20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第三章細(xì)胞破碎-資料下載頁(yè)
2024-11-16 00:37本頁(yè)面
【正文】 相結(jié)合時(shí)，可采用機(jī)械法和化學(xué)法相結(jié)合的方法，以促進(jìn)產(chǎn)物溶解度的提高或緩和(huǎnh233。)操作條件，但保持產(chǎn)物的釋放率不變。,第七十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。,3.4 破碎技術(shù)的發(fā)展(fāzhǎn)方向,為解決破碎過(guò)程中敏感性物質(zhì)的失活，雜蛋白太多以及碎片的去除問(wèn)題，細(xì)胞破碎技術(shù)研究(y225。njiū)還應(yīng)注意以下問(wèn)題:,第七十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。,① 多種破碎方法相結(jié)合。即機(jī)械方法與非機(jī)械方法的結(jié)合等，如用細(xì)胞壁溶解酶預(yù)處理面包酵母，然后高壓勻漿，在95MPa壓力下勻漿4次，總破碎率可接近(jiēj236。n)100% ,而單獨(dú)高壓勻漿法破碎率只有32%。,第七十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。,化學(xué)法與酶法取決于細(xì)胞壁膜的化學(xué)組成，機(jī)械法取決于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的機(jī)械強(qiáng)度，而化學(xué)組成又決定了結(jié)構(gòu)的機(jī)械強(qiáng)度，組成的變化(bi224。nhu224。)必然影響到強(qiáng)度的差異，這就是化學(xué)法與機(jī)械法相結(jié)合的原理。,第七十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。,細(xì)胞 ↓酶法或化學(xué)法處理 破壞細(xì)胞壁某些物質(zhì)組成(zǔ ch233。nɡ) ↓ 壁的機(jī)械強(qiáng)度↓ ↓機(jī)械法處理 細(xì)胞破碎率↑,第七十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。,例：面包酵母細(xì)胞的破碎 用溶解酶（Zymolyase）預(yù)處理，然后在95MPa壓力(yāl236。)下高壓勻漿4次，總破碎率接近100%。 而單獨(dú)用95MPa壓力高壓勻漿4次，破碎率只有32%。,第七十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。,（2）與上游(sh224。ngy243。u)相結(jié)合,寄主細(xì)胞(x236。bāo)的選擇：選擇較易破壁的菌種作為寄主細(xì)胞，如革蘭氏陰性細(xì)菌。 培養(yǎng)過(guò)程控制：在發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程的細(xì)胞生長(zhǎng)的后期，加入某些能抑制或阻止細(xì)胞壁物質(zhì)合成的抑制劑（如青霉素、環(huán)絲氨酸等），繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后，新分裂的細(xì)胞其細(xì)胞壁存在缺陷，利于破碎，而有些胞內(nèi)產(chǎn)物不經(jīng)破碎即可直接滲透出來(lái)。,第八十頁(yè)，共九十一頁(yè)。,克隆噬菌體溶解基因：在細(xì)胞內(nèi)引進(jìn)(yǐnj236。n)噬菌體基因，培養(yǎng)結(jié)束后，控制一定條件(如溫度等)，激活噬菌體基因，使細(xì)胞自?xún)?nèi)向外溶解，釋放出內(nèi)含物。 耐高溫產(chǎn)品的基因表達(dá)：如果產(chǎn)品能表達(dá)成耐高溫型，雜蛋白仍然保持原特性，那么就可在較高溫度下將產(chǎn)品與雜質(zhì)分開(kāi)，這樣既節(jié)省了冷卻費(fèi)用，又簡(jiǎn)化了分離步驟。,第八十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。,（3）與下游(xi224。y243。u)相結(jié)合,細(xì)胞破碎與固液分離和產(chǎn)品提取過(guò)程相結(jié)合，也即根據(jù)后處理過(guò)程的單元操作確定細(xì)胞破碎的方法和操作條件(ti225。oji224。n)。 必須從后分離過(guò)程的整體來(lái)考慮破碎操作，即破碎過(guò)程要易于細(xì)胞碎片的除凈。,第八十二頁(yè)，共九十一頁(yè)。,3.5 破碎率的測(cè)定(c232。d236。ng),破碎率定義為被破碎細(xì)胞的數(shù)量占原始(yu225。nshǐ)細(xì)胞數(shù)量的百分比數(shù)，即: Y(%)＝[(N0N)/N0]100 由于N0(原始細(xì)胞數(shù)量)和N (經(jīng)t時(shí)間操作后保留下來(lái)的未損害完整細(xì)胞數(shù)量)不能很清楚的確定，因此破碎率的評(píng)價(jià)非常困難。 目前N0和N主要通過(guò)下面的方法獲得。,第八十三頁(yè)，共九十一頁(yè)。,直接測(cè)定法(僅適合(sh236。h233。)于機(jī)械法),利用顯微鏡或電子微粒計(jì)數(shù)器可直接計(jì)數(shù)完整細(xì)胞數(shù)，所以可用于破碎前的細(xì)胞計(jì)量?？墒瞧扑檫^(guò)程中所釋放的物質(zhì)如DNA和其他(q237。tā)聚合物組分會(huì)干擾計(jì)數(shù)，此時(shí)可采用染色法把破碎的細(xì)胞從未損害的完整細(xì)胞中區(qū)別開(kāi)，以便于計(jì)數(shù)。,第八十四頁(yè)，共九十一頁(yè)。,例如，破碎的革蘭氏陽(yáng)性菌?？扇旧申幮跃念伾?y225。ns232。)，利用革蘭氏染色法未受損害的酵母細(xì)胞呈現(xiàn)紫色，而受損害的酵母細(xì)胞呈現(xiàn)亮紅色。,第八十五頁(yè)，共九十一頁(yè)。,目的(m249。d236。)產(chǎn)物測(cè)定法,通過(guò)測(cè)定破碎液中目的產(chǎn)物的釋放量來(lái)估算破碎率。（多用于生產(chǎn)(shēngchǎn)，必須有100%破碎率作標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值比較） 測(cè)定懸浮液中細(xì)胞內(nèi)含物的增量來(lái)估算破碎率。 通常將破碎后的細(xì)胞懸浮液離心，測(cè)定上清液中蛋白質(zhì)的含量或酶的活力，并與100％破碎所獲得的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值比較。,第八十六頁(yè)，共九十一頁(yè)。,第八十七頁(yè)，共九十一頁(yè)。,導(dǎo)電(dǎodi224。n)率測(cè)定法,導(dǎo)電率的變化是由于細(xì)胞內(nèi)含物被釋放(sh236。f224。ng)到水相中而引起的。導(dǎo)電率隨著破碎率的增加而呈線(xiàn)性增加。 因?yàn)閷?dǎo)電率的讀數(shù)取決于微生物的種類(lèi)、處理的條件、細(xì)胞濃度、溫度和懸浮液中電解質(zhì)的含量，因此應(yīng)預(yù)先采用其他方法來(lái)進(jìn)行標(biāo)化。（是一種快速測(cè)定法，應(yīng)預(yù)先采用其他方法制定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)）,第八十八頁(yè)，共九十一頁(yè)。,思考題,常用細(xì)胞破碎方法(fāngfǎ)的原理、特點(diǎn)及適用性。 機(jī)械法細(xì)胞破碎方法非機(jī)械破碎方法相比有何特點(diǎn)？ 超聲波破碎的機(jī)理、超聲波破碎的適用范圍。 簡(jiǎn)述酶溶法及其優(yōu)缺點(diǎn)。,第八十九頁(yè)，共九十一頁(yè)。,本章(běn zhānɡ)結(jié)束！,第九十頁(yè)，共九十一頁(yè)。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第三章 細(xì)胞破碎。動(dòng)物細(xì)胞：大多無(wú)細(xì)胞壁，其培養(yǎng)產(chǎn)物大多分泌在培養(yǎng)液中。細(xì)胞膜（內(nèi)壁）：具有高度選擇性的半透膜，控制(k242。ngzh236。)胞內(nèi)外一些物質(zhì)的交換滲透作用。G+細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與G有很大不同?！鳓? △cRT。超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)失活，因而有一定的局限性。大體積需要高的聲能引起強(qiáng)烈渦流和大氣泡形成。導(dǎo)電率隨著破碎率的增加而呈線(xiàn)性增加。本章結(jié)束,第九十一頁(yè)，共九十一頁(yè)。
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