【正文】 七十四 頁(yè) 。研究人數(shù) 1,700 Patients? 秘 魯 (b236。 lǔ)、南非、阿塞拜疆、印度?涂片陽(yáng)性樣品 (y224。ngpǐn)：?靈敏性 %,特異性 %?涂片陰性 , 培養(yǎng)陽(yáng)性樣品：?三次檢測(cè)靈敏性 %? 一次檢測(cè)靈敏性 % ?對(duì)利福平耐藥性檢測(cè)：?靈敏性 %,特異性 %第六十一 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。結(jié)論 (ji233。l249。n)? GeneXpert檢測(cè) Mtb簡(jiǎn)單、易于操作，對(duì)操作者技術(shù)要求不高：只需要把痰液、反應(yīng)液加入儀器即可得出診斷報(bào)告；? GeneXpert檢測(cè) Mtb快速：整個(gè)過(guò)程大約 2小時(shí)。? GeneXpert檢測(cè) Mtb對(duì)操作人員安全：整個(gè)檢測(cè)過(guò)程全封閉、一次性完成 (w225。n ch233。ng)。? 高靈敏性： BCG—176 cfu/ml ； H57Rv—112 cfu/ml? 耐藥性診斷：可對(duì)利福平耐藥性進(jìn)行檢測(cè)第六十二 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。現(xiàn)代 (xi224。nd224。i)免疫學(xué)診斷技術(shù)? 體液免疫診斷技術(shù)：是利用結(jié)核分枝桿菌或其提取物抗原檢測(cè)結(jié)核病患者血清抗體的方法。目前，通過(guò)檢測(cè)抗結(jié)核桿菌的抗體(IgG)診斷結(jié)核病的商品化試劑盒已較多。采用 (cǎiy242。ng)的方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)和免疫金標(biāo)記技術(shù)的免疫層析法和膠體金標(biāo)記的滲濾法等，采用 (cǎiy242。ng)的抗原也各不相同。第六十三 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。體液 (tǐy232。)免疫學(xué)診斷技術(shù)的意義? 在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較廣泛，是結(jié)核病的輔助診斷方法之一 ,尤其對(duì)肺外結(jié)核、菌陰肺結(jié)核的診斷具有應(yīng)用價(jià)值。? 不足之處：?jiǎn)为?dú)使用時(shí)，其檢測(cè)的特異性和靈敏度都有些缺點(diǎn) 。? 目前國(guó)際上反對(duì) (fǎndu236。)使用該項(xiàng)技術(shù)的呼聲在增加。原因主要是特異性問(wèn)題。 第六十四 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。細(xì)胞 (x236。bāo)免疫學(xué)診斷技術(shù)? 細(xì)胞免疫診斷技術(shù)應(yīng)用較少，過(guò)去 (gu242。q249。)主要應(yīng)用 PPD皮試技術(shù) ， 近年來(lái)英國(guó)和澳大利亞研制了 ELISpot 、 TSpot技術(shù)和 QFTGold 。? 此項(xiàng)技術(shù)用于感染情況的檢測(cè)是一項(xiàng)特異性較強(qiáng)、靈敏度較高很有希望的新技術(shù)。第六十五 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。? 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn) (ELISpot)技術(shù) 是檢測(cè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的一種實(shí)驗(yàn) (sh237。y224。n)方法，采用可定量的夾心 ELISA方法，利用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原 ESAT6 CFP10刺激和激活免疫活性細(xì)胞使其產(chǎn)生 IFN?，并 檢測(cè) IFN?的濃度變化進(jìn)行診斷的方法。通過(guò) ELISpot酶聯(lián)斑點(diǎn)分析系統(tǒng)對(duì)加底物后形成的斑點(diǎn)分析后得出結(jié)果。 ELISpot具有較高的特異性和敏感性。第六十六 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。ELISPOT技術(shù) (j236。sh249。)原理? 細(xì)胞免疫主要由 T淋巴細(xì)胞發(fā)動(dòng)， T淋巴細(xì)胞分成效應(yīng) T淋巴細(xì)胞和記憶 T淋巴細(xì)胞。記憶T淋巴細(xì)胞在首次感染病原體后長(zhǎng)期存在免疫系統(tǒng)中。當(dāng)再次受到感染刺激后。這些記憶 T淋巴細(xì)胞發(fā)出信號(hào)分子并增殖成為效應(yīng) T淋巴細(xì)胞，效應(yīng) T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，如 干擾素 (INFγ ) 。所以無(wú)論是否 (sh236。 fǒu)有臨床癥狀，檢測(cè)效應(yīng) T淋巴細(xì)胞在血中的水平可作為機(jī)體是否 (sh236。 fǒu)被感染的指標(biāo)。第六十七 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。ELISPOT在結(jié)核病診斷在結(jié)核病診斷 (zhěndu224。n)中的應(yīng)中的應(yīng)用用在 MTB潛伏感染診斷中的應(yīng)用? 早期診斷 MTB潛伏感染對(duì)控制結(jié)核病意義重大。目前診斷MTB潛伏感染仍沿用 100年來(lái)使用的 TST，但 TST不能區(qū)分MTB感染患者和接種 BCG的健康人以及感染環(huán)境 (hu225。nj236。ng)中的分枝桿菌患者。? Lalvani在土耳其檢查了暴露于肺結(jié)核家庭環(huán)境中的908名健康兒童。皮試結(jié)果表明 580名兒童患有潛伏性肺結(jié)核 ,需要進(jìn)行藥物治療 ,以免轉(zhuǎn)化為活動(dòng)性肺結(jié)核 。而 ELISPOT結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有 380名兒童患有潛伏性肺結(jié)核。通過(guò) ELISPOT檢測(cè) ,只需要治療 380名兒童 ,而不是 580名 ,但卻能夠預(yù)防同樣數(shù)量的活動(dòng)性肺結(jié)核病例發(fā)生。因此， ELISPOT 比 TST篩選結(jié)核潛伏感染更有效 ,而且 ELISPOT檢測(cè)結(jié)果與 MTB的接觸程度相關(guān)性更強(qiáng)。 第六十八 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。 ELISPOT早期技術(shù)評(píng)估 英國(guó) Ewer等用 ELISpot檢測(cè)對(duì)結(jié)核分枝桿菌分泌的抗原有特異性反應(yīng)的 T淋巴細(xì)胞來(lái)診斷早期結(jié)核病。這項(xiàng)研究共納入了結(jié)核流行區(qū)有不同程度結(jié)核病接觸史的535名學(xué)生，結(jié)果顯示結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(TST)和 ELISpot的一致性達(dá)89%(P)。但 ELISpot與研究對(duì)象結(jié)核病接觸程度之間的正相關(guān)性顯著強(qiáng)于TST。在接種過(guò) BCG的兒童中， TST假陽(yáng)性的可能性較大，而 BCG接種對(duì) ELISpot結(jié)果沒(méi)有影響。作者 (zu242。zhě)認(rèn)為 ELISpot可開(kāi)始替代 TST，這將使更多的人能在感染仍處于隱匿期時(shí)就可進(jìn)行預(yù)防，而不至于發(fā)展成為嚴(yán)重的結(jié)核病。 第六十九 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。ELISPOT法的優(yōu)點(diǎn)法的優(yōu)點(diǎn) (yōudiǎn)? (1)靈敏、特異，能從 100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中測(cè)出 1個(gè)分泌INF細(xì)胞；只有 MTB和少數(shù)非結(jié)核分枝桿菌才會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，而 BCG及多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌因不分泌ESAT6和 CFP10蛋白，因此本法能區(qū)別 BCG接種出現(xiàn)的陽(yáng)性反應(yīng)。 (2)快速：能早期診斷結(jié)核感染，檢測(cè)全過(guò)程 2天。 (3)應(yīng)用面廣：在肺結(jié)核、肺外結(jié)核及免疫抑制的結(jié)核患者均能檢測(cè)。 (4)療效 (li225。oxi224。o)評(píng)估：當(dāng)結(jié)核菌被消滅后，效應(yīng) T淋巴細(xì)胞即消失，測(cè)定效應(yīng) T淋巴細(xì)胞也可檢測(cè)機(jī)體是否清除了結(jié)核菌，進(jìn)行臨床療效 (li225。oxi224。o)評(píng)估 。第七十 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。ELISPOT技術(shù)技術(shù) (j236。sh249。)的缺點(diǎn)的缺點(diǎn)? 細(xì)胞培養(yǎng)及抗原刺激時(shí) ,有發(fā)生細(xì)菌污染的可能 ,以致實(shí)驗(yàn)失敗 。 ? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程步驟較多 ,實(shí)驗(yàn)人員需有一定的理論 (lǐl249。n)基礎(chǔ)并經(jīng)多次操作的培訓(xùn)方能勝任 。 ? 目前試劑價(jià)格比較昂貴。第七十一 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。結(jié)束語(yǔ)? 結(jié)核病準(zhǔn)確、快速的診斷是結(jié)核病防治人員多年期盼的。隨著科技不斷進(jìn)步，今天企盼(qǐp224。n)已經(jīng)成為可能。經(jīng)過(guò)不斷的對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的優(yōu)化和繼續(xù)努力開(kāi)發(fā)更新的技術(shù)，相信未來(lái)的結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷，一定可以最大限度的滿足臨床和防治工作的需要。第七十二 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。謝謝 (xi232。 xie)！第七十三 頁(yè) ，共七十四 頁(yè) 。內(nèi)容 (n232。ir243。ng)總結(jié)結(jié) 核病 細(xì) 菌學(xué) 檢驗(yàn) 的 標(biāo) 準(zhǔn)化與新 診 斷技 術(shù)進(jìn) 展。 重復(fù) 緩 慢吸氣 動(dòng) 作或平靜呼吸片刻，準(zhǔn) 備 再次咳嗽的 動(dòng) 作。如使用的 載 玻片一端有磨砂面，可使用 2B鉛 筆在磨砂面上直接 書 寫 )。以 現(xiàn)場(chǎng) 和非 現(xiàn)場(chǎng) 督 導(dǎo)為 主要方式。（ 1）定性 誤 差包括 (bāoku242。)高假陽(yáng)性和高假陰性。 5）重新 購(gòu) 置 質(zhì) 量合格的染料并重新配制染液。與 Southern雜 交和 酶 促化學(xué) 發(fā) 光技 術(shù)檢測(cè) 的靈敏度相似 ,但要比 酶 促比色法提高 10倍。固體 /液體培養(yǎng)物 **。 謝謝第七十四 頁(yè) ，共七十四 頁(yè)