【正文】 七十四 頁 。研究人數(shù) 1,700 Patients? 秘 魯 (b236。 lǔ)、南非、阿塞拜疆、印度?涂片陽性樣品 (y224。ngpǐn)：?靈敏性 %,特異性 %?涂片陰性 , 培養(yǎng)陽性樣品：?三次檢測靈敏性 %? 一次檢測靈敏性 % ?對利福平耐藥性檢測：?靈敏性 %,特異性 %第六十一 頁 ，共七十四 頁 。結(jié)論 (ji233。l249。n)? GeneXpert檢測 Mtb簡單、易于操作，對操作者技術(shù)要求不高：只需要把痰液、反應(yīng)液加入儀器即可得出診斷報告；? GeneXpert檢測 Mtb快速：整個過程大約 2小時。? GeneXpert檢測 Mtb對操作人員安全：整個檢測過程全封閉、一次性完成 (w225。n ch233。ng)。? 高靈敏性： BCG—176 cfu/ml ； H57Rv—112 cfu/ml? 耐藥性診斷：可對利福平耐藥性進行檢測第六十二 頁 ，共七十四 頁 ?，F(xiàn)代 (xi224。nd224。i)免疫學(xué)診斷技術(shù)? 體液免疫診斷技術(shù)：是利用結(jié)核分枝桿菌或其提取物抗原檢測結(jié)核病患者血清抗體的方法。目前，通過檢測抗結(jié)核桿菌的抗體(IgG)診斷結(jié)核病的商品化試劑盒已較多。采用 (cǎiy242。ng)的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)和免疫金標(biāo)記技術(shù)的免疫層析法和膠體金標(biāo)記的滲濾法等，采用 (cǎiy242。ng)的抗原也各不相同。第六十三 頁 ，共七十四 頁 。體液 (tǐy232。)免疫學(xué)診斷技術(shù)的意義? 在國內(nèi)應(yīng)用較廣泛，是結(jié)核病的輔助診斷方法之一 ,尤其對肺外結(jié)核、菌陰肺結(jié)核的診斷具有應(yīng)用價值。? 不足之處：單獨使用時，其檢測的特異性和靈敏度都有些缺點 。? 目前國際上反對 (fǎndu236。)使用該項技術(shù)的呼聲在增加。原因主要是特異性問題。 第六十四 頁 ，共七十四 頁 。細胞 (x236。bāo)免疫學(xué)診斷技術(shù)? 細胞免疫診斷技術(shù)應(yīng)用較少，過去 (gu242。q249。)主要應(yīng)用 PPD皮試技術(shù) ， 近年來英國和澳大利亞研制了 ELISpot 、 TSpot技術(shù)和 QFTGold 。? 此項技術(shù)用于感染情況的檢測是一項特異性較強、靈敏度較高很有希望的新技術(shù)。第六十五 頁 ，共七十四 頁 。? 酶聯(lián)免疫斑點 (ELISpot)技術(shù) 是檢測細胞分泌細胞因子的一種實驗 (sh237。y224。n)方法，采用可定量的夾心 ELISA方法，利用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原 ESAT6 CFP10刺激和激活免疫活性細胞使其產(chǎn)生 IFN?，并 檢測 IFN?的濃度變化進行診斷的方法。通過 ELISpot酶聯(lián)斑點分析系統(tǒng)對加底物后形成的斑點分析后得出結(jié)果。 ELISpot具有較高的特異性和敏感性。第六十六 頁 ，共七十四 頁 。ELISPOT技術(shù) (j236。sh249。)原理? 細胞免疫主要由 T淋巴細胞發(fā)動， T淋巴細胞分成效應(yīng) T淋巴細胞和記憶 T淋巴細胞。記憶T淋巴細胞在首次感染病原體后長期存在免疫系統(tǒng)中。當(dāng)再次受到感染刺激后。這些記憶 T淋巴細胞發(fā)出信號分子并增殖成為效應(yīng) T淋巴細胞，效應(yīng) T淋巴細胞分泌細胞因子，如 干擾素 (INFγ ) 。所以無論是否 (sh236。 fǒu)有臨床癥狀，檢測效應(yīng) T淋巴細胞在血中的水平可作為機體是否 (sh236。 fǒu)被感染的指標(biāo)。第六十七 頁 ，共七十四 頁 。ELISPOT在結(jié)核病診斷在結(jié)核病診斷 (zhěndu224。n)中的應(yīng)中的應(yīng)用用在 MTB潛伏感染診斷中的應(yīng)用? 早期診斷 MTB潛伏感染對控制結(jié)核病意義重大。目前診斷MTB潛伏感染仍沿用 100年來使用的 TST，但 TST不能區(qū)分MTB感染患者和接種 BCG的健康人以及感染環(huán)境 (hu225。nj236。ng)中的分枝桿菌患者。? Lalvani在土耳其檢查了暴露于肺結(jié)核家庭環(huán)境中的908名健康兒童。皮試結(jié)果表明 580名兒童患有潛伏性肺結(jié)核 ,需要進行藥物治療 ,以免轉(zhuǎn)化為活動性肺結(jié)核 。而 ELISPOT結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有 380名兒童患有潛伏性肺結(jié)核。通過 ELISPOT檢測 ,只需要治療 380名兒童 ,而不是 580名 ,但卻能夠預(yù)防同樣數(shù)量的活動性肺結(jié)核病例發(fā)生。因此， ELISPOT 比 TST篩選結(jié)核潛伏感染更有效 ,而且 ELISPOT檢測結(jié)果與 MTB的接觸程度相關(guān)性更強。 第六十八 頁 ，共七十四 頁 。 ELISPOT早期技術(shù)評估 英國 Ewer等用 ELISpot檢測對結(jié)核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反應(yīng)的 T淋巴細胞來診斷早期結(jié)核病。這項研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的535名學(xué)生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(TST)和 ELISpot的一致性達89%(P)。但 ELISpot與研究對象結(jié)核病接觸程度之間的正相關(guān)性顯著強于TST。在接種過 BCG的兒童中， TST假陽性的可能性較大，而 BCG接種對 ELISpot結(jié)果沒有影響。作者 (zu242。zhě)認為 ELISpot可開始替代 TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時就可進行預(yù)防，而不至于發(fā)展成為嚴(yán)重的結(jié)核病。 第六十九 頁 ，共七十四 頁 。ELISPOT法的優(yōu)點法的優(yōu)點 (yōudiǎn)? (1)靈敏、特異，能從 100萬個細胞中測出 1個分泌INF細胞；只有 MTB和少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會出現(xiàn)陽性反應(yīng)，而 BCG及多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌因不分泌ESAT6和 CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別 BCG接種出現(xiàn)的陽性反應(yīng)。 (2)快速：能早期診斷結(jié)核感染，檢測全過程 2天。 (3)應(yīng)用面廣：在肺結(jié)核、肺外結(jié)核及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測。 (4)療效 (li225。oxi224。o)評估：當(dāng)結(jié)核菌被消滅后，效應(yīng) T淋巴細胞即消失，測定效應(yīng) T淋巴細胞也可檢測機體是否清除了結(jié)核菌，進行臨床療效 (li225。oxi224。o)評估 。第七十 頁 ，共七十四 頁 。ELISPOT技術(shù)技術(shù) (j236。sh249。)的缺點的缺點? 細胞培養(yǎng)及抗原刺激時 ,有發(fā)生細菌污染的可能 ,以致實驗失敗 。 ? 實驗過程步驟較多 ,實驗人員需有一定的理論 (lǐl249。n)基礎(chǔ)并經(jīng)多次操作的培訓(xùn)方能勝任 。 ? 目前試劑價格比較昂貴。第七十一 頁 ，共七十四 頁 。結(jié)束語? 結(jié)核病準(zhǔn)確、快速的診斷是結(jié)核病防治人員多年期盼的。隨著科技不斷進步，今天企盼(qǐp224。n)已經(jīng)成為可能。經(jīng)過不斷的對現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和繼續(xù)努力開發(fā)更新的技術(shù)，相信未來的結(jié)核病實驗室診斷，一定可以最大限度的滿足臨床和防治工作的需要。第七十二 頁 ，共七十四 頁 。謝謝 (xi232。 xie)！第七十三 頁 ，共七十四 頁 。內(nèi)容 (n232。ir243。ng)總結(jié)結(jié) 核病 細 菌學(xué) 檢驗 的 標(biāo) 準(zhǔn)化與新 診 斷技 術(shù)進 展。 重復(fù) 緩 慢吸氣 動 作或平靜呼吸片刻，準(zhǔn) 備 再次咳嗽的 動 作。如使用的 載 玻片一端有磨砂面，可使用 2B鉛 筆在磨砂面上直接 書 寫 )。以 現(xiàn)場 和非 現(xiàn)場 督 導(dǎo)為 主要方式。（ 1）定性 誤 差包括 (bāoku242。)高假陽性和高假陰性。 5）重新 購 置 質(zhì) 量合格的染料并重新配制染液。與 Southern雜 交和 酶 促化學(xué) 發(fā) 光技 術(shù)檢測 的靈敏度相似 ,但要比 酶 促比色法提高 10倍。固體 /液體培養(yǎng)物 **。 謝謝第七十四 頁 ，共七十四 頁