【正文】 們目標(biāo)獲得的疾病猴模型包括PD，AD，ALS，DMD，RP，AS等，工具猴模型包括光遺傳猴，各種神經(jīng)元特異的Cre猴等。這些猴模型的建立將極大促進(jìn)我們對(duì)人類疾病的了解和治愈。此外，我們也致力于各種CRISPR相關(guān)工具的開發(fā)及優(yōu)化，包括CRISPR激活系統(tǒng)，CRISPR標(biāo)記系統(tǒng)，CRISPR介導(dǎo)的成體治療等等。馬燕琳海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院基因編輯與生殖健康基因編輯技術(shù)通過插入、缺失或替換的手段對(duì)基因組進(jìn)行定點(diǎn)改造，既能夠通過以突變基因代替正?；騺硌芯炕虻墓δ?，也能夠以正常基因代替突變基因來進(jìn)行基因治療。近年來，有著“基因剪刀”之稱的CRISPR/Cas9技術(shù)被認(rèn)為是能夠在活細(xì)胞中快速、準(zhǔn)確地編輯目的基因的有效方法。隨著人類在破譯基因的遺傳密碼和基因編輯技術(shù)上的不斷突破，通過修改基因從根本上治愈和預(yù)防疾病成為可能，特別是在單基因疾病的治療上，基因編輯有著廣闊的運(yùn)用前景。就生殖健康方面而言，卵巢早衰這類由表觀遺傳引起的疾病目前只能通過替代治療延緩癥狀，不能根治。CRISPR/Cas9技術(shù)的出現(xiàn)有望對(duì)表觀遺傳的靶點(diǎn)進(jìn)行遺傳編輯，改善生殖健康，也為生殖相關(guān)疾病提供了新的治療思路。此外，利用基因編輯對(duì)胚胎特定基因集進(jìn)行敲除操作，造成相應(yīng)基因在胚胎中的缺失，可深入研究人類胚胎早期發(fā)育中的功能、作用機(jī)理，幫助人類了解生物體的基本功能，也可以推動(dòng)人類健康事業(yè)的發(fā)展,從根源上清除遺傳疾病。張淑君 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)建立和利用豬全基因組基因敲除CRISPR/Cas9技術(shù)篩選鑒定豬流感病毒感染相關(guān)的宿主（豬）基因在豬PK15細(xì)胞系中，證實(shí)了CRISPR/Cas9系統(tǒng)在豬細(xì)胞系中能高效地誘導(dǎo)豬基因敲除。設(shè)計(jì)和構(gòu)建了豬全基因組基因敲除CRISPR/Cas9文庫(kù)，該文庫(kù)包含了65316個(gè)gRNAs、覆蓋了13229個(gè)基因，其中含有5個(gè)gRNAs的基因有11400個(gè)基因、含有4個(gè)gRNAs的基因有1829個(gè)，并且全部的基因都含有至少2個(gè)gRNAs（最多不超過5個(gè)gRNAs/基因）。利用該豬全基因組基因突變gRNAs文庫(kù)進(jìn)行大規(guī)模的基因篩選，初步篩選出了140個(gè)候選宿主基因，并證實(shí)了其中的32個(gè)候選基因在病毒復(fù)制增殖中具有一定的調(diào)控作用周峰復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院利用dcas9和超高靈敏度蛋白質(zhì)譜平臺(tái)構(gòu)建位點(diǎn)特異DNA蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)隨著功能基因組學(xué)的飛速發(fā)展，對(duì)調(diào)控基因表達(dá)的順式（cis）和反式(trans)作用元件進(jìn)行系統(tǒng)研究成為當(dāng)前急需填補(bǔ)的領(lǐng)域空白。利用生物素化的（biotinylated）功能缺失的dcas9系統(tǒng)加上能與我們所感興趣位點(diǎn)能夠形成特定結(jié)合的SgRNA，在原位去分離純化我們感興趣位點(diǎn)DNA以及與這個(gè)位點(diǎn)有特定結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物。我們利用該系統(tǒng)去研究在白血病細(xì)胞系K562中，與血紅蛋白（Hemoglobin）的幾個(gè)亞型HBB、HBG、HBE以及與調(diào)控相關(guān)的幾個(gè)重要的增強(qiáng)子HSHSHSHS4和HS5上面所結(jié)合的蛋白質(zhì)復(fù)合物。在該實(shí)驗(yàn)中，我們利用Streptavidin的免疫特異性樹脂球?qū)в蠦iotin基團(tuán)的蛋白質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行純化。然后進(jìn)行了iTRAQ的標(biāo)記，最后，樣品由高靈敏度的全蛋白定量平臺(tái)進(jìn)行定量的分析。在該實(shí)驗(yàn)中，我們能夠檢測(cè)到如GATA1，TAL1，NFE2等與血紅蛋白的表達(dá)息息相關(guān)的已知的轉(zhuǎn)錄因子。與此同時(shí)，我們也能發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)核孔蛋白NUP98以及NUP153結(jié)合在hemoglobin基因的位點(diǎn)上面。然后，我們利用該方法研究了跟疾病關(guān)系密切的位點(diǎn)，HBE1到HBD之間的區(qū)域。通過蛋白質(zhì)組學(xué)。綜合以上的證據(jù)，HBD1K是一個(gè)重要的疾病相關(guān)基因，通過CRISPR技術(shù)敲除了HBD1K之后，我們能夠發(fā)現(xiàn)HBG的基因轉(zhuǎn)錄受到了明顯的影響，而HBB的轉(zhuǎn)錄則大致不變。我們的技術(shù)表明了，我們能對(duì)特定的DNA區(qū)域，即使是對(duì)單拷貝的DNA位點(diǎn)能夠進(jìn)行全面深度的蛋白質(zhì)復(fù)合物的解析。這些解析的結(jié)果能夠幫助我們發(fā)現(xiàn)那些對(duì)特定基因起著重要調(diào)控作用的蛋白質(zhì)，對(duì)研究這些基因的激活與靜默機(jī)制有著至關(guān)重要的作用。第五篇：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收?qǐng)?bào)告(一)實(shí)驗(yàn)室所屬法人單位名稱:地址:郵編:法定代表人:實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人:聯(lián)系人:電話:傳真:(二)接受現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室代表姓名及職務(wù)::衛(wèi)生部下發(fā)文《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》和《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》:::合格,建議授予驗(yàn)收合格證書?；竞细?尚存在部份缺陷,缺陷為項(xiàng),限期改進(jìn),改進(jìn)后授予驗(yàn)收合格證書。不合格,停止驗(yàn)收,實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)后需重新申請(qǐng).(一)驗(yàn)收中發(fā)現(xiàn)的問題及意見:附件1:臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表。附件2:臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收意見匯總表。附件3:整改要求.(二)需要說明的其它問題:□如果有的話見附件4?！鯚o(wú).(三)驗(yàn)收評(píng)審員姓名及簽名:主評(píng)審員姓名:簽名:評(píng)審員姓名:簽名:簽名:簽名:協(xié)調(diào)員姓名:簽名:簽字時(shí)間:(四)簽字地點(diǎn):驗(yàn)收評(píng)審組意見:附件1臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn)收內(nèi)容驗(yàn)收意見符合基但本有符缺合陷不符合缺此項(xiàng)暫不需考核評(píng)論與說明實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化分區(qū):原則上應(yīng)分為四個(gè)區(qū),但如使用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測(cè)儀,區(qū)域可適當(dāng)合并各工作區(qū)的明確標(biāo)記實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備開展臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)所需的所有儀器設(shè)備(包括質(zhì)控物).保證《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》和《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)冰箱?；靹蚱?。微量加樣器?？梢苿?dòng)紫外燈。專用工作服和工作鞋。消耗品(帶濾心吸頭,一次性手套等)。專用實(shí)驗(yàn)記錄本,標(biāo)本制備區(qū)(a)冰箱(2~8℃和20℃或80℃)。高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(c)水浴箱和/或加熱模塊(d)超凈工作臺(tái)或防污染罩混勻器。注:請(qǐng)?jiān)隍?yàn)收所選項(xiàng)打“臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn)收內(nèi)容驗(yàn)收意見符合基但本有符缺合陷不符合缺此項(xiàng)暫不需考核評(píng)論與說明微量加樣器?？梢苿?dòng)紫外燈。專用工作服和工作鞋。消耗品(帶濾心吸頭,一次性手套等)。專用實(shí)驗(yàn)記錄本,擴(kuò)增區(qū)(a)核酸擴(kuò)增儀。微量加樣器?？梢苿?dòng)紫外燈。專用工作服和工作鞋。消耗品(帶濾心吸頭,一次性手套等)。專用實(shí)驗(yàn)記錄本,擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)微量加樣器?？梢苿?dòng)紫外燈。專用工作服和工作鞋。消耗品(帶濾心吸頭,一次性手套等)。專用實(shí)驗(yàn)記錄本,實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施,工作區(qū)域,能源,照明,采暖,通風(fēng)等實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫度濕度計(jì),:請(qǐng)?jiān)隍?yàn)收所選項(xiàng)打”“.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn)收內(nèi)容驗(yàn)收意見符合基但本有符缺合陷不符合缺此項(xiàng)暫不需考核評(píng)論與說明應(yīng)有實(shí)驗(yàn)室”內(nèi)務(wù)管理(如人員流動(dòng),清潔等)制度。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有關(guān)化學(xué)試劑管理,廢棄血清處理,生物防護(hù)等的措施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員。這些人員必須經(jīng)過培訓(xùn),實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有培訓(xùn)計(jì)劃和措施,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書(如上崗證),培訓(xùn),技能和經(jīng)歷,發(fā)表論文,所有設(shè)備應(yīng)有維護(hù)程序文件。*如