【導讀】薯綜合培養(yǎng)基、紫外菌絲體誘變、富硒CM培養(yǎng)基培養(yǎng)金針菇201和白色金針菇；針對固體平板培養(yǎng)，采用十字交叉法測量菌落半徑，使用乳酸石炭酸棉藍染色液將菌絲染色，測其菌絲直徑；針對液體發(fā)酵，結(jié)果：白色金針菇、金針菇201及其誘變菌種均能在含硒量為20~35μg/L的培養(yǎng)基上生長速度達。到最快，富硒能力最強的狀態(tài)。力達到新的高度。

　　

【正文】 30 40 注：每個硒濃度梯度下，均取 干重進行測吸收值。 圖 5 白色金針菇 （ 白 .10） 菌種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes () in different selenium concentration gradient 由表 8 和圖 5 可知， 白色金針菇 誘變 10min 菌種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強的富硒能力。在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為5μg/L 時富硒能力最強，隨著硒濃度的增加呈下降趨勢，但不明顯。 其 菌絲球干重， 在 15μg/L 的硒濃度的時候達到了頂峰，顯著高于所測 的 其他 硒 濃度 梯度 。菌絲體的含硒量與干重 的關(guān)系不明顯 ?？梢?適宜濃度 的發(fā)酵液硒含量有助于 白色金針菇原種的生長 。 隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度 的增加，硒的回收率呈下降趨勢 且較為明顯 。 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 17 01002003004005000 5 10 15 20 25 30 40硒濃度梯度菌絲體含硒量(μg/g)00 . 0 50 . 10 . 1 50 . 20 . 2 50 . 30 . 3 50 . 4干重(g)菌絲體含硒量干重因此，白色金針菇 誘變 10min 菌種 在培養(yǎng)基含硒量為 15μg/L 的時候，富硒能力及生長速度均達到 較佳值 ，即 。 因而較好的培養(yǎng)方案為配置含硒量為 15μg/L 的培養(yǎng)基發(fā)酵 白色金針菇 誘變10min 菌種 菌絲體。 表 9 金針菇 201 原種 ()在液體富硒培養(yǎng)基中對硒的富集特性 Table 9. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes 201 in the seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 20 25 30 40 注：每個硒濃度梯度下，均取 干重進行測吸收值。 圖 6 金針菇 201 原種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes 201 in different selenium concentration gradient 由表 9 和圖 6 可知， 金針菇 201 原種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強的富硒能力。菌絲體的富硒能力隨著硒濃度的增加而 上下波動 ，在培養(yǎng)基硒含量為 15 和 40μg/L 時菌絲體含硒量曲線出現(xiàn)三處峰值，但在 5μg/L 時其富硒能力遠高富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 18 5 00501001502000 5 10 15 20 25 30 40硒濃度梯度菌絲體含硒量(μg/g) 0 . 0 500 . 0 50 . 10 . 1 50 . 20 . 2 50 . 3干重(g)菌絲體含硒量干重于其他兩個梯度。針對菌絲球干重，它也是在所測的硒濃度范圍內(nèi)，隨著硒濃度的提高而 呈總體下降趨勢 ，在 0、 25 和 30μg/L 時出現(xiàn)峰值，但在 發(fā)酵培養(yǎng)基含硒量為 0μg/L 時 ，菌絲球干重最大 。可見 低 濃度 硒含量 的發(fā)酵液有助于 金針菇201 原種 的生長及其富硒 能力的提高。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈下降趨勢。 因此， 金針菇 201 原種 在培養(yǎng)基含硒量為 5μg/L 的時候，富硒能力 最強，即，在 培養(yǎng)基含硒量為 0μg/L 的時候， 生長速度均達到最大，即 。 所以最佳育種方案是選擇 含硒量為 5μg/L的 培養(yǎng)基進行培養(yǎng) 金針菇 201原種菌絲體 ，此時其生長速度和富硒能力都達到較為不錯的水平 。 表 10 金針菇 201 誘變 5min 菌種 ()在液體富硒培養(yǎng)基中對硒的富集特性Table characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 — — — — — 20 25 30 40 注：每個硒濃度梯度下，均取 干重進行測吸收值。 圖 7 金針菇 201 誘變 5min 菌種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 19 0501001502000 5 10 15 20 25 30 40硒濃度梯度菌絲體含硒量(μg/g)00 . 0 50 . 10 . 1 50 . 20 . 2 5干重(g)菌絲體含硒量干重() in different selenium concentration gradient 由表 10 和圖 7 可知， 金針菇 201 誘變 5min 菌種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強的富硒能力。 菌絲體的含硒量、干重與硒濃度的關(guān)系不顯著。 在一定硒濃度范圍內(nèi)，菌絲體的富硒能力在培養(yǎng)基硒含量為 30μg/L 時 達到峰值 。其菌絲球干重，在 0、 20μg/L 的硒濃度的時候達到了頂峰 。 可見適宜濃度的發(fā)酵液硒含量有助于 金針菇 201 誘變 5min 菌種 的生長。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈下降趨勢且較為明顯。 因此， 金針菇 201 誘變 5min 菌種 在培養(yǎng)基含硒量為 10μg/L 的時候，富硒能力及 硒回收率 均達到較佳值，即 。 綜合考慮菌種生長速度、富硒能力及發(fā)酵培養(yǎng)基硒含量的回收率， 因而較好的培養(yǎng)方案為配置含硒量為 20μg/L的培養(yǎng)基發(fā)酵 金針菇 201 誘變 5min 菌種 菌絲體。 表 11 金針菇 201 誘變 10min 菌種 ()在液體富硒培養(yǎng)基中對硒的富集特性Table 11. Seaccumulated characteristics of Flammulina velutipes () in the seleniumenriched medium 培養(yǎng)液硒 濃度 (μg/L) 生物量 干重 (g/100mL) 菌絲體的 吸光值 菌絲體 含硒量 (μg/g) 硒含量 提高倍數(shù) 硒回收率 （％） CK 5 10 15 20 25 30 40 注：每個硒濃度梯度下，均取 干重進行測吸收值。 圖 8:金針菇 201 誘變 10min 菌種 菌絲體含硒量和干重與硒濃度梯度的曲線圖 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 20 Curves of the selenium and dry weight of mycelium of Flammulina velutipes () in different selenium concentration gradient 由表 11 和圖 8 可知， 金針菇 201 誘變 10min 菌種 在富硒 CM 液體培養(yǎng)基上 具有較強的富硒能力。菌絲體的富硒能力 和干重 隨著硒濃度的增加而 上下波動 。 在培養(yǎng)基硒含量為 5μg/L 時 ， 菌絲體富硒能力遠高于其他 硒濃度 梯度。針對菌絲球干重， 它也是在 所測的硒濃度范圍內(nèi)，隨著硒濃度的提高而 出現(xiàn)兩個峰值 ，在10 和 30μg/L 時出現(xiàn)峰值， 兩峰值大致相等 ?？梢?適宜 濃度硒含量的發(fā) 酵液有助于 金針菇 201 誘變 10min 菌種 的生長及其富硒能力的提高。隨著培養(yǎng)基硒濃度梯度的增加，硒的回收率呈 典型 下降趨勢。 因此， 金針菇 201 誘變 10min 菌種 在培養(yǎng)基含硒量為 5μg/L 的時候，富硒能力最強，即 ； 在 培養(yǎng)基含硒量為 30μg/L 的時候，生長速度均達到最大，即 。 較好的 育種方案是選擇 含硒量為 5μg/L 的 培養(yǎng)基進行培養(yǎng) 金針菇 201 誘變10min 菌種 菌絲體 ，此時其生長速度、 富硒能力 和硒回收率 都達到較為不錯的水平 。 金針菇在平板富硒培養(yǎng)中的特性 金針菇 菌絲 在平板上 培 養(yǎng) 、干燥 后 ，使用紫外分光光度法測定其單位質(zhì)量下的含硒量。 硒含量的測定，我使用 玻璃比色皿制作的 標準曲線， 標準曲線的 數(shù)據(jù)表格及曲線圖見表 1 和圖 1， 通過吸收值計算 含硒量 ，進而得到 計算硒提高倍數(shù) 。 不同的生物對硒的耐受能力是不同的。本次實驗為了探討金針菇各個菌種對硒的耐受能力，進行了不同含硒量的平板上的培養(yǎng)，考察其相關(guān)生物學特性。 實驗中，針對金針菇 20白色金針菇及其紫外誘變菌種進行了條件優(yōu)化的平板 富硒培養(yǎng)。在 平板 富硒培養(yǎng)中， 我測定了 金針菇菌絲體各個菌株 各個硒濃度梯度的參數(shù) 。 通過測定金針菇菌各個菌種菌絲體的菌落直 徑、菌絲密度、有機物消耗量、菌絲外觀及菌絲直徑范圍等特性，從而反映金針菇各個菌種在平板上富硒培養(yǎng)的不同特性。利用紫外分光光度法測定了金針菇各個菌種各個硒濃度梯度下的富硒能力。 通 過對上述菌株的生長狀況進行了詳細的記錄與觀察，得到不同富硒濃度對金針菇菌絲體的影響的結(jié)論。 實驗中的結(jié)果分別在下列的表格和數(shù)據(jù)圖形中一一列出。 針對平板培養(yǎng)的金針菇菌種，測量其菌絲 直徑， 本實驗采用 鏡臺測微尺校正顯微鏡上的目鏡測微尺 ，具體結(jié)果見表 12。 將菌絲體使用乳酸石炭酸棉藍染色液進行染色。使用該染色液可以提高觀察效果，其中 石炭酸可以起 到殺菌的作用，乳酸是用來保水的，棉蘭是染色的 。將每組所測的 3 個數(shù)據(jù)，換算成菌絲直徑范圍。 富硒金針菇菌株的選育畢業(yè)論文 21 表 12 目鏡 測微尺的校正 Table 12. Calibration of eyepiece micrometer 接物鏡 倍數(shù) 目鏡測微尺 格數(shù) 鏡臺測微尺 格數(shù) 目鏡測微尺 每格代表的長度 (μ m) 4 80 100 10 80 50 40 80 10 注：鏡臺測微尺每格 ，本次實驗我使用 40物鏡測量菌絲直徑。 金針菇在液體富硒培養(yǎng)基中的生長特性 本實 驗 觀察了白色金針菇、金針菇 201 及其誘變菌株在液體富硒培養(yǎng)液中的生長特性 ， 菌落形態(tài)十分明顯 ， 輪廓鮮明， 沒有雜菌菌落， 透出淡淡的香味，表明培養(yǎng)基未被污染。 由表 13 可知： 白色金針菇原種的菌絲體在較低的硒濃度梯度下菌落直徑和有機物消耗量比較大，菌絲密度高，菌絲外觀比較粗壯。當平板富硒濃度達到30μg/L的時候，菌絲的生長受到了明顯的抑制，如菌落直徑只有 %，菌絲外觀也顯得瘦弱。在整個所測的硒濃度梯度范圍內(nèi)， 低濃度的硒能夠促進菌絲直徑的增加 。 白色金針菇誘變 5min 菌種，相比較其原種而言，它在耐硒能力上有了 較為顯著的提高，菌落的直徑都比較大，并且有機物消耗量也較大，菌絲外觀都相對比較粗壯。 其中在 5μg/L的硒濃度時，該菌種生長速度最快，菌絲密度最高，菌絲外觀 粗壯。 菌絲直徑?jīng)]有明顯的變化。 白色金針菇誘變 10min 菌種，在 10μg/L 的硒濃度時，菌落生長較快，菌絲最濃密，菌 絲外觀粗壯。在 30μg/L 的硒濃度時，菌絲生長出現(xiàn)另外一個峰值，然后隨著硒濃度的提高，又呈減弱趨勢?？梢娬T變 10min 后，菌絲生長對硒濃度顯得比較敏感。 高濃度的硒阻礙了菌絲體的生長。 由表 14 可知： 金針菇 201 原種的菌絲體在較低的硒濃度梯度下 生長非常好，菌落直徑和有機物消耗量比較大，菌絲密度高，菌絲外觀比較粗壯。當平板富硒濃度達到以及超過 30μg/L 的時候，菌絲的生長受到了明顯的抑制，菌絲外觀也顯得瘦弱。在低硒濃度時，菌絲直徑相對較高，可見高濃度硒阻礙了菌絲直徑的生長。 金針菇 201 誘變 5min 菌種，相比較其原種而言，它在耐硒能力上敏感性降低了，硒濃度的增加對菌落的直徑、菌絲外觀的影響不明顯。但是在適宜硒濃度下菌絲體的有機物消耗量出現(xiàn)峰值。其中在 5μg/L的硒濃度時，該菌種生長