高中生物專題5第17課時多聚酶鏈式反應擴增dna片段同步課時作業(yè)新人教版選修1-資料下載頁
2024-12-05 06:17本頁面
【導讀】PCR的原理；掌握PCR的基本步驟及每個步驟前后發(fā)生的變化。________，而含____________的末端稱為________；一個雙鏈DNA分子中含兩個3′端和。子上的磷酸基團脫水聚合而成。所以DNA的合成方向總是從子鏈的________向________延。分別與模板DNA兩條模板鏈相結合的兩種引物。耐高溫的DNA聚合酶，一般用TaqDNA聚合酶。能嚴格控制溫度變化的溫控設備。________：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。度的DNA序列呈____________。目的是使反應液集中在離心管底。避免外源DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前必須進行____________。緩沖液和酶分裝成小份，并在________儲存。每添加一種反應成分，更換一個________的槍頭。DNA在260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰。以利用DNA這一特點進行DNA含量的測定。①稀釋：2μLPCR反應液，加入98μL蒸餾水，即將樣品進行50倍稀釋。③測定：取DNA稀釋液100μL至比色杯中，測定260nm處的光吸收值。而難以對樣品進行分析研究的問題。鏈占總單鏈的比例為________。
【正文】 板可結合，一般不需要考慮解開的兩個 DNA模板鏈的重新結合，原因是： (1)模板 DNA鏈比引物長得多而且復雜得多，不易重新結合。 (2)引物和模板之間的碰撞機會遠遠高于模板互補鏈之間的碰撞機會。 (3)加入的引物的量足夠大，而模板鏈數(shù)量少。 4． C [在冰箱中放置的緩沖液和酶從冰箱中取出后應放在冰塊上緩慢融化，而不能迅速融化，即 C 錯誤。 ] 聯(lián)想 為避免外源 DNA污染，所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前必須高壓滅菌，每添加一種反應成分更換一個移液器的槍頭，混合后離心處理，使反應液集中在離心管底部。 達 標測試 1． D [PCR是一種體外迅速擴增 DNA片段的技術，它以極少量的 DNA為模板，以四種脫氧核苷酸為原料，在引物作用下使 DNA聚合酶從引物的 3′端連接脫氧核苷酸，短時間內(nèi)迅速復制上百萬份的 DNA拷貝，其擴增 產(chǎn)量 y＝ a2n， a代表模板 DNA量， y代表 DNA片段擴增后的理論拷貝數(shù)， n 代表循環(huán)次數(shù)；在擴增過程中，被擴增的是 DNA 序列，而不是氨基酸序列，因此 D 項錯誤。 ] 2． D [DNA 的兩條鏈是反向平行的，為了明確地表示 DNA 的方向，通常將 DNA 的 羥基 (— OH)末端稱為 3′端，而磷酸基團的末端稱為 5′端。 DNA 聚合酶不能從 5′端開始合成DNA，而只能從 3′端延伸 DNA鏈。因此， DNA復制需要引物。當引物與 DNA母鏈通過堿基互補配對結合后， DNA 聚合酶就能從引物的 3′端開始延伸 DNA鏈， DNA 的合成方向總是從子鏈 的 5′端向 3′延伸。 ] 3． C [各選項的條件均能導致 DNA分子變性，但在 PCR 反應中，變性后還要進行復性和延伸等過程，過酸、過堿、酒精等會導致反應過程中的酶變性失活，使 DNA擴增不能進行，因此，在 PCR 反應中，選用升高溫度使 DNA變性。 ] 4． A [PCR 技術需要目的基因作為擴增的模板， DNA 聚合酶催化反應的進行，而引物是滿足 DNA聚合酶起作用的需要，四種脫氧核苷酸是該過程的原料。 ] 5． B [DNA是半保留復制，復制一次形成兩分子 DNA，每條 DNA都含有一條 15N 和14N 單鏈；復制兩次，形成四個分子 ， 含 15N 的只有兩分子 DNA；復制三次形成的八個 DNA分子中含 15N 的仍是兩分子。這時 DNA單鏈有十六條，含 15N 的只有親代的兩條。 ] 6． A [在 PCR 反應中，以引物為標記，第一次循環(huán)時，以加入的 DNA為模板，兩條DNA 鏈可分別由引物 Ⅰ 和引物 Ⅱ 與其結合并在 DNA 聚合酶的作用下延伸，所以形成的每個 DNA 中只有一種引物；從第二次循環(huán)開始，上次產(chǎn)生的 DNA 分子又可作為模板參與反應，所以會形成 DNA分子兩端均含引物的情況，如下圖所示，因此題干中所出現(xiàn)的情況是第一次循環(huán)的產(chǎn)物。 ] 7． A [DNA聚合酶不能從頭開始催化合成 DNA，而只能從 DNA單鏈的 3′端延伸子鏈；Taq DNA聚合酶能耐高溫，所以在反應體系中可反復利用，無需另外再添加； PCR 擴增的是引物之間的固定長度的 DNA序列； Taq DNA聚合酶是 1966年從美國黃石公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)的。 ] 8． C [PCR 反應的操作步驟一般分為準備 (包括配置配方及將各配方放于實驗臺上 )→移液 → 混合 → 離心 → 反應，因 PCR 儀是一種自動控制溫度的儀器，設計好循環(huán)程序就可以進行反應了。 ] 9． (1)變性 復性 延伸 (2)單鏈 DNA或 RNA (3)加熱到 95℃ 雙鏈 DNA分離成兩條單鏈 (4)四種脫氧核苷酸 10． (1)C (2)C (3)耐高溫，在較高的溫度下不變性 (4)① 規(guī)則的雙螺旋 ② 堿基互補配對 (5)脫氧核苷酸 能量 酶 TAGGCTA 解析 (1)在合適的條件下，細胞外也可完成 DNA復制。 (2)溴化乙錠是一種化學誘變物，在DNA的復制過程中，誘發(fā)基因突變，可能導致細胞發(fā)生癌變。 (3)PCR 技術要在較高的溫度下進行，所以使用的 DNA 聚合酶要耐高溫，在較高的溫度下不變性。 (4)DNA 規(guī)則的雙螺旋結構和堿基互補配對原則使 DNA能夠復制出與其完全相同的子代。 (5)DNA分子復制時，不僅需要 DNA片段，還需要四種游離的脫氧核苷酸、能量、酶等條件。由堿基互補配對原則可知，其互補鏈的堿基組成為 TAGGCTA。
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