翻譯好的羅氏公司tunel試劑盒操作說明書(編輯修改稿)
2024-08-30 06:32 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 步驟同處理組。7. 玻片干后，加50μl TUNEL反應(yīng)混合液（陰性對(duì)照組僅加50μl 2號(hào)液）于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃1h。8. PBS漂洗3次；9. 可以加1滴PBS在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞（激發(fā)光波長(zhǎng)為450~500nm，檢測(cè)波長(zhǎng)為515~565nm）；10. 玻片干后加50μl 3號(hào)液（converterPOD）于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃30min。11. PBS漂洗3次；12. 在組織處加50~100μl DAB底物，反應(yīng)15~25℃10min；13. PBS漂洗3次；14. 拍照后再用蘇木素或甲基綠復(fù)染，幾秒后立即用自來水沖洗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。15. 加一滴PBS或甘油在視野下，用光學(xué)顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞（共計(jì)200~500個(gè)細(xì)胞）并拍照?？山Y(jié)合凋亡細(xì)胞形態(tài)特征來綜合判斷（未染色細(xì)胞變小，胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，晚期出現(xiàn)凋亡小體，貼壁細(xì)胞出現(xiàn)鄒縮、變圓、脫落；而染色細(xì)胞呈現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解，染色質(zhì)分割成塊狀/凋亡小體）對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的預(yù)處理：①在載玻片上鋪一層薄薄的多聚賴氨酸，干燥后在去離子水中漂洗，干燥后4℃保存；②適當(dāng)方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)未經(jīng)誘導(dǎo)的對(duì)照組，各組離心收集約1106個(gè)細(xì)胞，PBS洗一次，重懸，加到鋪好的多聚賴氨酸載玻片上，自然干燥，使細(xì)胞很好的吸附到載玻片上；③將吸附細(xì)胞的載玻片在4%多聚甲醛中固定25min；④PBS浸洗二次，每次5min；⑤%的Triton X100中處理5min；⑥PBS浸洗二次，每次5min；后續(xù)操作如同石蠟包埋切片的615四、 注意事項(xiàng)1. 進(jìn)行PBS 清洗時(shí)，每次清洗5 min。2. PBS清洗后，為了各種反應(yīng)的有效進(jìn)行，請(qǐng)盡量除去PBS 溶液后再進(jìn)行下一步反應(yīng)。3. 在載玻片
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