漢恒生物無縫克隆試劑盒使用說明(附原理)-wenkub.com
2025-04-01 23:32 本頁面
【正文】 至此拼接完成（D）。. 挑取平板上的克隆進行PCR或者酶切鑒定。. 輕輕搖勻后放入42℃水浴中1~2 min進行熱激，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。反應完成之后如不能馬上進行后續(xù)操作可將反應樣品暫儲存于20℃。針對雙酶切法線性化載體設計插入片段的PCR引物，其重疊區(qū)域為15~25 bp+酶切位點，這樣重組成功的質(zhì)粒上會完好保留此兩個酶切位點。C）便于拼接反應的進行。. 目的插入片段制備設計引物進行目的片段PCR擴增，引物設計要保證目的片段兩端有15~25 bp序列與線性化載體的兩端一致（重疊序列的Tm179。 圖2. PCR法線性化載體示意圖。 2. 質(zhì)粒單酶切容易造成載體切割不完全和自連，導致假陽性的產(chǎn)生。650 daltons)（堿基數(shù)越多，pmols越少；質(zhì)量越大，pmols越多），舉例如下：線性化載體（~5000 bp）50 ng插入片段（~500 bp）10~25 ng注：50 ng的5000 bp（ pmols）的線性化dsDNA和10~25 ng（~ pmols）500 bp的PCR產(chǎn)物體系（PCR產(chǎn)物和線性化載體的摩爾比=2：1~5：1）。三、產(chǎn)品包裝產(chǎn)品組成使用次數(shù)體積2 x HBinfusionTM Master mix20 tests200 mlPositive lineariz
化學相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1