其它標(biāo)記免疫分析技術(shù)-wenkub.com
2025-01-15 18:53 本頁(yè)面
【正文】 化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，分為直接化學(xué)發(fā)光免疫分析，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析。與此同時(shí)電極加壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使三聯(lián)吡啶釕和 TPA在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光，光的強(qiáng)度與待測(cè)抗原的濃度成正比。 （二） ALP標(biāo)記的 CLEIA 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析 (enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA ) 在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強(qiáng)發(fā)光劑 , 如對(duì) 2碘苯 酚等 , 以增強(qiáng)發(fā)光信號(hào) , 并在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定 , 便于重復(fù)測(cè)量 , 從而提高分析靈敏度和準(zhǔn)確性。 ? 第二種是以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定的底物，通過(guò)發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定的敏感性。后者可進(jìn)一步用 NaBH４ (或乙醇胺 )還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記抗體。 1．魯米諾及其衍生物 2． AMPPD （二）酶促反應(yīng)發(fā)光劑 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （ luminol， 5＇ 氨基 2， 3二氫 1， 4酞嗪二酮）的分子結(jié)構(gòu)及化學(xué)反應(yīng)式如下 1. 魯米諾 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 魯米諾的衍生物主要有異魯米諾、 4— 氨基已基 —N 一乙基異魯諾及 AHEI 和 ABEI 等。 作為化學(xué)發(fā)光劑的條件 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。 ? 激發(fā)態(tài)分子必須具有一定的化學(xué)發(fā)光量子效率釋放出光子 , 或者能夠轉(zhuǎn)移它的能量給另一個(gè)分子使之進(jìn)入激發(fā)態(tài)并釋放出光子。γ 其中 γ 為光子， C*表示 C處于單線激發(fā)態(tài) （一）直接化學(xué)發(fā)光 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 若激發(fā)能傳遞到另一個(gè)未參加化學(xué)反應(yīng)的分子 D上，使 D分子激發(fā)到電子激發(fā)態(tài)， D分子從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)發(fā)光。 化學(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過(guò)程，其機(jī)制為某些化合物（發(fā)光劑或發(fā)光底物）可以利用一個(gè)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子激態(tài)。 一、概述 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) ? 光照發(fā)光 （ photoluminescence）： 發(fā)光劑經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照射后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)回復(fù)至基態(tài)時(shí)發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見(jiàn)光。斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)是在將硝酸纖維素膜包被了抗原或抗體，將其置于滲濾裝置中，進(jìn)行免疫結(jié)合試驗(yàn)，斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)是以硝酸纖維素膜為載體將膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)相結(jié)合免疫分析技術(shù)。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （二）試驗(yàn)方法 免疫層析試驗(yàn)以 單克隆雙抗體夾心法 為例 。 3）于小孔內(nèi)滴加洗滌液 2～ 3滴，待完全滲入，洗去未結(jié)合的膠體金標(biāo)記抗體。 放射性免疫技術(shù)靈敏度高、特異性強(qiáng)，常用于微量物質(zhì)的定量測(cè)定。 放射性核素標(biāo)記于抗體上，用過(guò)量的標(biāo)記抗體 *Ab與待測(cè)抗原 Ag反應(yīng)，待反應(yīng)完成后，去除剩余的游離標(biāo)記抗體，則 Ag*Ab復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原的量成正比關(guān)系，通過(guò)檢測(cè)免疫復(fù)合物的放射性，從而得到待測(cè)樣本的濃度。 ◇ 是反映血清中有效抗體含量的相對(duì)參數(shù)。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) ② 抗體特異性 抗體特異性： 指抗體分別與相應(yīng)抗原和抗原結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的結(jié)合能力的比較。 常用的標(biāo)記方法： ◇ 直接標(biāo)記法 ◇ 間接標(biāo)記法 （三）放射性核素標(biāo)記物的制備 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （四） 放射性核素標(biāo)記物的純化與鑒定 （ 1）標(biāo)記物的純化 常用的純化方法： △ 凝膠過(guò)濾法或薄層層析法 △ 離子交換法 △ 透析法 △ 電泳法（聚丙烯酰胺凝膠電泳法） △ 高效液相色譜法。 放射性核素根據(jù)其衰變方式分為 α 、 β 、 γ 三種，用于放射標(biāo)記的有 β （ 14C、 3H）、 γ （ 131I和 125I）兩種，分別用液體閃爍技術(shù)和 γ 計(jì)數(shù)器測(cè)定。 目前以 125I應(yīng)用最為廣泛。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （ 2）標(biāo)記物的鑒定 標(biāo)記化合物的質(zhì)量指標(biāo)： ◇ 放射性核純度 ◇ 放射化學(xué)純度 ◇ 放射性比活度 ◇
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