蛋白質(zhì)理化4hours資料-資料下載頁
2024-11-04 05:29本頁面
【正文】 核磁共振〔NMR〕 以吸收的能量的強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，以吸收的頻率為橫坐標(biāo)，用記錄儀描繪下來，分子中各個(gè)核在核磁共振譜上即出現(xiàn)吸收峰，成為核磁共振譜圖,第四十八頁，共五十三頁。,核磁共振(h233。 c237。 ɡ242。nɡ zh232。n)的開展,1971年比利時(shí)的J.Jeener首次提出二維核磁共振的概念。 20世紀(jì)80年代末期遺傳工程技術(shù)迅速開展，已成功制備了許多15N和13C等穩(wěn)定同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì)樣品，使二維異核核磁共振方法得以實(shí)施 20世紀(jì)90年代初期A.Bax等人提出了異核三維和四維核磁共振方法。已可用于確定分子量為1525kDa蛋白質(zhì)分子的溶液三維空間結(jié)構(gòu)。NMR技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)在于它能對在溶液中和非晶態(tài)的蛋白質(zhì)進(jìn)行測量 多維核磁共振波譜技術(shù)成為確定蛋白質(zhì)和核酸等生物分子溶液三維空間結(jié)構(gòu)的唯一有效(yǒuxi224。o)手段。近幾年來異核核磁共振方法迅速開展，已可用于確定分子量為15～25KDa蛋白質(zhì)分子溶液的三維空間結(jié)構(gòu),第四十九頁，共五十三頁。,第五十頁，共五十三頁。,質(zhì)譜,質(zhì)譜方法(Mass Spectroscope,MS):可以正確測定(c232。d236。ng)蛋白質(zhì)分子的質(zhì)量而進(jìn)行蛋白質(zhì)分子鑒定、蛋白質(zhì)分子的修飾和蛋白質(zhì)分子相互作用的研究. 質(zhì)譜方法僅限于小分子和中等分子的研究，因?yàn)橐獙①|(zhì)譜應(yīng)用于生物大分子需要將之制備成氣相帶電分子，然后在真空中物理分解成離子。20世紀(jì)70年代，解吸技術(shù)的出現(xiàn)成功地將蛋白分子轉(zhuǎn)化成氣相離子。80年代電噴霧電離(ESI)和軟激光解吸(SLD)電離技術(shù)的開展那么使得質(zhì)譜方法應(yīng)用于高分子量蛋白分子的研究,第五十一頁，共五十三頁。,電噴霧電離(ESI) ：帶電液滴蒸發(fā)，液滴變小，液滴外表相斥的靜電荷密度增大。當(dāng)液滴蒸發(fā)到某一程度，液滴外表的庫侖斥力使液滴爆炸。產(chǎn)生的小帶電液滴繼續(xù)此過程。隨著液滴的水分子逐漸蒸發(fā)，就可獲得自由徘徊的質(zhì)子化和去質(zhì)子化的蛋白分子 軟激光解吸(SLD)：是指從激光脈沖中獲得能量后，樣品分子以完整的低電荷(di224。nh232。)分子離子釋放，然后由電場加速 基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)：這一方法是將樣品摻入一種低分子量的結(jié)晶基質(zhì)，基質(zhì)的最大吸收與激光脈沖波長匹配。由于MALDI產(chǎn)生的是低電荷的完整氣相大分子，可用于檢測純度不高的生物分子。MALDI與飛行時(shí)間(TOF)聯(lián)合已經(jīng)成為鑒別大分子的重要方法，成為鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白組分不可或缺的研究手段,第五十二頁，共五十三頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第一章緒論。不同蛋白質(zhì)采取不同的別離純化策略。〔3〕凝膠過濾：交聯(lián)葡聚糖、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖等。現(xiàn)在蛋白質(zhì)提純中使用最廣泛和最有效的。在堿性溶液中，蛋白質(zhì)將二價(jià)銅復(fù)原為一價(jià)銅。SDSPAGE電泳法：蛋白質(zhì)所帶電荷和分子大小不同，在電場中的電泳速度各異。原子核由質(zhì)子和中子組成．質(zhì)子、中子與電子一樣具有自旋運(yùn)動，因而核也產(chǎn)生磁矩。當(dāng)液滴蒸發(fā)到某一程度，液滴外表的庫侖(k249。ln)斥力使液滴爆炸。產(chǎn)生的小帶電液滴繼續(xù)此過程,第五十三頁，共五十
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