為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 多酚氧化物酶 OD 值為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 羧甲基纖維素酶（ CMC酶）活性 OD 值 為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 淀粉酶活性 OD 值 為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 菌球密度（個(gè)）為縱坐標(biāo)，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時(shí)間（天）為橫坐標(biāo) ， 菌球直徑（ mm）為縱河南科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 7 坐標(biāo)，繪制曲線。且配置過程中，溶液加熱溫度不宜超過 50℃ 。但是一定要注意， 3， 5二硝基水楊酸和 NaOH 的加入時(shí)間一定要很近，或者是先加入 NaOH。 二級(jí)菌 種的制 備 ： 將一級(jí) 菌種 按試驗(yàn) 要求 接種于 裝有二 級(jí)培養(yǎng)基的 250ml 三角瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)，溫度 25℃ 、轉(zhuǎn)速 120r／ min。取 左右的母種菌塊接種于裝有 150ml 一級(jí)培養(yǎng)基的 250ml 三角瓶中，每瓶 3 塊， 25℃ 下靜置 2 天，然后在溫度 25℃ 、轉(zhuǎn)速150r/min，振蕩培養(yǎng) 5 天 [17]。配制方法如下：將 黃豆粉 加水煮沸 30min 后，用 80 目的篩網(wǎng)過濾，取其濾液，加入其他成分，補(bǔ)足水分，分裝在 250ml 的三角瓶中 ， 121℃ 濕熱滅菌 30min。用四層紗布過濾，杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 6 加熱，再據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需要加瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂融完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補(bǔ)足水分至 1000 毫升，分裝試管，加塞，包扎，滅菌 20 分鐘取出，試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆谩? 試管培養(yǎng)基：采用 PDA 培養(yǎng)基 ， 馬鈴薯 200 克， 葡萄糖 20 克，瓊脂 15 克，自來水 1000 毫升，自然 pH。 實(shí)驗(yàn)用具 80 目篩網(wǎng)，電磁爐， 250ml 三角瓶，試管，燒杯，