【正文】 細(xì)菌等電點低，在中性，堿性或弱酸性溶液中帶陰電，容易與帶陽電的堿性染料(rǎnli224。o)結(jié)合，染色多用堿性苯胺染料(rǎnli224。o) 分為：單染色法和復(fù)染色法,第七十九頁，共八十七頁。,步驟 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。（初染） 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。（媒染：其作用是增強染料與細(xì)菌的親和力，更好地加強染料與細(xì)胞的結(jié)合。常用的媒染劑是碘液。） 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。（脫色：幫助(bāngzh249。)染料從被染色的細(xì)胞中脫色。利用細(xì)菌對染料脫色的難易程度不同，而將細(xì)菌加以區(qū)分。革蘭陽性細(xì)菌不易被脫色劑脫色，而革蘭陰性細(xì)菌則易被脫色。常用的脫色劑是丙酮或乙醇，這里所用的是95%的乙醇。 ） 7）蕃紅染色液（?。┤?分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。 （復(fù)染：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細(xì)菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進(jìn)行比較。這里用的是蕃紅花紅溶液。）,革蘭染色法（Gram Stain）：,復(fù)染色法,用兩種或兩種以上染料先后(xiānh242。u)染色，除可觀察細(xì)菌的形態(tài)，大小和排列外，還有鑒別細(xì)菌的作用。 常用方法：革蘭染色法和抗酸染色法,第八十頁，共八十七頁。,染色的差異主要(zhǔy224。o)是由于陰性與陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的差異所應(yīng)起的 ①革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁 G+細(xì)菌細(xì)胞壁具有較厚（2080nm）而致密的肽聚糖層，多達(dá)20層，占細(xì)胞壁成分的60%～90%，它同細(xì)胞膜的外層緊密相連（圖29）。有的G+細(xì)菌細(xì)胞壁中含有磷壁酸（teichoicacid），也稱胞壁質(zhì)（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。由于磷壁酸帶負(fù)電荷，它在細(xì)胞表面能調(diào)節(jié)陽離子濃度。磷壁酸與細(xì)胞生長有關(guān)，細(xì)胞生長中有自溶素（autolysins）酶類起作用，磷壁酸對自溶素有調(diào)節(jié)功能，阻止胞壁過度降解和壁溶。 如果細(xì)胞壁的肽聚糖層被消溶，G+細(xì)胞成為原生質(zhì)體（protoplasts），細(xì)胞壁不復(fù)存在，而只存留細(xì)胞膜。除鏈球菌外，大多數(shù)G+細(xì)菌細(xì)胞壁中含極少蛋白質(zhì)。,原理 通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散(sōngsǎn)的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。,第八十一頁，共八十七頁。,②革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁 G—細(xì)菌細(xì)胞壁比G+細(xì)菌細(xì)胞壁薄（15～20nm）而結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，分外膜（outer membrane）和肽聚糖層（2～3nm）（圖210）。在細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜之間有一個明顯的空間，稱為壁膜間隙（periplasmic space）。 外膜 G—細(xì)菌細(xì)胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同細(xì)胞質(zhì)膜相同之處也是雙層類脂，但除磷脂外還含有多糖和蛋白質(zhì)。 LPS的多糖部分包括核心多糖和O特異多糖。O特異多糖由重復(fù)分支的碳水化合物分子組成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脫氧已糖。由于糖的種類不同，使各種(ɡ232。 zhǒnɡ)G—細(xì)胞具有不同特性的LPS。核心多糖（core polysaccharide）的主要組分是酮脫氧辛酸（ketodeoxyoctonate, KDO）。 外膜中還含有幾種蛋白，如脂蛋白、通透蛋白。有些蛋白具有通孔作用（porin），調(diào)控外界分子進(jìn)入細(xì)胞；有的蛋白分子可以作為噬菌體的受體；許多G—細(xì)菌對高等生物有致病性是由LPS的成分決定的，它的毒性組分常稱為內(nèi)毒素（endotoxins）。 肽聚糖層 G—細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖層很薄，在大腸桿菌和其它細(xì)菌中僅有單 層。肽聚糖層和外膜的內(nèi)層之間通過脂蛋白連接起來。 壁膜間隙 G—細(xì)菌細(xì)胞壁的外膜與細(xì)胞質(zhì)膜之間存在明顯的壁膜間隙，一層薄的肽聚糖處于其間，肽聚糖層和細(xì)胞質(zhì)膜之間的間隙較寬，肽聚糖層至外膜之間的間隙較窄。大腸桿菌的壁膜間隙寬度為12～15nm，呈膠胨態(tài)。其間含有三類蛋白質(zhì)：水解酶，催化食物的初步降解；結(jié)合蛋白，啟動物質(zhì)轉(zhuǎn)運過程；化學(xué)受體（chemoreceptors），在趨化性中起作用的蛋白。 染色結(jié)果 革蘭氏陽性菌都呈紫色，革蘭氏陰性菌都呈紅色。,第八十二頁，共八十七頁。,革蘭染色(rǎns232。)意義： ①鑒別細(xì)菌 ②選擇用藥 ③致病特點,第八十三頁，共八十七頁。,抗酸染色法,一、抗酸染色原理:分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目的。 二、步驟:萋納石炭酸復(fù)紅染色,加溫促使(c249。shǐ)菌體著色。3%鹽酸乙醇脫色。呂氏美藍(lán)復(fù)染,未脫色細(xì)菌呈紅色為抗酸性細(xì)菌（結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌）,脫色經(jīng)復(fù)染呈藍(lán)色的細(xì)菌為非抗酸性細(xì)菌。,第八十四頁，共八十七頁。,小 結(jié),1.掌握(zhǎngw242。)：細(xì)菌的基本形態(tài)類型；細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括 哪些；陽性菌和陰性菌細(xì)胞壁的區(qū)別；細(xì)胞 壁的功能；L型細(xì)菌的概念和菌落特點；細(xì) 菌四種特殊結(jié)構(gòu)的概念和功能。 2.熟悉：陰性菌外膜的結(jié)構(gòu)和LPS的成分；細(xì)菌細(xì)胞 膜和核質(zhì)的組成和功能； 3.了解：磷壁酸的結(jié)構(gòu)；細(xì)菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞質(zhì) 的組成；細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的分類和結(jié)構(gòu)。,第八十五頁，共八十七頁。,問 題,G+ 及 G 菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)有何區(qū)別,導(dǎo)致(dǎozh236。)后果,舉例說明？ 細(xì)菌有哪些基本結(jié)構(gòu)、特殊結(jié)構(gòu)？ 什么是L型細(xì)菌？ 名詞解釋： L型細(xì)菌 中介體 質(zhì)粒 莢膜 鞭毛 菌毛 芽胞,第八十六頁，共八十七頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),醫(yī)學(xué)微生物學(xué)。1.球菌：菌體呈球形或近似球形的細(xì)菌。根據(jù)其分裂方向和分裂后排列的方式不同，可分為：。兩類細(xì)菌細(xì)胞壁的共同組分為肽聚糖，但各有其特殊組分。革蘭陽性菌細(xì)胞壁缺失后，原生質(zhì)僅被一層細(xì)胞膜包住——原生質(zhì)體（protoplast）。革蘭陰性菌肽聚糖層受損后尚有外膜保護(hù)(bǎoh249。)——原生質(zhì)球（spheroplast）。油煎蛋樣菌落 典型的L型菌落。特殊染色（莢膜染色法）——染上與菌體不同的顏色。名詞解釋：,第八十七頁，共八十七