其它標(biāo)記免疫分析技術(shù)-文庫(kù)吧
2025-01-03 18:53 本頁(yè)面
【正文】 非平衡法 ★ 抗原抗體反應(yīng) 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) ★ 免疫復(fù)合物（ B）與游離標(biāo)記物（ F）的分離 雙抗體法 化學(xué)沉淀法 PR 試劑法 吸附法 固相分離法 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) ?晶體閃爍計(jì)數(shù)器包括了 NaI閃爍晶體、光電倍增管以及計(jì)數(shù)器 ?測(cè)量的放射性信 號(hào)是儀器輸出的 電脈沖數(shù)：每分鐘計(jì)數(shù) (cpm) 計(jì)算 參數(shù) cpm B/T (%) F/T (%) B/F (%) B/B0 (%) 擬合 注： T即是 B與 F的總和 標(biāo)準(zhǔn)曲線 放射強(qiáng)度測(cè)定 數(shù)據(jù)處理 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （三）方法學(xué)評(píng)價(jià) RIA進(jìn)行體外檢測(cè)微量物質(zhì)，靈敏度高特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，但需注意放射性核素對(duì)環(huán)境造成的污染。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 三、免疫放射分析 （一）免疫放射分析原理 （二）實(shí)驗(yàn)方法 （三）方法學(xué)評(píng)價(jià) （四） IRMA和 RIA的比較 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （一）免疫放射分析原理 免疫放射分析的基本原理是 非競(jìng)爭(zhēng)性 免疫結(jié)合反應(yīng)。 放射性核素標(biāo)記于抗體上，用過量的標(biāo)記抗體 *Ab與待測(cè)抗原 Ag反應(yīng)，待反應(yīng)完成后，去除剩余的游離標(biāo)記抗體，則 Ag*Ab復(fù)合物的放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原的量成正比關(guān)系，通過檢測(cè)免疫復(fù)合物的放射性，從而得到待測(cè)樣本的濃度。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 單位點(diǎn) IRMA 雙位點(diǎn) IRMA 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （二）實(shí)驗(yàn)方法 ◆ 抗原抗體反應(yīng) ◆ 免疫復(fù)合物與游離標(biāo)記物的分離 ◆ 放射性強(qiáng)度測(cè)定和數(shù)據(jù)處理 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) （三）方法學(xué)評(píng)價(jià) IRMA的靈敏度和特異性均比 RIA更好，且操作程序簡(jiǎn)單，但是應(yīng)用的抗體量較大。 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) IRMA和 RIA的比較 IRMA RIA 標(biāo)記物質(zhì) 抗體 抗原 標(biāo)記物用量 過量 限量 反應(yīng)方式 直接結(jié)合 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合 B、 F分離方法 固相抗體法等 第二抗體法等 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 小 結(jié) 放射免疫技術(shù)是以放射性核素為示蹤劑的標(biāo)記免疫技術(shù)，分為放射免疫技術(shù)和免疫放射分析。 放射免疫分析 是待測(cè)抗原和定量的標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合限量的抗體， 免疫放射分析 是將放射性物質(zhì)標(biāo)記在抗體上，免疫放射分析分為單位點(diǎn)和雙位點(diǎn)兩種類型。 放射性免疫技術(shù)靈敏度高、特異性強(qiáng)，常用于微量物質(zhì)的定量測(cè)定。 返回章目錄 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社第二節(jié) 金標(biāo)記免疫分析技術(shù) 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 28 一、 膠體金的一般特性 免疫膠體金技術(shù) 是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。 膠體金是由氯金酸（ HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金 （ colloidal gold） 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 膠體金粒徑（ nm） 1％檸檬酸三鈉加入量（ ml） * 膠體金特性 呈色 λmax 16 橙色 518nm 橙紅 522nm 41 紅色 525nm 紫色 535nm 不同粒徑膠體金的制備和特性 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 二、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn) （一）原理 （二）試驗(yàn)方法 人民衛(wèi)生出版社 第九章 其它標(biāo)記免疫分析技術(shù) 技術(shù)要點(diǎn) 1）將反應(yīng)板平放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上，于小孔內(nèi)滴加含待測(cè)抗原標(biāo)本 1～ 2滴，待完全滲入，與膜上的抗體反應(yīng)而結(jié)合在膜上。 2）于小孔內(nèi)滴加膠體金標(biāo)記抗體試劑 1～ 2滴，待完全滲入，使膠體金標(biāo)記抗體與結(jié)合在膜上抗原反應(yīng)。 3）于小孔內(nèi)滴加洗滌液 2～ 3滴，待完全滲入，洗去未結(jié)合的膠體金標(biāo)記抗體。 4）結(jié)果觀察 在膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點(diǎn)顯示者判為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則為陰性反應(yīng)。斑點(diǎn)呈色的深淺相應(yīng)地提示陽(yáng)性
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