tlc基本原理(參考版)
2024-08-25 08:59本頁面
【正文】 TLC 的通用顯色方法 理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有： 紫外照射法：方便、不破壞樣品； 碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用； 熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯； 硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì) Rf 值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。經(jīng)典 TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑 3mm點(diǎn)間距離12cm 底邊距離 。但應(yīng)注意 更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。 薄層色譜小知識(shí) 怎樣提高點(diǎn)樣效率？ 點(diǎn)樣是造成 TLC 定量誤差的主要來源。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強(qiáng)極性。而展開距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開距離相應(yīng)縮短，一般不超過 10 厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于 250 目，并要求粒度均勻。 1．薄層層析的特點(diǎn)：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點(diǎn)與柱層析的比較。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析 時(shí)一即稱薄層層析。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時(shí)，需用不同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。如對(duì)于 C27 甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分 離：將混合皂甙元溶于含有 5％氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。現(xiàn)以實(shí)例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但 非極性基團(tuán)，則需選用吸附性較強(qiáng)的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮。當(dāng)然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會(huì)更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會(huì)強(qiáng)些。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個(gè)成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對(duì)非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強(qiáng)。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。然后漸增大溶劑的極性。在柱層操作時(shí)，被分離樣品在加樣時(shí)可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物
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