【正文】 、無機鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。③溫度：適宜溫度：℃＋℃；pH：～。④氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。（5）動物細胞培養(yǎng)技術的應用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質、培養(yǎng)醫(yī)學研究的各種細胞。（1）哺乳動物核移植可以分為胚胎細胞核移植（比較容易）和體細胞核移植（比較難）。（2）選用去核卵(母)細胞的原因：卵(母)細胞比較大，容易操作；卵(母)細胞細胞質多，營養(yǎng)豐富。第五篇：高中生物選修三基本知識*選修三基本知識:DNA重組技術，實現(xiàn)這一精確的操作過程至少需要三種工具，(1)即準確切割DNA的“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）、(2)將DNA片斷再連接起來的“分子縫合針”——DNA連接酶、(3)將體外重組好的DNA導入受體細胞的“運輸工具”——運載體。限制酶：主要從原核生物中分離純化出來，能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。形成黏性末端和平末端兩種。DNA連接酶：根據(jù)酶的來源不同分為兩類：(黏性末端)、T4DNA連接酶(黏性末端和平末端, 連接平末端時效率低)。二者都是將雙連DNA片段“縫合”起來，恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。常用的運載體：質粒、λ噬菌體的衍生物、動植物病毒。質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌染色體之外并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。基因工程的基本操作步驟主要包括四步：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定?；虮磉_載體的構建是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是：是目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達和發(fā)揮作用。其組成是：目的基因、啟動子、終止子、標記基因（鑒定受體細胞是否含有目的基因，并篩選出含有目的基因的受體細胞）。目的基因導入受體細胞后，是否可以維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑒定才能知道。這是基因工程的第四步工作。將目的基因導入植物細胞的方法：農桿菌轉化法、花粉管通道法、基因槍法。將目的基因導入動物細胞的方法：顯微注射技術。1將目的基因導入微生物細胞：用CaCl2處理，增大細胞壁的通透性。(感受態(tài)法)1①標記基因是否表達,用于鑒定受體細胞是否含有目的基因，并篩選出含有目的基因的受體細胞。②檢測目的基因是否插入到受體細胞的基因組中的方法：DNA分子雜交技術（用目的基因做探針，如果顯示出雜交帶則成功）。③ 檢測目的基因是否轉錄出mRNA的方法：分子雜交技術（用目的基因做探針，如果顯示出雜交帶則成功）。1④檢測目的基因是否翻譯成蛋白質的方法：抗原——抗體雜交。1⑤除了分子檢測外，有時還需要進行個體水平的鑒定，方法是：抗蟲或抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性以及抗性的程度。1目的基因的獲取：從已有物種中直接分離，也可以人工合成。1目的基因：主要是指編碼蛋白質的結構基因，也可以是一些具有調控作用的因子。1PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫，是一種在生物體外復制特定DNA片斷的核酸合成技術。其原理是：DNA雙連復制的原理。前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物（兩種）。過程是：高溫變性、低溫復性、中溫延伸。1植物基因工程碩果累累：抗蟲轉基因植物，抗病轉基因植物，抗逆轉基因植物，利用轉基因改良植物的品質。1動物基因工程前景廣闊：用于提高動物的生長速度，用于改善畜產品的品質，用轉基因動物生產藥物，用轉基因動物做器官移植的供體，基因工程藥品異軍突起?；蛑委煟菏前颜；驅氩∪梭w內，使該基因的表達產物發(fā)揮功能，從而達到治療疾病的目的。這是治療遺傳病的最有效的手段。其中效果比較可靠的是體外基因治療。2基因工程在原則上只能生產自然界已存在的蛋白質，蛋白質工程是指以蛋白質的結構規(guī)律及其與生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有的蛋白質進行改造，或制造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產和生活的需求。2蛋白質工程的基本途徑：從預期的蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找出相對應的脫氧核苷酸序列（基因）。2具有某種生物全部遺傳信息的任何一個細胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能，也就是說，每個生物細胞都具有全能性的特點。2植物細胞工程：植物組織培養(yǎng)技術（基礎）、植物體細胞雜交技術。2細胞脫分化：就是讓已經分化的細胞，經過誘導后，失去其特有的結構和功能而轉變成未分化細胞的過程。創(chuàng)傷和外源激素可以使外植體細胞的合成代謝加強，不斷分裂增殖形成愈傷組織。2植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給與適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整植株。培養(yǎng)過程中要用到生長素和細胞分裂素，用于調控脫分化和再分化。2植物體細胞雜交就是將不同種的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培養(yǎng)成新的植物體的技術。2植物細胞工程的實際應用：植物繁殖的新途徑（微繁、作物脫毒、制造人工種子）、作物新品種的培育（單倍體育種、體細胞誘變育種等）、細胞產物的工廠化生產（人參細胞發(fā)酵罐生產人參皂苷）。2動物細胞工程常用的技術手段有：動物細胞培養(yǎng)（基礎）、動物細胞融合、動物細胞核移植、生產單克隆抗體等。動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（胰蛋白酶或膠原蛋白酶），然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。3動物細胞培養(yǎng)時制備的細胞懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁，要求培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖稱為細胞的接觸抑制。3動物細胞培養(yǎng)的條件：無菌、無毒的環(huán)境；營養(yǎng)與體內基本相同；適宜的溫度和pH；氣體環(huán)境（主要是氧氣和二氧化碳，二氧化碳是維持培養(yǎng)液的pH，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于95%的空氣加5%的CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)）。3動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。3哺乳動物核移植分為：胚胎細胞核移植、體細胞核移植。3體細胞核移植的應用前景：轉基因克隆動物可以促進優(yōu)良畜群繁育；保護瀕危物種；作為生物反應器生產醫(yī)用蛋白；作為器官移植的供體動物；核移植胚胎干細胞定向誘導分化成相應的組織器官用于器官移植。3動物細胞融合也稱為細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞稱為雜交細胞。3動物細胞融合的方法：物理方法（離心、振動、電刺激）、化學方法（聚乙二醇）、滅活的病毒。3單克隆抗體的制備：骨髓瘤細胞和已免疫的小鼠脾臟中的B淋巴細胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，只有融合的雜種細胞才能生長，這種雜交細胞的特點是：既能迅速大量繁殖，又能產生專一的抗體。對上述經選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞，還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。最后，將雜交瘤細胞在體外進行大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取大量的單克隆抗體了。通過細胞工程生產單克隆抗體時，要涉及到以下三個篩選過程： ①從脾臟中選出能產生抗體的效應B細胞 ②在特定培養(yǎng)基中篩選出雜交瘤細胞③選出能產生特定抗體并能大量增殖的細胞群。3單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高，純度高、大量制備。單克隆抗體的應用：作為診斷試劑（在診斷的應用上具有準確、高效、快速、簡易的優(yōu)點。）、用于治療疾病和運載藥物。（制成“生物導彈”借助單克隆抗體的導向作用，將藥物定向帶到癌細胞，在原位殺死癌細胞，這樣既不損傷正常細胞，又減少了用藥劑量。）經過癌細胞抗原免疫產生的單克隆抗體能夠與細胞特異性結合。4精子的發(fā)生大體可以分為三個階段：第一階段，位于曲細精管管壁的精原細胞先分裂為兩個細胞，然后繼續(xù)數(shù)次有絲分裂產生多個初級精母細胞；第二階段，初級精母細胞連續(xù)兩次分裂；第三階段，圓形的精子細胞變形成精子，其中細胞核變?yōu)榫宇^部，高爾基體發(fā)育為頭部的頂體，中心體演變?yōu)榫拥奈玻€粒體聚集在尾的基部形成線粒體鞘膜。4受精：是精子與卵子結合形成合子的過程。包括受精前的準備階段和受精階段：準備階段1——精子獲能，準備階段2——卵子的準備，受精階段主要包括：精子穿越放射冠和透明帶，進入卵黃膜，原核形成和配子結合（受精過程中，首先發(fā)生頂體反應；在精子觸及卵黃膜的瞬間，發(fā)生透明帶反應，這是防止多精入卵的第一道屏障；精子入卵后，發(fā)生卵黃膜封閉作用，這是防治多精入卵的第二道屏障。）4一個卵泡成熟一個卵子；排卵：是指卵子從卵泡中排出；剛排出的卵子尚未完全成熟，需要在輸卵管內進一步成熟直到MII中期才能與精子在輸卵管內結合完成受精。卵子是否受精的標志：在卵黃膜和透明帶的間隙觀察到兩個極體時。4胚胎的發(fā)育：卵裂期、桑椹胚、囊胚、原腸胚、組織器官形成。4胚胎工程技術：體外受精、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（是最后一道工序）、胚胎分割移植、胚胎干細胞。4體外受精：主要包括：卵母細胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精4胚胎移植實際上是生產胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代的過程，優(yōu)勢是可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛力，大大縮短了供體本身的繁育周期，是良種畜群迅速擴大。4胚胎移植的生理學基礎：供體與受體相同的生理變化；胚胎在早期母體中處于游離狀態(tài)；子宮不對外來胚胎發(fā)生免疫排斥反應；胚胎遺傳性狀不受受體任何影響。4胚胎移植的基本程序：對供體和受體的選擇和處理（同期發(fā)情處理，超數(shù)排卵處理）、配種或進行人工授精、對胚胎的收集檢查培養(yǎng)或保存、進行胚胎移植。50、胚胎分割：是指采用機械方法將早期胚胎切割成4或8等份等，經移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。5胚胎干細胞：簡稱ES或EK細胞，是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞。形態(tài)上：體積小，細胞核大、核仁明顯；功能上：具有發(fā)育的全能性：體外培養(yǎng)時可以增殖而不發(fā)生分化。應用價值：①ES細胞可以用于治療人類的某些頑癥（老年癡呆、帕金森）；②體外定向誘導分化培育出人造組織器官；③解決臨床供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題；研究細胞分化和細胞調亡的機理；④研究哺乳動物個體發(fā)生和發(fā)育的規(guī)律。5轉基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。5面對轉基因技術的利弊，正確的做法：趨利避害，不能因噎廢食。5關注生物技術的倫理問題：中國政府對克隆技術的態(tài)度：禁止生殖性克隆人，不反對治療性克隆。四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人的實驗。5設計試管嬰兒：植入前對胚胎進行遺傳學診斷。5生物武器種類：病菌、病毒、生化毒劑以及基因重組的致病菌。特點：傳染性強、污染面廣。