翻譯好的羅氏公司tunel試劑盒操作說明書-wenkub.com
2025-07-31 06:32 本頁面
【正文】 高速分裂和增殖的細(xì)胞，有時也會出現(xiàn)細(xì)胞核中的DNA斷裂。光照紫外線導(dǎo)致包埋試劑的聚合（如：甲基丙烯酸會導(dǎo)致樣本DNA的斷裂）嘗試改用其它包埋材料或其它聚合試劑在固定組織時樣本DNA已斷裂（內(nèi)源核酸酶的作用）確保樣品取樣后立即固定或通過肝靜脈灌注固定使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?，例如一些酸性固定液采用推薦的固定液固定后某些核酸酶活性依然較高導(dǎo)致DNA斷裂用含有dUTP和 dAPT的溶液封閉標(biāo)記率低如果以乙醇或甲醇固定的樣本則標(biāo)記效率較低（因為在固定時染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失）用溶于PBS %多聚甲醛固定或福爾馬林或戊二醛固定。8. 試劑保存；未打開的試劑盒貯存在20℃（15~25℃）；3號液（converter POD）液一旦解凍，以后就保存在4℃（2~8℃）下，至少在6 m內(nèi)穩(wěn)定，避免再次凍存；TUNEL反應(yīng)液臨用前配好后，放至冰上直至使用。6. 用甲基綠（Methyl Green）染液（35% 醋酸巴比妥 ）染色后，請用滅菌蒸餾水清洗多余的甲基綠。3. 在載玻片上的樣本上加上實驗用反應(yīng)液后，請蓋上蓋玻片或保鮮膜，或在濕盒中進行，這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體，又可以防止反應(yīng)液干燥造成實驗失敗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。5. PBS漂洗2次；6. 制備TUNEL反應(yīng)混合液：處理組用50μl 1號液+450μl 2號液混勻；而陰性對照組僅加50μl 2號液，陽性對照組先加入100μl DNase 1，反應(yīng)在15~25℃10min，后面步驟同處理組。三、 實驗步驟操作流程圖：制作石蠟切片→脫蠟、水合→細(xì)胞通透→加TUNEL反應(yīng)液→加converterPOD→與底物DAB反應(yīng)顯色→光學(xué)顯微鏡計數(shù)并拍照。其原理是熒光素（fluorescein）標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖
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