tlc基本原理-wenkub
2022-09-01 08:59:30 本頁(yè)面
【正文】 定量測(cè)定在 ～ 之間； ④ 不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)； ⑤ 沸點(diǎn)適中，黏度較??；⑥ 展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中； ⑦ 混合溶劑最好用新鮮配制。 用 TLC 跟蹤有機(jī)反應(yīng) 在同一塊板上點(diǎn)上原料樣和反應(yīng)混合物樣（均需配成稀溶液），按上述方法進(jìn)行展開(kāi)和顯色，記下原料樣的斑點(diǎn)位置和反應(yīng)混合物樣中相應(yīng)斑點(diǎn)的位置和大小。薄層的展開(kāi)在密閉的容器中進(jìn)行。 點(diǎn)樣 點(diǎn)樣用的毛細(xì)管為內(nèi)徑＜ lmm 的管口平整的毛細(xì)管，將樣品溶于低沸點(diǎn)的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）配成 1％溶液。 操作要點(diǎn)和說(shuō)明 薄層色譜法的整個(gè)過(guò)程包括以下步驟： 薄層板的制備 制薄層板的主要原料是吸附劑和粘結(jié)劑 吸附劑：最常用于 TLC 的吸附劑為硅膠 GF254； 硅膠 HF254。 粘結(jié)劑：一般用所羧甲基纖維素鈉（ CMC），也有用淀粉的。 點(diǎn)樣前，可先用鉛筆在小板上距一端 5mm處輕輕劃一橫線(xiàn)，作為起始線(xiàn)，然后用毛細(xì)管吸取樣品在起始線(xiàn)上小心點(diǎn)樣，如需重復(fù)點(diǎn)樣，則應(yīng)待前次點(diǎn)樣的溶劑揮發(fā)后方可重點(diǎn)。先將選擇的展開(kāi)劑放入色譜器中（小板可用廣口瓶代替），使色譜器內(nèi)空氣飽和 5－ 10min，再將點(diǎn)好試樣的薄層板放入色譜器中進(jìn)行展開(kāi)，點(diǎn)樣的位置必須在展開(kāi)劑液面之上，當(dāng)展開(kāi)劑上升到薄層的前沿（離前端 5－ 10mm）或多組分已明顯分開(kāi)時(shí)，取出薄層板放平晾干，用鉛筆劃溶劑前沿的位置后，即可顯色。過(guò)一定時(shí)間后，再取反應(yīng)混合物樣液點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色，如發(fā)現(xiàn)反應(yīng)混合液樣中相應(yīng)于原料斑點(diǎn)的位置處，無(wú)斑點(diǎn)或斑點(diǎn)變小，則說(shuō)明反應(yīng)已經(jīng)完成或接近完成，所以依此可跟蹤有機(jī)化學(xué)反應(yīng)。 一般來(lái)說(shuō)，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再 根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來(lái)調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類(lèi)等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類(lèi)的分離；強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類(lèi)化合物的分離。對(duì)于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開(kāi)劑里往往加一點(diǎn)點(diǎn)三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來(lái)中和硅膠的酸性。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開(kāi)條件，上下午的 Rf 截然不同。展開(kāi)劑的選擇條件：①對(duì)的所需成分有良好的溶解性；②可使成分間分開(kāi)；③待測(cè)組分的 Rf 在 ~，定量測(cè)定在 ～ ；④不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；⑤沸點(diǎn)適中，黏度較??；⑥展開(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中；⑦混合溶劑最好用新鮮配制。一 般把兩種溶劑混合時(shí) ,采用高極性 /低極性的體積比為 1/3 的混合溶劑 ,如果有分開(kāi)的跡象 ,再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑） ,達(dá)到最佳效果；如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對(duì)分離效果都有明顯的影響。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起
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